检索结果-内蒙古大学图书馆

中华疾病控制杂志 2024年第11期28卷 1344-1348,1360页

作者：王雪琪何纳复旦大学公共卫生学院流行病学教研室上海200032

目的为了解成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)检测技术应用于核酸现场即时检测的研究现状。方法以“CRISPR”“nucleic acid detection”“point-of-care testing”或“POCT”为关键词,系统检索公开发表在PubMed、BioRxiv和MedRxiv数据库中的相关文献。结果根据纳入、排除标准,共纳入17篇文献,汇总分析CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated protein,Cas)酶扩增方法、灵敏度、特异性、检测时间等方面信息。本研究结果显示,结合环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)或重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)等核酸扩增方法后,CRISPR检测技术的灵敏度与实时荧光定量聚合酶反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)相当。结论CRISPR检测过程在30~100 min即可完成,检测结果可肉眼读取,且检测成本与抗原检测相当,适用于资源匮乏地区进行大规模的核酸现场即时检测。

关键词：成簇规律间隔短回文重复序列核酸检测即时检测

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实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的构建

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成都医学院学报 2023年第3期18卷 273-277页

作者：谢文娟赵雅妮龙雪麟李淑蓉苏炳银谭泓琳成都医学院发育与再生四川省重点实验室成都610500 成都医学院组织学与胚胎学教研室成都610500 成都医学院病理与病理生理学教研室成都610500

目的通过髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG_(35-55))多肽两次免疫C57BL/6J小鼠,构建实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型。方法将8周龄C57BL/6J雌性小鼠按随机数字表法分为EAE组和对照组,每组10只。EAE组采用MOG_(35-55)多肽与完全弗式佐剂... 详细信息

目的通过髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG_(35-55))多肽两次免疫C57BL/6J小鼠,构建实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型。方法将8周龄C57BL/6J雌性小鼠按随机数字表法分为EAE组和对照组,每组10只。EAE组采用MOG_(35-55)多肽与完全弗式佐剂混合后的抗原乳剂,于小鼠双侧腹股沟和后肢分4点皮下注射,首次免疫后6 d注射相同剂量的抗原乳剂加强免疫,并且于首次免疫后0、48 h腹腔注射百日咳毒素;对照组采用不含MOG_(35-55)多肽的CFA,其余方法同EAE组。观察两组小鼠的行为学表现并进行神经功能评分;免疫后第19天,取两组小鼠的脑和脊髓组织进行Black Gold髓鞘染色和髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫荧光染色,检测其脱髓鞘情况;小胶质细胞特异性标志物(Iba-1)免疫荧光染色检测两组脑和脊髓组织中小胶质细胞的增殖活化情况。结果 EAE组小鼠在首次免疫后第12天左右开始发病,第19天症状达到高峰,随后开始缓解,发病率为100%,而对照组小鼠只在首次免疫后第14天出现短暂的尾巴无力症状。Black Gold髓鞘染色和MBP免疫荧光染色显示,EAE组小鼠脑和脊髓均出现脱髓鞘;Iba-1免疫荧光染色显示,EAE组小鼠脑和脊髓均出现小胶质细胞增殖活化;而对照组小鼠脑和脊髓并未出现脱髓鞘和小胶质细胞的增殖活化。结论 MOG_(35-55)两次免疫C57BL/6J小鼠,成功构建发病率高的EAE模型,为多发性硬化症的致病机制研究和药物开发奠定基础。

关键词：多发性硬化症实验性自身免疫性脑脊髓炎髓鞘少突胶质细胞糖蛋白脱髓鞘

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基于CRISPR/Cas9n技术建立携带mT-F2A-EGFP报告系统的小鼠胚胎干细胞系

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上海交通大学学报（医学版） 2023年第4期43卷 417-427页

作者：王靖怡王琼上海交通大学基础医学院组织胚胎学与遗传发育学系上海市生殖医学重点实验室上海市细胞稳态调控与疾病前沿科学研究基地上海200025

目的·通过CRISPR/Cas9n(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9 nickase)介导的同源定向修复(homologous-directed repair,HDR)技术在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)的中内胚层关键调控分子T-box转录因子Brachyury(即T基因)末端依次敲入手足口病毒2A(foot-and-mouth disease virus 2A,F2A)和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)以建立T荧光报告细胞系(mTF2A-EGFP)。方法·首先,针对T基因构建特异性单链导向RNA(single guide RNA,sgRNA)质粒和包含F2A-EGFP的供体质粒。利用电穿孔将这2种质粒递送到mESC E14Tg2a(E14)内,通过HDR在T基因末端插入F2A-EGFP。然后,通过药物筛选和基因测序验证所获得的单克隆细胞,并将其诱导形成类胚体(embryonic body,EB)进行分化。通过荧光显微镜和流式细胞技术分别监测mT-F2A-EGFP细胞克隆在分化前后的荧光信号变化,并进行实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)来检测多能性标志基因、中内胚层以及外胚层标志基因的转录水平变化。同时,检测克隆细胞的周期、生长曲线,并利用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)染色检测候选克隆干细胞特性。最后,挑选克隆细胞系T1进行了EB分化。利用流式细胞技术分选出分化细胞群中EGFP荧光表达细胞(EGFP+)和无荧光表达的细胞(EGFP-),并检测各谱系基因的表达情况。结果·EGFP被正确插入到E14细胞的T基因,其荧光强度能正确反映T基因表达水平且未产生明显的不良反应。当T1报告克隆分化时,通过流式细胞技术分选出的包含mT-F2A-EGFP的荧光细胞主要高表达中内胚层标志基因。结论·成功构建携带mT-F2A-EGFP的mESC,可实现对T基因调控程度的快速监测,并实时追踪分化过程中表达T基因标记EGFP的中内胚层细胞。

关键词：小鼠胚胎干细胞 CRISPR/Cas9n 中内胚层分化增强绿色荧光蛋白报告基因 Brachyury 手足口病毒2A

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基于网络药理学探讨表没食子儿茶素没食子酸酯治疗阿尔茨海默病的作用机制

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中国当代医药 2023年第32期30卷 9-13,F0004页

作者：郎尉雅张可爽张晨曦李林张海燕齐齐哈尔医学院组织学与胚胎学教研室黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院基础医学院黑龙江齐齐哈尔161006

目的基于网络药理学探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)治疗阿尔茨海默病(AD)的相关作用靶点及主要信号通路,探讨其治疗AD的可能作用机制。方法通过Pubchem数据库筛选EGCG活性成分及作用靶点;通过利用Genecards数据库和人类孟德尔遗传... 详细信息

目的基于网络药理学探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)治疗阿尔茨海默病(AD)的相关作用靶点及主要信号通路,探讨其治疗AD的可能作用机制。方法通过Pubchem数据库筛选EGCG活性成分及作用靶点;通过利用Genecards数据库和人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索AD的基因靶点,将疾病靶点与药物作用靶点融合找出交集靶点。在String平台利用EGCG的靶标基因与AD靶标基因的交集基因构建蛋白相互作用(PPI),运用Cytoscape 3.7.2软件构建“EGCG-成分-靶点”网络,通过Metascape等数据库进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,最后采用AutoDock Vina软件进行分子对接。结果获得EGCG有效成分和作用靶点有171个,其中与AD相关的靶点95个。EGCG改善AD病理变化的核心靶点主要集中在AKT1、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)-6等蛋白上。这些靶点涉及信号通路169条,包括磷脂酰肌醇3-羟激酶(PI3K)/Akt信号通路、低氧诱导因子(HIF)-1信号通路、促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路、Ras信号通路等。分子对接结果显示:核心成分与关键靶点具有良好的结合力。结论EGCG治疗AD的潜在生物学作用机制可能是通过调控TNF等信号通路的活性,改善海马神经元细胞的损伤,减轻Aβ沉积,Tau蛋白过度磷酸化从而延缓AD的发生。

关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯阿尔茨海默病作用机制网络药理学

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“与时俱进”的医学免疫学实验教学改革探索

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细胞与分子免疫学杂志 2025年第2期41卷 188-190页

作者：席文锦郑国旭郭张燕张瑞空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

作为生命科学与医学领域的前沿学科,医学免疫学发展迅速,免疫学实验作为理论与实践的关键衔接,在培养学生严谨的逻辑思维能力及独立的实践操作能力方面发挥重要作用。通过对现有教学过程的分析,找出问题与不足,我们按照与时俱进的步伐,... 详细信息

作为生命科学与医学领域的前沿学科,医学免疫学发展迅速,免疫学实验作为理论与实践的关键衔接,在培养学生严谨的逻辑思维能力及独立的实践操作能力方面发挥重要作用。通过对现有教学过程的分析,找出问题与不足,我们按照与时俱进的步伐,对免疫学实验教学做出调整,通过教学内容的改革、教学模式的改革及实验课前的准备对免疫学实验教学进行探索,以提高学生学习兴趣及主动性,提高教学质量。

关键词：医学免疫学实验教学教学改革教学模式

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大气污染对抑郁症的影响及其潜在作用机制的研究进展

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环境与职业医学 2024年第4期41卷 457-465页

作者：李靖宇杨文慧徐燕意复旦大学公共卫生学院环境卫生学教研室上海200032

大气污染是威胁人类健康的全球性问题。近年来,越来越多的研究发现,大气污染与抑郁症的发生密切相关。抑郁症是一种严重的神经精神疾病,其发病率逐年攀升,已成为威胁人类健康的隐形杀手。目前,大气污染与抑郁症的相关性研究仍十分有限,... 详细信息

大气污染是威胁人类健康的全球性问题。近年来,越来越多的研究发现,大气污染与抑郁症的发生密切相关。抑郁症是一种严重的神经精神疾病,其发病率逐年攀升,已成为威胁人类健康的隐形杀手。目前,大气污染与抑郁症的相关性研究仍十分有限,大气污染影响抑郁发生的分子机制也尚不明确。本文基于国内外现有的流行病学和毒理学研究,针对大气污染与抑郁症的关系及其可能的生物学机制进行综述,重点阐述了大气污染与抑郁结局指标之间的关系以及大气污染物种类、暴露时间、研究对象的年龄及健康状况等影响抑郁的可能因素,并总结归纳了神经炎症、氧化应激、神经发生、细胞凋亡等机制在空气污染导致抑郁过程中可能发挥的潜在作用,以期为大气污染的防控与抑郁症的预防和治疗提供科学依据。

关键词：大气污染细颗粒物抑郁症分子机制

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IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路增强小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第1期40卷 13-18页

作者：华梦晴高培宇方芳苏浩宇宋传旺蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激... 详细信息

目的探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下,再加入IL-6(10 ng/mL~500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后,采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况;Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果鼻腔滴入LPS后,小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加,MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强,Arp2、 F-actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后,p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后,IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失,IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。

关键词：白细胞介素6(IL-6) MH-S细胞吞噬功能 Janus激酶2(JAK2) 信号转导子与转录激活子3(STAT3) 肺泡巨噬细胞

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低氧化应激下肿瘤坏死因子α过表达对牙髓干细胞生物学性能的影响

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解剖学报 2022年第1期53卷 66-74页

作者：李伟杨赣军彭建安胡红梅周星辰井冈山大学医学部口腔系井冈山大学医学部组织学与解剖学教研室江西吉安343000

目的探讨低氧化应激下肿瘤坏死因子α(TNF-α)过表达对牙髓干细胞(DPSCs)生物学性能的影响。方法实验分组为常氧DPSCs组、常氧空载转染组、常氧TNF-α过表达组、DPSCs 3%O_(2)组、空载DPSCs 3%O_(2)组、TNF-α过表达3%O_(2)组。牙髓干... 详细信息

目的探讨低氧化应激下肿瘤坏死因子α(TNF-α)过表达对牙髓干细胞(DPSCs)生物学性能的影响。方法实验分组为常氧DPSCs组、常氧空载转染组、常氧TNF-α过表达组、DPSCs 3%O_(2)组、空载DPSCs 3%O_(2)组、TNF-α过表达3%O_(2)组。牙髓干细胞复苏并培养,然后将慢病毒TNF-α转染细胞置于37℃、CO_(2)培养箱培养,ELISA法检测各组细胞TNF-α的表达水平,RT-PCR检测TNF-α过表达氧化应激作用下的表达,Real-time PCR、Western blotting检测氧化应激作用下人DPSCs碱性磷酸酶(ALP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)表达和MTT检测各组细胞TNF-α转染后细胞增殖情况。结果Lentivirus-TNF-α转染细胞10 h后,即可在倒置荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,TNF-α过表达可以使低氧环境中牙髓干细胞增殖能力增强,且低氧的微环境可以增加TNF-α的表达,使DPSCs可以进一步的表达TNF-α,而且TNF-α过表达3%O_(2)时,Western blotting和Real-time PCR检测都表明DPSCs中ALP、DSPP表达差异具有显著性(P<0.05)。结论低氧微环境中DPSCs过表达TNF-α可以同时提高增殖效率和较高的分化效果。

关键词：低氧化肿瘤坏死因子-α 牙髓干细胞免疫印迹法人

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小分子化合物在神经元重编程中的应用研究进展

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生理学报 2025年第1期77卷 181-193页

作者：戴子为刘红袁一旻张静宜秦尚尧苏志达海军军医大学基础医学院神经生物学教研室分子神经生物学教育部重点实验室上海200433 海军军医大学麻醉系疼痛治疗学研究室上海200433

神经元重编程是将非神经元成体细胞转分化为神经元的一项创新性技术,能够补充、替代丢失或受损的神经元,为中枢神经系统再生修复提供了一种潜在的有效策略。在细胞内高表达转录因子是诱导神经元重编程一种常用的重要手段,但其重编程效... 详细信息

神经元重编程是将非神经元成体细胞转分化为神经元的一项创新性技术,能够补充、替代丢失或受损的神经元,为中枢神经系统再生修复提供了一种潜在的有效策略。在细胞内高表达转录因子是诱导神经元重编程一种常用的重要手段,但其重编程效率比较低,且导入外源基因可能引起宿主基因组不稳定或诱发基因突变,从而限制了它们未来的临床转化应用。相对于转录因子,小分子化合物在神经元重编程领域具有得天独厚的优势,能够克服传统转录因子诱导神经元重编程的诸多局限性,具有更好的应用前景。本文就近年来小分子化合物介导的神经元重编程的相关研究进展及其在中枢神经系统再生修复中的应用进行简要综述。

关键词：小分子化合物神经元重编程中枢神经系统神经再生修复

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弹性蛋白酶调节中性粒细胞炎性募集的功能研究

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中国免疫学杂志 2024年第3期40卷 449-455页

作者：刘洋孟玲范思佳任春光张欢重庆医科大学基础医学院细胞与遗传教研室发育生物学研究室重庆400016

目的:探索中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对中性粒细胞炎性募集的影响。方法:采用外源性弹性蛋白酶抑制剂西维来司钠盐预处理小鼠骨髓来源的中性粒细胞,通过腹膜炎过继性迁移、细胞体外趋化、流动室黏附、免疫荧光染色、细胞伸展等实验,检测N... 详细信息

目的:探索中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对中性粒细胞炎性募集的影响。方法:采用外源性弹性蛋白酶抑制剂西维来司钠盐预处理小鼠骨髓来源的中性粒细胞,通过腹膜炎过继性迁移、细胞体外趋化、流动室黏附、免疫荧光染色、细胞伸展等实验,检测NE的抑制对中性粒细胞体内炎性募集、体外趋化、牢固黏附、细胞极化与伸展能力的影响;利用流式细胞术及鲁米诺化学发光系统检测NE的抑制对中性粒细胞吞噬及活性氧(ROS)释放能力的影响。结果:西维来司钠盐预处理显著减弱了中性粒细胞体内炎性募集(P<0.001);减弱了中性粒细胞在体外趋化过程中对催化剂方向性的感知(P<0.05),减慢了趋化速率(P<0.05),降低了趋化距离(P<0.05);减少了中性粒细胞在炎性内皮细胞表面形成牢固黏附的能力(P<0.000 1),抑制了中性粒细胞对细菌的吞噬能力(P<0.01);但对中性粒细胞的伸展、极化及ROS的释放均无显著影响。结论:NE的抑制显著损害了中性粒细胞在体内外的炎性募集级联反应及吞噬作用,但对中性粒细胞的伸展、极化、ROS释放等功能无显著影响。

关键词：中性粒细胞弹性蛋白酶西维来司钠盐炎性募集

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