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肥胖伴慢性束缚应激小鼠血压升高与孤束核去甲肾上腺素能神经元损伤的关系研究

四川大学学报（医学版） 2022年第1期53卷 77-82页

作者：王森甲郑翔毕文杰周雪四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院基础医学专业实验室成都610041 成都医学院人体解剖与组织胚胎学教研室成都610500

目的探讨肥胖伴慢性束缚应激(chronic restraint stress,CRS)是否致小鼠血压升高及其与孤束核中间部(iNTS)损伤的关系。方法制作CRS小鼠模型,将51只小鼠分为低脂非束缚组(LF组)、低脂束缚组(LS组)、高脂非束缚组(HF组)、高脂束缚组(HS组... 详细信息

目的探讨肥胖伴慢性束缚应激(chronic restraint stress,CRS)是否致小鼠血压升高及其与孤束核中间部(iNTS)损伤的关系。方法制作CRS小鼠模型,将51只小鼠分为低脂非束缚组(LF组)、低脂束缚组(LS组)、高脂非束缚组(HF组)、高脂束缚组(HS组);7 d束缚+3 d自由活动为一个周期,共4个周期(40 d);每个周期中第9天时检测小鼠体质量、并测量动脉收缩压,实验第40天时处死各组小鼠后取脑组织行免疫组织化学染色及免疫印迹检测胶质纤维状酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达,取附睾脂肪垫免疫印迹检测血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor,VEGFA)蛋白表达(代表脂肪组织血管密度)。结果在第40天时,HS组小鼠动脉收缩压明显高于其他三组小鼠,高脂喂养组(HF组和HS组)体质量增长明显;各组小鼠VEGFA蛋白表达差异无统计学意义;束缚组(LS组和HS组)小鼠脑组织iNTS星形胶质细胞活化,HS组iNTS TH表达减少;HF组、LS组小鼠血压均无异常变化;HS组血压普遍升高,其中37.5%小鼠出现高血压(动脉收缩压≥140 mmHg,1 mmHg=0.133 kPa)。结论肥胖伴慢性束缚应激可致小鼠动脉血压升高,且其机制与孤束核去甲肾上腺素能神经元损伤有关。

关键词：慢性束缚应激高脂饮食去甲肾上腺素能神经元孤束核

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胃化学性炎性痛时幽门括约肌内肠神经系统神经递质的变化

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同济医科大学学报 2001年第4期30卷 307-309,F003页

作者：李琴胡道松茹立强华中科技大学同济医学院基础医学院神经生物学教研室武汉430030

为探讨大鼠幽门括约肌在化学性炎性痛时氮能和胆碱能神经元的变化 ,采用还原型辅酶和亚铁氰化铜直接显色的组织化学法 ,分别显示一氧化氮合酶 (NOS)和乙酰胆碱酯酶 (ACh E)阳性神经元成分及甲醛诱发胃痛后 2种神经元成分的变化。结果... 详细信息

为探讨大鼠幽门括约肌在化学性炎性痛时氮能和胆碱能神经元的变化 ,采用还原型辅酶和亚铁氰化铜直接显色的组织化学法 ,分别显示一氧化氮合酶 (NOS)和乙酰胆碱酯酶 (ACh E)阳性神经元成分及甲醛诱发胃痛后 2种神经元成分的变化。结果显示 :甲醛致胃炎性痛时大鼠幽门括约肌粘膜下丛及肌间神经丛 NOS和 ACh E阳性神经成分活性均降低 ,仅于括约肌肠侧端或胃侧端偶见单个分布的 2种酶弱阳性胞体 ,肌内 2种神经纤维数减少 ,酶活性也弱。图像分析肌内 NOS和 ACh E阳性神经纤维活性平均光密度 ,甲醛组比对照组均显著降低 (P<0 .0 1)。提示在甲醛引起的胃急性化学性炎性痛时肠神经系统中 NO-和

关键词：一氧化氮合酶乙酰胆酯酶肠神经系统大鼠幽门括约肌化学性炎性胃痛

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肉桂酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响

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中国药理学通报 2012年第9期28卷 1262-1266页

作者：王国红郭直岳石松林李祺福新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 厦门大学医学院基础医学部福建厦门361005

目的研究中药有效成分肉桂酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响。方法肉桂酸处理MG-63细胞前后,台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞仪检测细胞周期时相变化;光镜和电镜观察细胞形态和超微结构;VanGieson染色检测细胞Ⅰ型胶原表达;... 详细信息

目的研究中药有效成分肉桂酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响。方法肉桂酸处理MG-63细胞前后,台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞仪检测细胞周期时相变化;光镜和电镜观察细胞形态和超微结构;VanGieson染色检测细胞Ⅰ型胶原表达;茜素红染色观察钙化骨结节形成;免疫细胞化学检测骨粘素和骨钙蛋白表达。结果肉桂酸明显抑制MG-63细胞增殖,D7抑制率达54.94%±4.69%。周期分析结果显示,肉桂酸处理后G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P<0.01)。光镜和电镜结果显示,肉桂酸处理组MG-63细胞形态和超微结构发生明显改变,呈现相应正常细胞的形态和超微结构特征。肉桂酸促进成骨细胞分化标志物Ⅰ型胶原、骨粘素和骨钙蛋白的表达与钙沉积以及典型骨结节的形成。结论肉桂酸可抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖并诱导其向成骨细胞分化。

关键词：肉桂酸人骨肉瘤MG-63细胞增殖分化骨肉瘤成骨细胞

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BNIP3干扰质粒的构建及鉴定

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南方医科大学学报 2010年第11期30卷 2432-2435页

作者：陈明张兴梅李勃兴孙红宇李晓文高天明南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广东广州510515 南方医科大学基础医学院生理学教研室广东广州510515

目的构建大鼠Bcl-2/E1B-19K-interacting protein 3(BNIP3)干扰质粒,研究其对BNIP3蛋白表达水平的影响。方法利用Invitrogen公司在线软件设计大鼠BNIP3(NM_053420)干扰片段,合成互补的单链寡核苷酸,蒋退火后形成的双链克隆入pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR表达载体,连接产物转化感受态细胞,增菌,质粒小量提取并测序。将构建的干扰质粒与大鼠BNIP3表达质粒共转染到HEK293细胞中,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测对目的基因的干扰情况。结果构建的2个干扰质粒经测序证实序列正确,与BNIP3表达质粒共转染后显著抑制外源性BNIP3的mRNA和蛋白表达。结论成功构建了大鼠BNIP3干扰质粒,为进一步研究BNIP3的功能打下了基础。

关键词： BNIP3 RNA干扰 HEK293

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成年大鼠纹状体海人藻酸损伤后nestin的表达

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中国神经科学杂志 2004年第6期20卷 432-436页

作者：姚瑞芹徐铁军张凤真徐州医学院解剖学和神经生物学教研室江苏徐州221002

目的　研究成年大鼠纹状体海人藻酸 (kainicacid,KA)损伤后不同时间点nestin的表达并探讨其机制。方法　向成年SD大鼠纹状体内立体定位注射 0 .5 μlKA(1mg/ml) ,分别于手术后第 1、3、7、14天用免疫组织化学法检测纹状体内nestin表达... 详细信息

目的　研究成年大鼠纹状体海人藻酸 (kainicacid,KA)损伤后不同时间点nestin的表达并探讨其机制。方法　向成年SD大鼠纹状体内立体定位注射 0 .5 μlKA(1mg/ml) ,分别于手术后第 1、3、7、14天用免疫组织化学法检测纹状体内nestin表达的变化。结果　正常纹状体内可观察到微弱的淡染nestin样免疫活性阳性细胞 ;大鼠纹状体KA损伤后 1d ,nestin样免疫活性增强 ;第 3天nestin样免疫活性达峰值 ,nestin样免疫活性阳性细胞的胞体肥大 ,突起粗大 ,分支增加 ;此后nestin样免疫活性阳性细胞染色强度减弱 ,其胞体和突起逐渐变小变细。结论　成年大鼠纹状体内注射海人藻酸可诱导nestin的大量表达 ,该表达可能与脑损伤后的自身修复相关。

关键词：海人藻酸大鼠巢蛋白免疫组化

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梅毒螺旋体TpN17与TpN47表位肽融合抗原的重组表达及其酶联免疫吸附试验的建立和应用

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生物工程学报 2009年第8期25卷 1187-1194页

作者：孙爱华范兴丽沈香娣汤仁仙严杰浙江医学高等专科学校基础医学部杭州310053 徐州医学院病原生物学教研室徐州221002 浙江大学医学院病原生物学系杭州310058

以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成... 详细信息

以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成的人工基因片段tpE17-47,然后构建了全长tpN17、tpN47基因以及tpE17-47融合基因的原核表达系统。SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查结果显示,所构建的原核表达系统能稳定表达目的重组蛋白rTpN17、rTpN47和rTpE17-47,其产量分别约占细菌总蛋白的36%、20%和28%。采用Ni-NTA亲和层析法提纯的rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白经SDS-PAGE分析,均显示为单一的蛋白条带。Western blotting结果表明,rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白均可被梅毒抗体阳性的病人血清所识别。以rTpE17-47为包被抗原的rTpE17-47-ELISA检测630例临床确诊梅毒患者血清标本的阳性率为98.6%,仅略高于TPPA(97.9%)(P>0.05),但明显高于rTpN17-ELISA(83.8%)、rTpN47-ELISA(83.3%)和RPR(72.1%)(P<0.01)。上述ELISAs和TPPA对25例SLE、36例RA患者和250例健康体检者的血清标本检测结果均为阴性,但RPR分别有1、2和2例标本检测结果为阳性。本试验成功地构建了rTpE17-47抗原表位融合基因及其高效原核表达系统,所建立的rTpE17-47-ELISA可作为一种快速、简便、安全、敏感和特异的梅毒血清学筛查或诊断新方法。

关键词：梅毒螺旋体抗原表位融合基因重组表达酶联免疫吸附试验

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CGRP及NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白磷酸化的影响

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解剖学报 2008年第2期39卷 165-169页

作者：张正洪席刚明李文春黄铁柱方秀斌郧阳医学院附属人民医院神经内科郧阳医学院解剖学教研室十堰442000 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳110001

目的探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)及神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法用线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化... 详细信息

目的探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)及神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法用线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western blotting和图像分析方法检测大鼠手术侧海马CA1区CREB和p-CREB表达。结果缺血再灌注组海马CA1区CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组(P<0.05);CGRP组和NGF组CA1区的CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组(P<0.05);CGRP与NGF联合应用时CREB和p-CREB表达分别高于CGRP组和NGF组(P<0.05)。结论CGRP及NGF上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和p-CREB的表达,CGRP与NGF联合应用则作用更强,CGRP及NGF对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,CGRP与NGF对缺血神经元的保护有协同作用。

关键词：脑缺血降钙素基因相关肽神经生长因子海马 c—AMP反应元件结合蛋白免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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大白鼠脊髓后角内乙酰胆碱M受体与体感一级传入的关系

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同济医科大学学报 1994年第2期23卷 90-92,163页

作者：张坚刘晓春关新民艾民康同济医科大学基础医学院神经生物学教研室武汉430030

为了进一步研究乙酰胆碱（ＡＣｈ）与体感一级传入的关系，用大白鼠脊髓后角内乙酰胆碱毒蕈碱受体（Ｍ．ＡＣｈＲ）放射自显影银粒的分布与数量变化为观察指标进行了分析研究，结果发现：①脊髓后角浅层有Ｍ．ＡＣｈＲ（＾３Ｈ－二苯羟... 详细信息

为了进一步研究乙酰胆碱（ＡＣｈ）与体感一级传入的关系，用大白鼠脊髓后角内乙酰胆碱毒蕈碱受体（Ｍ．ＡＣｈＲ）放射自显影银粒的分布与数量变化为观察指标进行了分析研究，结果发现：①脊髓后角浅层有Ｍ．ＡＣｈＲ（＾３Ｈ－二苯羟乙酸奎宁酯；＾３Ｈ－ＱＮＢ结合位点），其分布与抗氟化钠酸性磷酸酶（ＦＲＡＰ）和乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）一致；②切断一侧后根５ｄ，术侧后角浅层ＦＲＡＰ明显减少。

关键词：乙酰胆碱受体脊髓放射自显影术

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通过抑制β-淀粉样前体蛋白裂解酶1影响淀粉样前体蛋白通路的相关研究进展

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中华神经科杂志 2013年第12期46卷 856-857页

作者：梁惠玉张兴梅南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广州510515

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是常见的中枢神经系统退行性疾病，以进行性认知和执行功能障碍为主要临床特征，是导致痴呆的主要原因。迄今，淀粉样蛋白（Aβ）沉积假说仍是AD发病的中心环节。β-淀粉样前体蛋白裂解酶1（BA... 详细信息

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是常见的中枢神经系统退行性疾病，以进行性认知和执行功能障碍为主要临床特征，是导致痴呆的主要原因。迄今，淀粉样蛋白（Aβ）沉积假说仍是AD发病的中心环节。β-淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）是Aβ产生的限速酶。我们综述近年BACE1抑制剂在AD治疗的基础与临床研究方面取得的进展，为更好地开发AD临床药物提供参考。

关键词：淀粉样前体蛋白蛋白裂解酶 β-淀粉样中枢神经系统退行性疾病通路阿尔茨海默病执行功能障碍淀粉样蛋白

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CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织Erk表达的调节作用

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解剖学杂志 2004年第5期27卷 489-492,i001页

作者：邢雪松方秀斌沈阳医学院解剖学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室

目的 :检测大鼠脑缺血再灌注后细胞外调节蛋白激酶 (Erk)的表达 ,探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)和神经生长因子 (NGF)对脑组织的保护作用及机制。方法 :采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组织化学SABC法及显微图... 详细信息

目的 :检测大鼠脑缺血再灌注后细胞外调节蛋白激酶 (Erk)的表达 ,探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)和神经生长因子 (NGF)对脑组织的保护作用及机制。方法 :采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组织化学SABC法及显微图像分析检测海马及皮质内Erk的表达。结果 :大鼠缺血再灌注海马及皮质内Erk免疫反应阳性产物较正常组增多 (P <0 .0 5 ) ,而注射CGRP或NGF后阳性产物明显高于缺血再灌注组 (P <0 .0 1 ) ,二者联合应用效果更加显著 (P <0 .0 5 )。结论 :CGRP及NGF参与缺血神经元Erk的调节。

关键词： CGRP NGF 大鼠表达脑组织全脑缺血再灌注缺血神经元结论参与产物

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