检索结果-内蒙古大学图书馆

现代肿瘤医学 2017年第1期25卷 1-5页

作者：马腾薛一雪中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110122

目的:研究微小RNA(microRNA,miRNA)miR-200b是否介导血肿瘤屏障(blood-tumor barrier,BTB)通透性增加。方法:测量跨内皮阻抗值(TEER)、辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析血脑屏障(bloodbrain barrier,BBB)和BTB通透性的改变,应用Real-time PCR检测血脑屏障BBB和BTB大鼠脑微血管内皮细胞(rat cerebral microvascular endothelial cell RCMEC,ECs)miR-200b的表达,应用miR-200b agomir和miR-200b antagomir分别转染GECs(ECs和U87脑胶质瘤细胞共培养的细胞)后分析血肿瘤屏障的通透性改变;应用Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1(zonula occludens-1)的表达;应用免疫荧光方法观察GECs紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白(filamentous actin,F-actin)结构和分布的改变。结果:与BBB相比,BTB的TEER值显著降低,HRP显著升高;与BBB的ECs相比,GECs内源性miR-200b表达显著降低;miR-200b agomir和miR-200b antagomir成功转染到GECs中;miR-200b agomir组TEER值显著升高,HRP流量显著降低,以及ZO-1表达显著升高,抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,F-actin分布于细胞边缘明显增加,应力纤维形成明显减少;miR-200b antagomir结果与miR-200b agomir实验结果相反。结论:MiR-200b介导BTB通透性增加。

关键词： miR-200b 血脑屏障血肿瘤屏障 ZO-1 肌动蛋白重排

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对胶质瘤干细胞的研究进展

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当代医药论丛 2017年第4期15卷 97-98页

作者：符海华张宇琼孔志敏卜鑫磊经历李风徐州医科大学江苏徐州221004 徐州医科大学基础医学院细胞生物学与神经生物学教研室江苏徐州221004

胶质瘤是临床上最为常见的一种侵袭性颅内原发性肿瘤。此病是最难治愈的中枢神经系统疾病之一。近年来,临床上常联合应用胶质瘤切除术、放疗和化疗对胶质瘤患者进行治疗,虽取得了一定的疗效,但患者的预后仍较差,且极易出现病情复发的情... 详细信息

胶质瘤是临床上最为常见的一种侵袭性颅内原发性肿瘤。此病是最难治愈的中枢神经系统疾病之一。近年来,临床上常联合应用胶质瘤切除术、放疗和化疗对胶质瘤患者进行治疗,虽取得了一定的疗效,但患者的预后仍较差,且极易出现病情复发的情况。接受上述联合治疗患者的生存期约为15个月[1]。有研究指出,胶质瘤干细胞(glioma stem cell,GSC)是导致胶质瘤患者病情复发的根源。这一理论的提出为临床上治疗胶质瘤提供了新的思路。GSC已成为目前临床上胶质瘤研究中的热点之一。最新的临床研究证实,GSC介导了胶质瘤肿瘤细胞的异质性、耐药性,且与患者的预后密切相关。

关键词：胶质瘤胶质瘤干细胞异质性耐药性疗效

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IL-2抑制小鼠CD4^+ CD62L^+ T细胞分化为Th17细胞

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基础医学与临床 2016年第1期36卷 19-23页

作者：周骏王婷姚瑞芹曲学彬徐州医学院基础医学院细胞生物学与神经生物学教研室江苏徐州221009

目的研究IL-2对小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞在体外向Th17细胞分化的作用。方法免疫磁珠法分选C57BL/6小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,于抗体包被的培养板中培养3 d,实验分为对照组和IL-2处理组。对照组为经典Th17诱导分化培养基,IL-2处理组在对... 详细信息

目的研究IL-2对小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞在体外向Th17细胞分化的作用。方法免疫磁珠法分选C57BL/6小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,于抗体包被的培养板中培养3 d,实验分为对照组和IL-2处理组。对照组为经典Th17诱导分化培养基,IL-2处理组在对照组基础上于培养体系中添加IL-2。CFSE染色检测细胞增殖,Annexin V-PI法检测细胞凋亡,ELISA检测培养上清中IL-17A的浓度,荧光定量PCR检测Rorγt mRNA的表达,流式细胞术检测CD4^+IL-17^+Th17的生成比例以及Rorγt的表达。结果磁珠分选的小鼠脾脏CD4+CD62L+nave T细胞纯度高于95%。与对照组相比,IL-2处理组细胞数目明显增多,增殖能力明显增强(P<0.05),细胞凋亡比例降低(P<0.05);IL-2处理组培养上清中IL-17A的浓度明显降低(P<0.05),且CD4+IL-17+细胞比例下降,其特异性转录因子Rorγt的表达水平也显著降低(P<0.05)。结论 IL-2在CD4+CD62L+T细胞分化为Th17的过程中,能够促进T细胞的增殖并且抑制Th17的分化。

关键词： IL-2 Th17 增殖分化

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兴奋抑制间错配的多样性是大鼠听皮层局部功能异质性的基础

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科学新闻 2018年第4期 132页

作者： Can Tao Guangwei Zhang Chang Zhou Lijuan Wang Sumei Yan Huizhong Whit Tao Li I.Zhang 周艺熊鹰陆军军医大学基础医学院神经生物学教研室

文章简介皮层神经元在功能特性上具有异质性(多样性)。这种异质性是处理不同类型的感觉信息的基础,但是对于局部神经元群内的功能异质性仍知之甚少。课题组发现大鼠听皮层前区(AAF)5层而非4层的邻近神经元在音调感受野上表现出一种令人... 详细信息

文章简介皮层神经元在功能特性上具有异质性(多样性)。这种异质性是处理不同类型的感觉信息的基础,但是对于局部神经元群内的功能异质性仍知之甚少。课题组发现大鼠听皮层前区(AAF)5层而非4层的邻近神经元在音调感受野上表现出一种令人惊异的高

关键词：异质性听皮层

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应用原位杂交技术研究CLK1在早期鸡胚胎发育中的表达

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畜牧与兽医 2017年第3期49卷 43-46页

作者：刘乙蒙赵海莉齐川任丽莉刘超肖建英锦州医科大学基础医学院发育生物学教研室辽宁锦州121000 锦州医科大学附属第二医院辽宁锦州121000 锦州市妇婴医院检验科辽宁锦州121000 锦州医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁锦州121000 锦州医科大学教务处辽宁锦州121000

试验旨在探讨蛋白激酶CLK1在早期鸡胚胎发育过程中的表达情况。应用分子克隆技术构建CLK1/p MD18-T重组质粒,制备地高辛标记的CLK1 RNA原位杂交探针,利用Real-time PCR和原位杂交技术检测CLK1 mRNA在早期鸡胚胎发育中的表达及分布。Real... 详细信息

试验旨在探讨蛋白激酶CLK1在早期鸡胚胎发育过程中的表达情况。应用分子克隆技术构建CLK1/p MD18-T重组质粒,制备地高辛标记的CLK1 RNA原位杂交探针,利用Real-time PCR和原位杂交技术检测CLK1 mRNA在早期鸡胚胎发育中的表达及分布。Real-time PCR结果显示,CLK1 mRNA在早期鸡胚各时期中均有不同程度的表达;原位杂交结果显示,CLK1的mRNA在鸡胚的不同时期不同部位均有不同程度的表达,且在头部和尾部表达明显。本研究阐明了CLK1在早期鸡胚胎发育过程中的表达及分布,为进一步研究CLK1在鸡胚中的功能及作用机制奠定基础。

关键词： CLK1 早期鸡胚原位杂交

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双丁酰环腺苷酸通过蛋白激酶Wee1B调控小鼠1-细胞期受精卵的发育研究

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中国现代医生 2017年第22期55卷 34-38,F0003页

作者：任丽莉刘超刘乙蒙张苧兮肖建英锦州医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学院发育生物学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学教务处辽宁锦州121001

目的探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)激活剂双丁酰环腺苷酸(dual dibutyryl cyclic AMP,dbc AMP)调控蛋白激酶Wee1B蛋白对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,为进一步研究母源性因子Wee1B在早期胚胎发育过程中的作用提供理论基础。... 详细信息

目的探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)激活剂双丁酰环腺苷酸(dual dibutyryl cyclic AMP,dbc AMP)调控蛋白激酶Wee1B蛋白对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,为进一步研究母源性因子Wee1B在早期胚胎发育过程中的作用提供理论基础。方法将2 mmol/L dbc AMP作用于小鼠1-细胞期受精卵1 h,并显微注射Wee1Bm RNAs,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Wee1B-WT/KD注射组、Wee1B-S15A/D注射组,继续在M16培养基中培养。相差显微镜下观察小鼠受精卵的形态变化和卵裂情况,放射自显影测定各期细胞有丝分裂促进因子(MPF)活性,Western blotting方法检测Wee1B蛋白的表达、CDC2-p Tyr15和Wee1B-p Ser15的磷酸化水平。结果小鼠受精卵在有dbc AMP存在时,G_1、S、G_2和M各细胞周期均检测到磷酸化的Wee1B表达,非磷酸化条带在G_2期和M期才能检测到;各组受精卵卵裂出现时间延迟,卵裂率显著降低;h CG注射后35 h内,MPF活性一直处于低水平,CDC2-p Tyr15磷酸化状态和MPF活性变化趋势相一致。结论dbc AMP激活PKA后,PKA磷酸化Wee1B蛋白的S15位点,Wee1B活性增加,阻滞受精卵分裂,本研究提示Wee1B蛋白的S15位点可能是PKA作用的生理靶点,可以更好地认识早期胚胎发育的分子事件。

关键词： WeelB 双丁酰环腺苷酸蛋白激酶A 有丝分裂促进因子小鼠受精卵

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连续5d快速动眼睡眠剥夺诱发小鼠迟发性抑郁样行为

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南方医科大学学报 2016年第5期36卷 660-664页

作者：陈璐王震王雪敏南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广东广州510515

目的：探讨连续长时间快速动眼睡眠剥夺（5 d）对C57BL/6J小鼠抑郁样行为和杏仁核单胺氧化酶A水平的影响。方法成年雄性C57BL/6J小鼠随机分成空白组、对照组和快速动眼睡眠剥夺组，通过多小平台水环境法建立快速动眼睡眠剥夺模型。睡眠... 详细信息

目的：探讨连续长时间快速动眼睡眠剥夺（5 d）对C57BL/6J小鼠抑郁样行为和杏仁核单胺氧化酶A水平的影响。方法成年雄性C57BL/6J小鼠随机分成空白组、对照组和快速动眼睡眠剥夺组，通过多小平台水环境法建立快速动眼睡眠剥夺模型。睡眠剥夺结束后，于不同时间点采用旷场实验检测各组运动能力，强迫游泳实验和糖水偏好实验检测各组抑郁样行为。之后，取脑分离杏仁核，利用Western Blot和Real-time PCR检测各组单胺氧化酶A的表达水平。结果快速动眼睡眠剥夺后的1~3 d内，睡眠剥夺小鼠运动能力明显下降，第4天可恢复到正常水平；第7~14天强迫游泳实验显示小鼠不动时间延长；糖水偏好率也明显降低。Western blot和Real-time PCR检测发现杏仁核中单胺氧化酶A表达水平明显升高。结论连续长时间快速动眼睡眠剥夺导致小鼠迟发性抑郁样行为，该现象很可能与杏仁核单胺氧化酶水平变化有关。

关键词：快速动眼睡眠剥夺抑郁样行为杏仁核单胺氧化酶

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一种用于宽场荧光显微镜下成像的皮肤厚片免疫荧光染色方法

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解剖学报 2016年第5期47卷 703-708页

作者：任弘毅丁有权李轩漾齐建国四川大学华西基础医学与法医学院组织学胚胎学与神经生物学教研室成都610041

目的通过改良免疫荧光染色方案,使皮肤厚切片能在宽场荧光显微镜下荧光成像。方法选择成年雄性SD大鼠5只,经Zamboni固定液灌注固定后取后肢足底皮肤,冷冻切片,片厚40μm,行神经纤维标志物PGP9.5免疫荧光染色。首先比较染色后用梯度甘油... 详细信息

目的通过改良免疫荧光染色方案,使皮肤厚切片能在宽场荧光显微镜下荧光成像。方法选择成年雄性SD大鼠5只,经Zamboni固定液灌注固定后取后肢足底皮肤,冷冻切片,片厚40μm,行神经纤维标志物PGP9.5免疫荧光染色。首先比较染色后用梯度甘油溶液透明与不经甘油透明对皮肤厚片成像深度的影响;继之在染色后甘油透明的基础上,检测染色前二甲基亚砜(DMSO)处理不同时间(10min、15min和30min)对皮肤背景信号的影响。此外,采用体视显微镜检测梯度甘油透明对切片形态的影响。最后,用上述DMSO-甘油改良染色法进一步对神经纤维其他标志物NF 200和外周蛋白分别进行染色。结果经染色后甘油透明的切片其成像深度显著大于常规染色的切片(P<0.01);在甘油透明的基础上,先用DMSO处理能有效降低皮肤背景着色,时间以15min为佳;梯度甘油处理并不会造成皮肤厚片的形态改变;DMSO-甘油改良染色法也能有效显示皮肤NF200和外周蛋白免疫反应阳性的神经纤维。结论经本改良方法染色的皮肤厚片能在宽场荧光显微镜下良好成像。

关键词：皮肤二甲基亚砜厚组织切片组织光学透明宽场荧光显微术免疫荧光大鼠

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支架蛋白RACK1与蛋白激酶WEE1互作调控胃癌细胞株HGC27增殖的作用研究

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中国现代医生 2017年第23期55卷 29-32,F0003页

作者：任丽莉刘超王一曌刘乙蒙肖建英锦州医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学院发育生物学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学教务处辽宁锦州121001

目的研究活化的蛋白激酶C受体(Receptor for activated protein kinase C,RACK1)与蛋白激酶WEE1互作调控胃癌细胞株HGC27生长增殖及其作用机制。方法采用Lipofect AMINE 2000在HGC27细胞中过表达RACK1,Western blotting检测HGC27细胞中WEE1蛋白表达;免疫共沉淀验证RACK1和WEE1在HGC27细胞内存在相互作用;细胞内免疫荧光观测RACK1与WEE1在HGC27细胞中的表达定位情况。结果过表达RACK1后WEE1在胃癌细胞HGC27中的表达降低,RACK1与WEE1在HGC27细胞内存在相互作用且共定位在细胞质内。结论 RACK1与WEE1共同作用调控胃癌的发生发展过程,为RACK1成为临床上胃癌治疗的潜在靶点提供理论基础和实验依据。

关键词：活化的蛋白激酶C受体 WEE1 胃癌 HGC27细胞

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CEP55慢病毒表达载体构建和U251-CEP55细胞株的建立

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现代生物医学进展 2017年第33期17卷 6422-6426,6421页

作者：金丹李风高玥姬广全高殿帅徐州医科大学附属医院江苏徐州221004 徐州医科大学细胞生物学与神经生物学教研室江苏徐州221004 徐州医科大学基础医学院江苏徐州221004 徐州医科大学临床医学院江苏徐州221004 徐州医科大学解剖学和神经生物学教研室江苏徐州221004

目的:构建CEP55慢病毒表达载体,建立稳定表达CEP55的人脑胶质瘤U251细胞株。方法:使用PCR扩增方法将CEP55基因序列进行扩增,转入质粒中,并整合到载体上,构建重组质粒GV358-CEP55载体。与p Helper 1.0和p Helper 2.0质粒共转染293T细胞... 详细信息

目的:构建CEP55慢病毒表达载体,建立稳定表达CEP55的人脑胶质瘤U251细胞株。方法:使用PCR扩增方法将CEP55基因序列进行扩增,转入质粒中,并整合到载体上,构建重组质粒GV358-CEP55载体。与p Helper 1.0和p Helper 2.0质粒共转染293T细胞使其产生慢病毒,以GV358空载体包装的慢病毒作为对照。显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达强度,确定慢病毒的感染效率。采用病毒梯度稀释法测定病毒滴度。慢病毒感染人胶质瘤细胞株U251后,经嘌呤霉素筛选出稳定表达CEP55基因的细胞株U251-CEP55。q RT-PCR和Western blot两种方法分别检测CEP55 m RNA及蛋白的表达。结果:测序证实慢病毒表达载体GV358-CEP55构建成功;转染293T细胞获得高滴度的病毒。病毒感染U251细胞后,使用嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株U251-CEP55;q RT-PCR和Western blot方法分别检测后发现,U251-CEP55细胞株中CEP55 m RNA和蛋白水平的表达明显高于对照组。结论:成功构建CEP55慢病毒表达载体,获得稳定表达CEP55的人胶质瘤U251细胞株,为CEP55基因功能的探究给予了一定的实验基础。

关键词： CEP55基因慢病毒载体 U251细胞

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