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第三军医大学学报 2012年第19期34卷 2005-2008页

作者：朱进安洪伟赵涌李昱重庆医科大学基础医学院病理学教研室神经科学中心重庆市神经生物学重点实验室重庆400016

目的研究钙视网膜蛋白(calretinin,CR)免疫组织化学染色及胆碱酯酶染色(acetylcholinesterase staining,AchE)在先天性巨结肠(hirschsprung disease,HD)病理诊断中的作用对比,并探讨在直肠黏膜活检标本不足时CR的诊断作用。方法采用回... 详细信息

目的研究钙视网膜蛋白(calretinin,CR)免疫组织化学染色及胆碱酯酶染色(acetylcholinesterase staining,AchE)在先天性巨结肠(hirschsprung disease,HD)病理诊断中的作用对比,并探讨在直肠黏膜活检标本不足时CR的诊断作用。方法采用回顾性研究的方法对比163例直肠黏膜活检CR免疫组织化学染色与AchE染色诊断HD准确性及敏感性。研究26例只含有1个黏膜下神经丛的直肠黏膜活检标本中,CR免疫组织化学染色辅助病理诊断的准确率。结果在年龄<3个月的病例组中,CR免疫组织化学染色敏感度显著高于AchE染色。CR免疫组织化学染色能够准确诊断21例只含有1个黏膜下神经丛的直肠黏膜活检HD病例。结论 CR免疫组织化学染色是一种优于AchE染色的直肠黏膜活检诊断HD的必要辅助方法。

关键词：先天性巨结肠钙视网膜蛋白胆碱酯酶染色

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环丙沙星时间分辨荧光免疫分析方法的建立与应用

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食品科学 2012年第8期33卷 216-220页

作者：李丽华白瑞樱孙远明沈玉栋徐振林雷红涛张挺王弘杨金易广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院广东广州510642 新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003

建立基于时间分辨荧光免疫分析技术的环丙沙星(CPF)间接竞争检测方法。将环丙沙星-卵清白蛋白(CPF-OVA)包被于固相微孔板,CPF标准品或样品中CPF与CPF包被原(CPF-OVA)共同竞争限量的CPF抗体,用铕标羊抗兔IgG示踪,建立环丙沙星时间分辨荧... 详细信息

建立基于时间分辨荧光免疫分析技术的环丙沙星(CPF)间接竞争检测方法。将环丙沙星-卵清白蛋白(CPF-OVA)包被于固相微孔板,CPF标准品或样品中CPF与CPF包被原(CPF-OVA)共同竞争限量的CPF抗体,用铕标羊抗兔IgG示踪,建立环丙沙星时间分辨荧光免疫分析方法(CPF-TRFIA);考察包被质量浓度、抗体稀释液、反应时间等对方法灵敏度的影响。结果表明:在优化条件下,该方法的检测限为0.5μg/L,半抑制质量浓度(IC5 0)为4.32μg/L,线性范围(IC20～IC80)为1.14～28.85μg/L;该方法对蜂蜜中CPF平均回收率为80.66%～100.30%,对牛奶中CPF的平均回收率为76.30%～95.22%,两者的平均批内和批间变异系数分别为7.42%和10.92%。CPF-TRFIA间接竞争法测定环丙沙星具有灵敏度高、特异性好、性能稳定的优点,适于高通量筛查。

关键词：环丙沙星时间分辨荧光免疫分析抗体添加回收

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心脏成纤维细胞和肌成纤维细胞中miRNA的表达差异

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徐州医学院学报 2012年第10期32卷 658-662页

作者：张成章少中张亚洲张国恒董红燕张中明徐州医学院附属医院胸心外科江苏徐州221002 徐州医学院生物学教研室、神经生物学研究中心江苏徐州221002

目的应用微小RNA（miRNA）芯片技术筛选心脏成纤维细胞（cardiacfibroblasts，CFs）及心脏肌成纤维细胞（cardiacmyofibroblasts，CMFs）中差异表达的miRNAs，为寻找与心脏纤维化有关的miRNA提供理论基础。方法体外分离培养小鼠心脏成... 详细信息

目的应用微小RNA（miRNA）芯片技术筛选心脏成纤维细胞（cardiacfibroblasts，CFs）及心脏肌成纤维细胞（cardiacmyofibroblasts，CMFs）中差异表达的miRNAs，为寻找与心脏纤维化有关的miRNA提供理论基础。方法体外分离培养小鼠心脏成纤维细胞，常氧培养传代至第2代，然后在37℃、3％O2条件下培养48h得到心脏肌成纤维细胞。免疫荧光染色鉴定心脏成纤维细胞和心脏肌成纤维细胞，miRNA芯片技术分别检测miRNA在心脏成纤维细胞及心脏肌成纤维细胞中的表达。结果芯片实验数据分析软件V．4．0对芯片数据进行聚类分析，筛选获得80个在心脏成纤维细胞及心脏肌成纤维细胞中差异表达的miRNAs。相对于心脏成纤维细胞，心脏肌成纤维细胞中有55个miRNAs表达显著上调，25个miRNAs表达显著下调。结论心脏成纤维细胞和心脏肌成纤维细胞中存在差异表达的miRNA分子，差异表达可能与心脏纤维化的发生发展有关。

关键词：微小RNA 心脏成纤维细胞心脏肌成纤维细胞表达差异

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VEGF和Ang-1联合转染对兔心肌梗死再生血管分支和管径的影响

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徐州医学院学报 2012年第3期32卷 145-148页

作者：石合现王正袁延亮张昊董红燕张中明徐州医学院附属医院胸心外科江苏徐州221002 徐州医学院生物学教研室、神经生物学研究中心江苏徐州221002

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素-1（Ang-1）基因联合转染对兔心肌梗死部位再生血管分支数量和毛细血管管径大小的影响.方法将75只日本大耳白兔随机分为5组（每组n=15）,采用冠状动脉左前降支结扎法建立兔心肌梗死模型... 详细信息

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素-1（Ang-1）基因联合转染对兔心肌梗死部位再生血管分支数量和毛细血管管径大小的影响.方法将75只日本大耳白兔随机分为5组（每组n=15）,采用冠状动脉左前降支结扎法建立兔心肌梗死模型.单纯梗死组,仅行冠状动脉左前降支结扎术;VEGF组,向心肌梗死边缘部位注射2型重组腺相关病毒携带的VEGF165基因; Ang-1组,向心肌梗死边缘部位注射2型重组腺相关病毒携带的Ang-1基因;VEGF＋Ang-1组,向心肌梗死边缘部位注射2型重组腺相关病毒携带的VEGF165基因和2型重组腺相关病毒携带的Ang-1基因混合液（混合比例为1：1）;载体组,向心肌梗死边缘部位注射不携带VEGF165和Ang-1基因的2型重组腺相关病毒载体溶液.8周后取材,植物凝集素B4（Lectin B4）灌注染色检测心肌梗死边缘再生血管分支数量,CD31免疫组化检测毛细血管直径.结果与单纯梗死组、Ang-1组和载体组相比,VEGF组和VEGF＋Ang-1组再生血管分支增多（P〈0.01）;与其他各组相比,Ang-1组再生血管分支显著减少（P〈0.01）.与单纯梗死组、VEGF组和载体组相比,Ang-1组和VEGF＋Ang-1组梗死边缘区毛细血管直径显著增加（P〈0.01）;与其他各组相比,VEGF组梗死边缘区毛细血管直径减小（P〈0.01）.结论 VEGF和Ang-1联合转染可以促进心肌梗死边缘部位再生血管分支增多和毛细血管管径增大.

关键词：心肌梗死血管再生毛细血管直径血管内皮生长因子血管生成素-1 基因转染

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缓激肽开放血肿瘤屏障的作用及其与TNF-α、MAPK以及NF-κB的关系研究

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中国药理学通报 2012年第9期28卷 1276-1280页

作者：秦丽娟薛一雪谷艳婷张田孙娜张伟张志勇张文丽郭静河北联合大学基础医学院生理学教研室河北唐山063000 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院生理学教研室辽宁沈阳110016 河北联合大学附属医院神经外科河北唐山063000 河北联合大学医学实验研究中心河北唐山063000

目的探讨缓激肽(BK)诱发胶质瘤细胞释放的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外血瘤屏障的影响机制。方法缓激肽作用于C6细胞后,应用放射免疫法动态监测培养液内TNF-α的含量;构建体外血瘤屏障模型,观察BK作用于C6细胞后的条件培养液(C6CM)对... 详细信息

目的探讨缓激肽(BK)诱发胶质瘤细胞释放的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外血瘤屏障的影响机制。方法缓激肽作用于C6细胞后,应用放射免疫法动态监测培养液内TNF-α的含量;构建体外血瘤屏障模型,观察BK作用于C6细胞后的条件培养液(C6CM)对屏障上脑微血管内皮细胞(BMEC)内丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)mRNA的转录水平(RT-PCR技术)、NF-κB含量(免疫组织化学技术)及血瘤屏障通透性(伊文思蓝法)的影响;利用免疫荧光技术检测C6CM对体外血瘤屏障模型上occluding表达的影响。结果缓激肽作用于C6细胞后,培养液内TNF-α的含量增加,于120 min时达高峰后减少。C6CM作用于体外血瘤屏障后,脑微血管内皮细胞的MAPK mRNA转录水平及NF-κB含量减少,且均于第120 min时达最低水平后开始增加。与此同时,体外血瘤屏障紧密连接蛋白occluding的表达水平也呈相同的变化趋势。结论缓激肽可诱发C6细胞释放TNF-α,释放的TNF-α可能是通过减少BMEC的MAPK mR-NA转录水平和NF-κB的含量而导致血瘤屏障上occluding的表达减少,进而引起血瘤屏障开放的。

关键词：缓激肽肿瘤坏死因子-α. 紧密连接蛋白血瘤屏障 MAPK NF-κB

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大肠埃希菌TA系统mazEF的研究进展

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中国微生态学杂志 2012年第10期24卷 948-950,954页

作者：叶露韦艳霞上海交通大学基础医学院病原生物学教研室上海200025 徐州医学院基础学院病原生物学与免疫学教研室江苏徐州221004

大部分细菌的遗传物质中含有毒素-抗毒素系统(TA)的遗传基因。mazEF是大肠埃希菌染色体上的一对毒素抗毒素基因,由毒素基因mazF和抗毒素基因mazE组成。其在细菌的生长调控和细胞程序性死亡中发挥了重要的作用。环境压力激活mazEF后,Maz... 详细信息

大部分细菌的遗传物质中含有毒素-抗毒素系统(TA)的遗传基因。mazEF是大肠埃希菌染色体上的一对毒素抗毒素基因,由毒素基因mazF和抗毒素基因mazE组成。其在细菌的生长调控和细胞程序性死亡中发挥了重要的作用。环境压力激活mazEF后,MazF可以通过对mRNA的剪切作用造成翻译停止。mazEF的存在可以增加细菌对环境压力的耐受性、保持细菌遗传物质的稳定、参与抗生素引起的细胞死亡、也在细菌的耐药性中发挥重要作用。

关键词：大肠埃希菌毒素-抗毒素系统系统 mazEF

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突变型α突触核蛋白对大鼠皮质神经元原代培养存活率的影响

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中国老年学杂志 2012年第18期32卷 3952-3954页

作者：王鹏许洁安恩训于顺何欣北华大学医学院基础医学院人体解剖学教研室吉林吉林132013 吉林化工学院理学院首都医科大学宣武医院北京老年病研究所神经生物学研究室

目的观察α-突触核蛋白(α-Syn)和其家族性突变型A30P和A53T对大鼠皮质神经元原代培养存活率的影响。方法取大鼠前脑皮质神经元进行分组培养。在培养基中添加α-Syn和其突变体A30P、A53T,培养至1 h、2 h和4 h进行观察,比较A30P、A53T与... 详细信息

目的观察α-突触核蛋白(α-Syn)和其家族性突变型A30P和A53T对大鼠皮质神经元原代培养存活率的影响。方法取大鼠前脑皮质神经元进行分组培养。在培养基中添加α-Syn和其突变体A30P、A53T,培养至1 h、2 h和4 h进行观察,比较A30P、A53T与α-Syn对原代培养神经元生长的影响。神经元以成像显微镜观察并计数,Western印迹法、免疫荧光法、单克隆抗体阻断实验鉴定各蛋白作用的特异性。结果添加α-Syn组的神经元培养至1 h、2 h和4 h时,其神经元的平均存活率大于对照组和添加A30P、A53T组(P<0.05)。A30P组和A53T组的神经元存平均活率与对照组无差异(P>0.05)。增加蛋白的浓度,α-Syn组神经元存活率与添加A30P和A53T组差异越大(P<0.01)。western blot和免疫荧光实验证实α-Syn可由培养基进入到神经元内,而A30P和A53T不能进入神经元。结论α-Syn在大鼠皮质原代神经元培养初期对其存活率具有促进作用,而其突变体A30P和A53T无这一作用,这一现象与其发生家族性突变有关,并可能成为导致PD发病原因之一。

关键词：突触核蛋白原代神经元突起生长帕金森病

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督脉电针刺激对脊髓全横断小鼠大脑皮质运动区BDNF表达的影响

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四川大学学报（医学版） 2012年第2期43卷 250-253页

作者：张向飞邹宇赵娅王廷华章为四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室成都610041 昆明医学院神经科学研究所昆明650031 四川大学华西医院转化神经科学中心成都610041

目的研究督脉电针刺激对脊髓全横断(spinal cord transection,SCT)小鼠大脑皮质运动区脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的影响。方法将绿色荧光蛋白转基因小鼠在T9、T10间行SCT,随机分为电针(EA)组、对... 详细信息

目的研究督脉电针刺激对脊髓全横断(spinal cord transection,SCT)小鼠大脑皮质运动区脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的影响。方法将绿色荧光蛋白转基因小鼠在T9、T10间行SCT,随机分为电针(EA)组、对照组,每组9只小鼠。EA组于术后第1d开始电针刺激至第13d结束,对照组仅做SCT。术后28d时,取小鼠大脑皮质运动区脑组织,用免疫组化、原位杂交、逆转录-聚合酶链式反应、酶联免疫吸附试验检测皮质运动区BDNF的表达变化。结果 BDNF蛋白和mRNA阳性产物主要表达于皮质运动区神经元。EA组、对照组皮质运动区BDNF蛋白表达分别为(1973.41±194.71)pg/mg、(1615.22±137.21)pg/mg,差异有统计学意义(P<0.05);而BDNFmRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论脊髓损伤后督脉电针刺激能够有效增加小鼠大脑皮质运动区BDNF蛋白表达,这有助于揭示电针刺激促进脊髓损伤修复的机制。

关键词：脊髓全横断电针刺激脑源性神经营养因子小鼠

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骨髓间充质干细胞对致脑脊髓炎性MBP68-86特异性T淋巴细胞的调节作用

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国际免疫学杂志 2012年第6期35卷 474-477页

作者：杨琳丽王广友詹晓霞刘宇王心悦孙博李呼伦哈尔滨医科大学基础医学院神经生物学教研室 150086

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）对致脑脊髓炎性MBP68-86特异性T淋巴细胞的抑制和激活作用。方法全骨髓贴壁法提取、培养Lewis大鼠股骨、胫骨内的MSCs；建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）动物模型，对照组大鼠仅免疫完全弗氏佐剂（... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）对致脑脊髓炎性MBP68-86特异性T淋巴细胞的抑制和激活作用。方法全骨髓贴壁法提取、培养Lewis大鼠股骨、胫骨内的MSCs；建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）动物模型，对照组大鼠仅免疫完全弗氏佐剂（CFA）；EAE大鼠免疫10—11d后，MBP68-86特异性T淋巴细胞被取出进行体外T淋巴细胞增值试验。从Lewis大鼠中得到的间质干细胞分别按下列要求预培养：在24孔板中与T细胞比值：1：1（1×10^6骨髓基质细胞／T细胞1×10^6）1：5、1：10、1：50或1：100；ELISA方法检测淋巴细胞培养上清液。结果同种同基因的MSCs以MSCs与效应T细胞比例为1：1、1：5、1：10时共培养能够显著抑制MBP68-86特异性T淋巴细胞的增殖能力，与没有加入MSCs的单独MBP68-86特异性T淋巴细胞组相比差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论MSCs在高密度（MSCs／T细胞数比≥1：10）的情况下，对MBP68-86一特异性T细胞表现为抑制作用；在较低的密度（≤1：50）时，表现为刺激的作用。

关键词：骨髓间充质干细胞实验性自身免疫性脑脊髓炎 MBP68-86特异性T淋巴细胞免疫调节

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α-突触核蛋白功能片段对原代培养大鼠神经元突起的促生长作用

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吉林大学学报（医学版） 2012年第6期38卷 1101-1105,I0012页

作者：王鹏许洁李昕于顺何欣北华大学基础医学院人体解剖学教研室吉林吉林132013 吉林化工学院理学院吉林吉林132022 首都医科大学宣武医院北京老年病研究所神经生物学研究室北京100053

目的:研究人α-突触核蛋白(α-Syn)对原代培养大鼠神经元突起的促生长作用,阐明该蛋白质的功能片段,并探讨其作用机制。方法:获取新生Wistar大鼠大脑皮层神经元分组培养,分别加入α-Syn(添加α-Syn组)、α-Syn功能片段N端(添加N端组)、C... 详细信息

目的:研究人α-突触核蛋白(α-Syn)对原代培养大鼠神经元突起的促生长作用,阐明该蛋白质的功能片段,并探讨其作用机制。方法:获取新生Wistar大鼠大脑皮层神经元分组培养,分别加入α-Syn(添加α-Syn组)、α-Syn功能片段N端(添加N端组)、C端(添加C端组)和NAC段(添加NAC段组),对照组不添加功能片段。倒置相差显微镜观察各组神经元突起的长度,Western blotting法、免疫荧光法特异性鉴定各组α-Syn蛋白的表达水平。结果:在生长至1和2h,添加C端组和α-Syn组的神经元突起平均长度长于对照组(P<0.05),而添加NAC段组和N端组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);生长至4h,添加α-Syn组和C端组的神经元突起平均长度明显长于对照组(P<0.01),而添加NAC段组和N端组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting和免疫荧光法检测,N端和C端可以进入神经元,NAC段不能进入神经元。结论:α-Syn在原代神经元生长初期对其突起生长具有促进作用,具有这一功能的片段位于C端,其机制可能是其通过胞膜进入到神经元内,促进微管蛋白聚合形成微管,加速细胞骨架的形成和轴浆转运。

关键词：突触核蛋白神经元突起生长细胞培养帕金森病

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