检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2023年第2期43卷 93-101页

作者：贾如斯辰力李明洋杨佳吴芯蕾朱珊丽温州医科大学第一临床医学院(信息与工程学院) 温州325035 武汉大学医学部基础医学院武汉430062 温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035 温州医科大学第二临床医学院温州325035

目的分析人正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)感染沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)前后基因表达谱差异。方法HcerEpic细胞经DEAE-D预处理后加入E型Ct标准株,培养44 h后收集HcerEpic细胞(感染组),并以未感染Ct的HcerEpic细胞作为对照组,... 详细信息

目的分析人正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)感染沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)前后基因表达谱差异。方法HcerEpic细胞经DEAE-D预处理后加入E型Ct标准株,培养44 h后收集HcerEpic细胞(感染组),并以未感染Ct的HcerEpic细胞作为对照组,提取两组总RNA后反转录并构建cDNA文库。通过高通量测序分析两组基因表达谱差异,并选择代表性基因通过实时荧光定量PCR(qPCR)验证。结果共检测23997个基因,差异基因125个,其中上调基因119个,下调基因6个;GO分析显示差异基因富集于对病毒防御反应、Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路、对Ⅰ型IFN的细胞反应等条目;KEGG富集通路为甲型流感、单纯疱疹病毒感染、EB病毒感染、HPV感染、NOD样受体通路等相关通路。结论人正常宫颈上皮细胞感染Ct前后转录组存在差异,差异基因主要富集于IFN通路,与细胞抗病毒过程密切相关。qPCR验证了ISG15、IFIT2、OASL、UBE2L6等差异显著且与IFN通路密切相关的基因。

关键词：沙眼衣原体宫颈上皮细胞转录组差异表达基因

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抗人B7-H4嵌合抗体的制备及鉴定

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中国免疫学杂志 2022年第22期38卷 2763-2769页

作者：范振军张文婷张丽张俊爱赵祖国徐军发(指导) 广东医科大学医学技术学院检验医学研究所东莞523808 广东医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室东莞523808

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测... 详细信息

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测mAb纯度;ELISA测定mAb效价;SPR测定mAb的亲和力;BCA法检测mAb浓度;CCK-8法检测T细胞增殖情况;ELISA和Western blot确定mAb结合表位范围;使用Discovery Studio软件对单抗表位进行分析。结果:从杂交瘤细胞成功扩增出抗体可变区基因,筛选出稳定表达嵌合抗体的CHO-K1细胞株;细胞培养上清中mAB浓度为1.82 mg/ml,ELISA有效效价为1.97×10^(5)左右,亲和力为3.72×10^(-9)kD;CCK-8结果表明嵌合单抗可以阻断B7-H4-Fc分子对T细胞增殖的抑制作用;表位分析结果表明嵌合mAb主要以氢键和疏水作用与B7-H4 IgC域结合。结论:本研究成功制备了抗B7-H4的人鼠嵌合单抗,可在体外有效地阻断B7-H4-Fc对T细胞增殖抑制作用并为B7-H4抗体药物研发提供了前期基础。

关键词： B7-H4 嵌合抗体抗体表位 T细胞增殖

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沙眼衣原体质粒蛋白3致病机制的研究进展

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国际生物制品学杂志 2024年第4期47卷 245-251页

作者：吴芯蕾朱润泽朱珊丽温州医科大学第二临床医学院温州325035 眼视光学院(生物医学工程学院) 温州325035 温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)的生殖道感染可导致女性盆腔炎症、输卵管炎症、异位妊娠和不孕等严重并发症,然而其致病机制尚不明确。CT质粒蛋白3(plasmid gene protein 3,Pgp3)的缺失可使CT上行感染致病力减弱、无法诱导上生... 详细信息

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)的生殖道感染可导致女性盆腔炎症、输卵管炎症、异位妊娠和不孕等严重并发症,然而其致病机制尚不明确。CT质粒蛋白3(plasmid gene protein 3,Pgp3)的缺失可使CT上行感染致病力减弱、无法诱导上生殖道输卵管的病变,表明Pgp3在CT致病中起重要作用。Pgp3通过抑制宿主细胞凋亡、改善宿主细胞生存状态以及抑制人类抗菌肽等多种机制,维持CT生存并促进其感染上行。Pgp3还可通过促进CT转移并定植于胃肠道,建立CT的持续感染。此外,Pgp3通过诱导产生炎症因子等方式促进炎症的发生发展。因此,Pgp3是CT致病的重要毒力因子。此文就Pgp3对CT致病机制的研究进展作一综述。

关键词：沙眼衣原体质粒质粒蛋白3

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人巨细胞病毒感染对单核细胞功能的影响

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病毒学报 2019年第6期35卷 907-918页

作者：施昕妤郭刚强林康明李宝青薛向阳章慧娣温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035 温州医科大学附属第二医院检验科温州325000 温州医科大学附属第一医院肾内科温州325000

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种β疱疹病毒。单核细胞是HCMV的主要体内靶标。当前大多数的研究集中于单个时间点来分析HCMV感染对单核细胞功能的影响,并未整体且动态地阐述HCMV感染对单核细胞功能的影响。本研究从GEO(... 详细信息

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种β疱疹病毒。单核细胞是HCMV的主要体内靶标。当前大多数的研究集中于单个时间点来分析HCMV感染对单核细胞功能的影响,并未整体且动态地阐述HCMV感染对单核细胞功能的影响。本研究从GEO(Gene Expression Omnibus)数据库筛选HCMV感染单核细胞4h、24h、48h后的基因芯片,通过生物信息学方法对HCMV感染单核细胞4h、24h、48h后的功能影响进行详细的阐述及比较分析,并用定量反转录聚合酶连锁反应(quantificational reverse transcription polymerase chain reaction,qRTPCR)验证HCMV感染人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)4h、24h和48h后白细胞介素(Interleukin,IL)-1β、IL-8、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-a、IL-10的表达。结果表明HCMV感染单核细胞4h后参与信号转导、炎症反应、免疫反应、防御病毒反应和趋化反应等17个通路,且可能与病理学过程/疾病、病毒疾病、RNA病毒感染和免疫系统疾病等相关。HCMV感染单核细胞24h后主要参与炎症反应、细胞趋化等信号通路,预测主要与系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)、结缔组织疾病和自身免疫性疾病等10种疾病相关。HCMV感染单核细胞48h后主要参与炎症反应、细胞趋化等信号通路,预测主要与结缔组织疾病、病理学过程和SLE等10个疾病相关。qRT-PCR结果显示HCMV感染THP-1细胞4h、24h和48h后IL-1β、IL-8、TNF-α、IL-10的表达增加。本研究表明HCMV感染主要引起炎症反应及趋化反应,并可能与自身免疫性疾病或SLE高度相关。

关键词：人巨细胞病毒(HCMV) 单核细胞炎症反应趋化反应

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人巨细胞病毒US31蛋白的特异性抗体的制备及鉴定

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中国卫生检验杂志 2020年第17期30卷 2102-2105,2108页

作者：李宝青项超丽谢尚丹施昕妤郭刚强薛向阳温州医科大学附属第二医院浙江温州325000 温州医科大学第二临床医学院浙江温州325000 温州医科大学微生物学和免疫学教研室分子病毒与疫苗研究所热带医学研究所浙江温州325000

目的制备人巨细胞病毒(HCMV)US31原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法HCMV US31基因经原核密码子优化后进行全基因合成,克隆至p ET21a(+)原核表达载体,构建p ET21a(+)/HCMV US31重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG... 详细信息

目的制备人巨细胞病毒(HCMV)US31原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法HCMV US31基因经原核密码子优化后进行全基因合成,克隆至p ET21a(+)原核表达载体,构建p ET21a(+)/HCMV US31重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,Ni-NTA亲和层析法纯化US31蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA、Western blot及免疫荧光方法检测抗体效价和特异性。结果在大肠杆菌中诱导出高表达的HCMV US31融合蛋白,经镍柱亲和纯化后获得高纯度的目的蛋白;免疫新西兰兔诱导产生特异性的Ig G抗体,效价为1∶49600;经ELISA、Western blot以及免疫荧光均证实制备的特异性抗体可识别细胞中表达的US31蛋白。结论成功制备了HCMV US31蛋白及特异性抗体,为进一步研究US31蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：人巨细胞病毒 US31蛋白多克隆抗体

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乙型肝炎病毒拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系建立及鉴定

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国际免疫学杂志 2019年第4期42卷 347-352页

作者：徐维祯谷鸿喜郝美丽马延秀李皓乐汪颖楠哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室 150081 杭州师范大学医学院病原和免疫学教研室 311121 加州大学圣地亚哥分校圣地亚哥92092

目的建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系。方法利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞,G418筛选后建立稳定表达细胞株;酶联... 详细信息

目的建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系。方法利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞,G418筛选后建立稳定表达细胞株;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HBV抗原表达情况;FT-PCR检测HBV DNA载量;FH-PCR-MC验证细胞株拉米夫定耐药变异类型;测序分析细胞株内HBV的基因变异情况。结果成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系;第1、10、30代细胞株HBsAg和HBeAg表达稳定;第30代细胞内及上清中HBV DNA载量高于10^4copies/mL;耐药株变异类型为YVDD;测序显示,细胞基因组携带的HBV耐药株基因存在A1762T/G1764A/rtM204V/rtL180M/rtV173L的多位点联合变异。结论成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系,即HepG2-HBV/CV和HepG2-HBV/CM细胞,为筛选抗HBV拉米夫定耐药株的有效药物提供了理想的细胞模型。

关键词：乙型肝炎病毒 YMDD YVDD 稳定表达细胞系

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细菌溶血素毒性和致病机制研究进展

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中国人兽共患病学报 2018年第2期34卷 175-181页

作者：马碧书马丽娜林旭瑷严杰昆明医科大学海源学院微生物学和免疫学教研室昆明650106 甘肃中医药大学医学技术学院兰州743000 浙江大学医学院病原生物学系杭州310058

许多病原菌能产生溶血素溶解红细胞,但近年发现细菌溶血素还能损伤或致死多种有核细胞和血小板。根据分子结构、结合细胞方式、膜孔道形成机制等不同,可将大多数细菌溶血素分类为重复子毒素家族(repeats in toxin family,RTX)和胆固醇... 详细信息

许多病原菌能产生溶血素溶解红细胞,但近年发现细菌溶血素还能损伤或致死多种有核细胞和血小板。根据分子结构、结合细胞方式、膜孔道形成机制等不同,可将大多数细菌溶血素分类为重复子毒素家族(repeats in toxin family,RTX)和胆固醇依赖细胞溶素家族(cholesterol-dependent cytolysin family,CDC)毒素。细菌溶血素可通过膜损伤、细胞溶解或裂解、离子失衡相关病变、细胞凋亡或坏死性凋亡以及TLR2/4介导的NF-κB、p38MAPK、JNK信号传导通路和NLRs介导的NLRP3炎症小体引发强烈的炎症反应并导致炎症性组织损伤,从而在细菌感染过程中发挥重要致病作用。

关键词：细菌溶血素膜损伤细胞裂解细胞凋亡炎症反应

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系统性红斑狼疮患者B细胞中microRNA-155的表达及干预后效应

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浙江医学 2018年第10期40卷 1033-1036,1053页

作者：陈阿琼黄茜茜叶璐璐薛向阳林巧爱朱小春李声东宁波市医疗中心李惠利医院风湿免疫科 315040 温州医科大学第二临床医学院温州医科大学微生物学和免疫学教研室温州医科大学附属第一医院风湿免疫科

目的分析micro RNA-155(miR-155)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血B细胞中的表达及干预后B细胞表达IgG水平。方法收集66例SLE患者及10例健康人群外周血,分离出B细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-155在B细胞中的表达水平,利用... 详细信息

目的分析micro RNA-155(miR-155)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血B细胞中的表达及干预后B细胞表达IgG水平。方法收集66例SLE患者及10例健康人群外周血,分离出B细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-155在B细胞中的表达水平,利用电转染技术使miRNA抑制剂干预SLE患者外周血B细胞miR-155的表达,然后以ELISA检测B细胞干预后培养液上清液IgG的水平。结果 qRT-PCR结果显示,与健康人比较,SLE患者外周血B细胞中miR-155表达上调(P<0.05),通过miRNA抑制剂下调SLE患者B细胞中的miR-155的表达后,B细胞分泌的IgG水平明显降低。结论 SLE患者的B细胞中表达上调的miR-155可能参与了SLE患者B细胞功能调控。

关键词：系统性红斑狼疮微小RNA 微小RNA-155 B细胞 IgG

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微RNA-92a在系统性红斑狼疮血浆中的表达及临床意义

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中华风湿病学杂志 2017年第12期21卷 837-840页

作者：黄茜茜叶璐璐范超凡郭刚强章慧娣尤小寒林巧爱薛向阳孙莉温州医科大学第二临床医学院 325035 温州医科大学微生物学和免疫学教研室温州医科大学第一临床医学院温州医科大挚附属第一医院肾内科温州医科大挚附属第一医院风湿免疫科

目的分析微RNA（miR）-92a在SLE患者血浆中的表达及临床意义。方法收集44例SLE患者、16例RA患者和20名健康对照血浆标本，抽提血浆中小RNA，逆转录后，以cel-miR．39为外参，通过定量PCR检测血浆miR-92a的表达，通过实时荧光定量PCR和... 详细信息

目的分析微RNA（miR）-92a在SLE患者血浆中的表达及临床意义。方法收集44例SLE患者、16例RA患者和20名健康对照血浆标本，抽提血浆中小RNA，逆转录后，以cel-miR．39为外参，通过定量PCR检测血浆miR-92a的表达，通过实时荧光定量PCR和琼脂糖凝胶电泳对miR-92a和***-39的特异性分析；受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析血浆miR-92a作为SLE诊断的敏感性和特异性。采用***检验、***检验、r检验和Pearson相关分析进行统计分析。结果miR．92a在SLE患者49．20（5．33，95．17）、健康者411．30（320．84，504．69）和RA患者25．59（11．20，30．54）血浆中的相对表达量差异有统计学意义（x2=40．77，P〈0．01）。与健康对照相比，SLE患者血浆中miR-92a表达水平明显下调（49．20和411．30，P〈0．01），RA患者血浆中miR-92a相对表达水平较健康人，也明显下调（25．59与411．30，P〈0．01）。SLE患者血浆miR-92a区分健康对照及RA患者血浆miR-92a区分健康对照的ROC曲线下面积（AUC）分别为0．958和1．00。血浆miR-92a表达水平以198．59区别SLE患者和健康对照的特异性和敏感性达90％，93．2％；以85．35临界值区别RA患者与健康对照的特异性和敏感性达100％和100％。血浆miR-92a的表达水平在低补体c3，高血肌酐、高血尿素氮，高ALT及高LDH的SLE患者进一步降低（P均〈o．05）。结论SLE患者血浆中下调表达的miR-92a可能与其发病和病情进展相关，是SLE及终末期肾功能损害临床诊断一个新的生物学指标。

关键词：红斑狼疮系统性 miR-92a 微小RNA

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趋化因子CXCL14在SLE患者外周血单个核细胞中的表达及启动子甲基化分析

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中国应用生理学杂志 2017年第3期33卷 197-201页

作者：王金丹黄茜茜叶璐璐范超凡郭刚强徐玲娟薛向阳盛秀胜温州医科大学检验医学院、生命科学院浙江温州325035 温州医科大学第二临床医学院浙江温州325035 温州医科大学微生物学和免疫学教研室分子病毒与疫苗研究所热带医学研究所浙江温州325035 金华市中医医院检验科浙江金华321017 金华职业技术学院医学院浙江金华321017

目的:分析趋化因子CXCL14在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其启动子甲基化特征。方法:收集28例SLE患者和20名健康人外周血单个核细胞(PBMC)标本,抽提细胞中RNA,逆转录后,以GAPDH为内参,通过定量PCR检测PBMC中... 详细信息

目的:分析趋化因子CXCL14在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其启动子甲基化特征。方法:收集28例SLE患者和20名健康人外周血单个核细胞(PBMC)标本,抽提细胞中RNA,逆转录后,以GAPDH为内参,通过定量PCR检测PBMC中CXCL14的表达,统计分析CXCL14表达水平与SLE各种临床资料的相关性,探讨PBMC中CXCL14表达与SLE的关系,通过重亚硫酸盐修饰的全基因组DNA用以BSP测序来明确不同标本中CXCL14启动子中甲基化位点的甲基化率。结果:CXCL14在SLE患者和正常人PBMC中的表达量存在显著差异(P<0.05)。与健康人PBMC中CXCL14的含量相比较,CXCL14在SLE患者PBMC中表达量显著降低。与进一步CXCL14表达水平与SLE各种临床资料的相关性分析显示,CXCL14表达水平与SSB抗体(干燥综合征B抗体)、蛋白尿及血小板计数相关。与SSB抗体阴性SLE患者比较,SSB抗体阳性患者CXCL14表达水平更低(P<0.05);与蛋白尿阴性SLE患者相比,蛋白尿阳性患者CXCL14表达水平更低(P<0.05);而血小板升高患者的CXCL14表达水平更高(P<0.05)。CXCL14表达水平与SLE活动、肾损害指标、抗ds-DNA、C反应蛋白(CRP)、补体C3水平等指标未见显著相关性。CXCL14启动子区甲基化分析显示,SLE患者Cp G岛甲基化明显高于正常对照。结论:PBMC中低表达的CXCL14与SLE发生发展相关,其启动子区Cp G岛过度甲基化是SLE患者CXCL14低表达的重要机制。

关键词：系统性红斑狼疮趋化因子 CXCL14 甲基化

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