检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2015年第5期23卷 1272-1276页

作者：尹玲玲阮素红田宇赵恺徐开林徐州医学院附属医院血液科江苏徐州221002 徐州医学院血液病研究所骨髓干细胞重点实验室江苏徐州221002

目的:克隆抗人IL1RAP(IL-1 receptor accessory protein)单克隆抗体(McAb)可变区基因及构建嵌合抗原受体(CAR)重组质粒。方法:采用RACE、重叠延伸PCR技术,从3H6E10、10D8A7杂交瘤细胞总RNA中克隆扩增IL1RAP McAb的重链可变区(VH)和轻链... 详细信息

目的:克隆抗人IL1RAP(IL-1 receptor accessory protein)单克隆抗体(McAb)可变区基因及构建嵌合抗原受体(CAR)重组质粒。方法:采用RACE、重叠延伸PCR技术,从3H6E10、10D8A7杂交瘤细胞总RNA中克隆扩增IL1RAP McAb的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)段DNA,并连接成IL1RAP特异性单链抗体可变区基因片段(scFv)。将hCD8α跨膜段、hCD137胞内段、hTCRζ链、hCD8α引导肽(Signal peptide)、scFv-anti-IL1RAP连入载体LV-Lac,并与辅助载体pMD2.G、psPAX2共同转染293FT细胞,包装获得病毒颗粒。结果:获得了两种抗人IL1RAP McAb的VH及VL基因,3H6E10 VH和VL基因全长402 bp和393 bp,可分别编码134、131个氨基酸;10D8A7 VH和VL基因全长423 bp和381 bp,可分别编码141、127个氨基酸。构建重组表达载体LV-3H6E10 scFv-ICD、LV-10D8A7 scFv-ICD(ICD:CD8α跨膜段-CD137胞内段-TCRζ链)后,经测序证实目的片段序列正确。重组质粒转染293FT细胞获得慢病毒颗粒。结论:本实验成功构建了能特异性结合人IL1RAP蛋白的嵌合受体,为以后制备IL1RAP-CAR杀伤性T细胞疫苗打下基础。

关键词： IL1RAP 基因克隆嵌合受体重组质粒

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IL1RAP单克隆抗体的制备与鉴定

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中国实验血液学杂志 2015年第4期23卷 962-965页

作者：尹玲玲阮素红田宇徐开林赵恺徐州医学院血液病研究所骨髓干细胞重点实验室江苏徐州221002 徐州医学院附属医院血液科江苏徐州221002

目的:制备针对白血病干细胞(LSC)表面标志蛋白IL1RAP(IL-1 receptor accessory protein)的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。方法:杂交瘤细胞3H6E10、10D8A7种植BALB/c小鼠腹腔,收获腹水,纯化后得到特异性抗人IL1RAP的单克隆抗体。分别... 详细信息

目的:制备针对白血病干细胞(LSC)表面标志蛋白IL1RAP(IL-1 receptor accessory protein)的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。方法:杂交瘤细胞3H6E10、10D8A7种植BALB/c小鼠腹腔,收获腹水,纯化后得到特异性抗人IL1RAP的单克隆抗体。分别应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Nondenaturing-PAGE)、ELISA和Western blot法对纯化单克隆抗体分别进行抗体纯度、效价和敏感性检测。结果:获得了两种IL1RAP纯化单克隆抗体,命名为3H6E10 Mc Ab和10D8A7 Mc Ab,其纯度分别为95%和94%;两种纯化的单克隆抗体效价为1∶81000,且能特异性识别IL1RAP纯化蛋白、正常人及白血病病人的细胞内源性蛋白。结论:本研究成功制备了能特异性结合人IL1RAP的纯化单克隆抗体,为将来有效清除体内LSC提供了新途径。

关键词： IL1RAP 单克隆抗体白血病干细胞

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竞争抑制0610009E02Rik长链非编码RNA重组腺病毒穿梭载体的构建与鉴定

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国际输血及血液学杂志 2015年第3期38卷 192-199页

作者：杨娜陈翀秘红岭李小莉陈朝褚培培夏园姚海娜徐开林曾令宇徐州医学院附属医院血液科 221002 徐州医学院移植免疫实验室

目的构建可竞争抑制肝细胞内0610009E02Rik长链非编码RNA（lncRNA）的重组腺病毒穿梭载体,为探索0610009E02Rik/Notch1在肝静脉闭塞病（HVOD）肝细胞损伤修复中的作用提供有效实验方法.方法采用基因组DNA提取试剂盒对截取的C57BL/6小... 详细信息

目的构建可竞争抑制肝细胞内0610009E02Rik长链非编码RNA（lncRNA）的重组腺病毒穿梭载体,为探索0610009E02Rik/Notch1在肝静脉闭塞病（HVOD）肝细胞损伤修复中的作用提供有效实验方法.方法采用基因组DNA提取试剂盒对截取的C57BL/6小鼠尾进行基因组DNA的提取,通过PCR扩增出0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠的1 000 bp基因序列,并连接入经BamHⅠ/Nhe Ⅰ双酶切后的腺病毒穿梭载体GV359;竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体与辅助包装质粒pBHG共转染HEK293细胞,并对竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒进行包装、扩增,采用氯化铯（CsCl）不连续密度梯度离心与连续密度梯度离心2个步骤对重组腺病毒进行浓缩纯化,并对重组腺病毒滴度进行测定;测定不同感染复数（MOI）竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染肝细胞株H2.35的感染效率,并采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）与Western blotting对竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染肝细胞株H2.35与同步培养的对照肝细胞中竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段、Notch1 mRNA及0610009E02Rik lncRNA相对表达水平及其蛋白表达水平,并进行统计学分析.结果 ①经基因序列比对分析发现0610009E02Rik与Notch1的第34个外显子存在分子量为1 000 bp的重叠序列,依据0610009E02Rik与Notch1基因序列设计含BamH Ⅰ/Nhe Ⅰ酶切位点特异性引物,通过PCR扩增出片段长度为1 000 bp的0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠序列的竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段,DNA测序结果显示竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体与理论预期序列构建成功.②将竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体转染HEK293细胞后第12天,约90％细胞出现细胞病变（CPE）,收集细胞获取病毒液.浓缩纯化病毒液经梯度稀释在感染HEK293细胞后第10天,于显微镜下观察稀释梯度1∶ （10～1010）均出现CPE,病毒滴度约为5.01×109 PFU/mL.③当竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒MOI为80,感染肝细胞株H2.35 48 h后感染效率高达95％.收集经竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染后肝细胞,通过RT-PCR检测竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段相对表达水平为同步培养肝细胞株H2.35对照的3.13±0.83倍,且差异有统计学意义（P=0.047）;Notch1 mRNA相对表达水平为对照细胞的（0.38±0.08）倍,且差异亦有统计学意义（P=0.010）;0610009E02Rik lncRNA相对表达水平为对照细胞的（1.04±0.26）倍,但差异无统计学意义（P＞0.05）.经Western blotting检测发现,重组腺病毒感染后肝细胞Notch1蛋白表达水平较对照肝细胞减低,与Notch1 mRNA相对表达水平检测结果相一致.结论成功构建竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体,重组腺病毒感染肝细胞H2.35后,可下调肝细胞内Notch1 mRNA表达水平及其蛋白表达水平,这为HVOD肝细胞损伤修复的深层机制研究奠定实验数据基础.

关键词： RNA,长链非编码受体,Notch1 腺病毒,人 DNA,重组肝细胞

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长链非编码RNA在表观遗传学中的研究进展

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国际遗传学杂志 2015年第2期38卷 93-96页

作者：秘红岭曾令宇徐州医学院附属医院血液科徐州医学院移植免疫实验室

表观遗传学是基于遗传学基础之上发展起来的生物学分支,研究发现人类很多疾病与表观遗传调控相关,其主要机制包括:染色质重塑、组蛋白修饰,基因组印记及非编码RNA(ncRNA)调控。而长链非编码RNA(lncRNA)是非编码RNA中的一类,不仅可以通... 详细信息

表观遗传学是基于遗传学基础之上发展起来的生物学分支,研究发现人类很多疾病与表观遗传调控相关,其主要机制包括:染色质重塑、组蛋白修饰,基因组印记及非编码RNA(ncRNA)调控。而长链非编码RNA(lncRNA)是非编码RNA中的一类,不仅可以通过与靶基因直接结合调控靶基因的转录,还能募集调控因子,参与基因的沉默,在表观遗传调控中起着重要作用。

关键词：长链非编码DNA 表观遗传学表观调控

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混合谱系白血病基因部分串联重复在急性髓细胞白血病中的研究进展

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国际输血及血液学杂志 2015年第3期38卷 236-239页

作者：卞梅茹陈伟吴庆运徐开林徐州医学院附属医院血液科 221002 徐州医学院移植免疫实验室

混合谱系白血病（MLL）基因位于第11号染色体长臂2区3带（11q23）,其编码产物为具有3 969个氨基酸残基的核蛋白.MLL蛋白最具特征性的功能为通过调节Hox基因表达水平决定细胞存活.急性白血病可发生MLL基因重排,其中MLL基因部分串联重复（... 详细信息

混合谱系白血病（MLL）基因位于第11号染色体长臂2区3带（11q23）,其编码产物为具有3 969个氨基酸残基的核蛋白.MLL蛋白最具特征性的功能为通过调节Hox基因表达水平决定细胞存活.急性白血病可发生MLL基因重排,其中MLL基因部分串联重复（MLL-PTD）为MLL基因重排中最为常见的形式之一,主要存在于核型正常及具有第11号染色体三体的急性髓细胞白血病（AML）中.作者拟就MLL基因结构、功能、MLL-PTD在AML发生、发展中的作用机制,及其可作为AML潜在治疗靶点等方面进行综述.

关键词：混合谱系白血病蛋白质串联重复序列白血病,髓样,急性

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CUE结构域包含蛋白2在白血病及实体肿瘤发生、发展中作用机制的研究进展

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国际输血及血液学杂志 2015年第3期38卷 240-243页

作者：刘洋齐昆明吴庆运徐开林徐州医学院附属医院血液科 221002 徐州医学院移植免疫实验室

CUE结构域包含蛋白2（CUEDC2）是新近发现的含CUE结构域的泛素结合蛋白,在细胞周期调控、肿瘤形成、炎症及应激反应中均起着重要作用.研究表明,CUEDC2可介导蛋白质泛素化降解,与白血病及实体肿瘤的发生、发展和耐药密切相关.CUEDC2可促... 详细信息

CUE结构域包含蛋白2（CUEDC2）是新近发现的含CUE结构域的泛素结合蛋白,在细胞周期调控、肿瘤形成、炎症及应激反应中均起着重要作用.研究表明,CUEDC2可介导蛋白质泛素化降解,与白血病及实体肿瘤的发生、发展和耐药密切相关.CUEDC2可促进纺锤体检查点（SAC）失活,导致有丝分裂过程中染色体不稳定,进而参与白血病和实体肿瘤发病进程.然而,CUEDC2在白血病及实体肿瘤发生、发展中,是具有抑制作用还是促进作用,尚存在争议.笔者拟就近年来CUEDC2在白血病与实体肿瘤发生、发展中作用机制的研究进展进行综述.

关键词： CUE结构域包含蛋白2 白血病核转录因子-κB Janus激酶细胞因子信号转导蛋白抑制因子

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异基因移植中输注内皮祖细胞对移植后细胞因子释放的作用研究

异基因移植中输注内皮祖细胞对移植后细胞因子释放的作用研究

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中华医学会血液学分会第九次全国造血干细胞移植学术会议

作者：齐昆明安立才潘彬宋国梁刘迷迷陈伟吴庆运曹江除开林曾令宇徐州医学院附属医院血液科徐州医学院移植免疫实验室徐州医学院附属医院血液科

目的研究内皮祖细胞(EPC)对异基因移植后细胞因子释放的作用影响.方法以C57BL/6小鼠为供鼠,BABL/C小鼠为受鼠并将其随机分为3组,即对照组:正常小鼠、单纯骨髓移植组;实验组:骨髓联合EPC移植组,于移植后2、4、6、8、10天利用流式细胞术...

目的研究内皮祖细胞(EPC)对异基因移植后细胞因子释放的作用影响.方法以C57BL/6小鼠为供鼠,BABL/C小鼠为受鼠并将其随机分为3组,即对照组:正常小鼠、单纯骨髓移植组;实验组:骨髓联合EPC移植组,于移植后2、4、6、8、10天利用流式细胞术,CBA法检测BABL/C小鼠血清中IL-6、IL-10、MCP1、IFN-γ、TNF-α、IL-12p70的水平.

关键词：

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骨髓移植预处理对肝脏损伤及与血小板活化的关系

骨髓移植预处理对肝脏损伤及与血小板活化的关系

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中华医学会血液学分会第九次全国造血干细胞移植学术会议

作者：齐昆明乔建林潘彬刘迷迷王志远陈伟吴庆运曹江除开林曾令宇徐州医学院附属医院血液科徐州医学院移植免疫实验室徐州医学院附属医院血液科

目的研究骨髓移植预处理对肝脏损伤及与血小板活化的关系.方法将BABL/c小鼠随机分为3组,即对照组:正常小鼠、致死量照射组;实验组:骨髓移植组.照射后观察小鼠生存状态,定期检测外周血P-选择素、肝功能及肝脏指数的变化,HE染色观察肝...

目的研究骨髓移植预处理对肝脏损伤及与血小板活化的关系.方法将BABL/c小鼠随机分为3组,即对照组:正常小鼠、致死量照射组;实验组:骨髓移植组.照射后观察小鼠生存状态,定期检测外周血P-选择素、肝功能及肝脏指数的变化,HE染色观察肝血管内皮及肝细胞损伤情况;免疫组化观察肝脏内皮变化;对肝脏损伤进行评分;临床检测:定期收集临床移植病人血标本,检测外周血P-选择素比例变化.

关键词：

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骨髓移植预处理对肝脏损伤及与血小板活化的关系

骨髓移植预处理对肝脏损伤及与血小板活化的关系

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中华医学会第15次全国血栓与止血学术会议

作者：齐昆明徐州医学院附属医院血液科徐州医学院移植免疫实验室

目的:研究骨髓移植预处理对肝脏损伤及与血小板活化的关系.方法:实验分组将BABL/c小鼠随机分为3组,即对照组:正常小鼠、致死量照射组;实验组:骨髓移植组.照射后观察小鼠生存状态,定期检测外周血P-选择素、肝功能及肝脏指数的变化,HE染...

目的:研究骨髓移植预处理对肝脏损伤及与血小板活化的关系.方法:实验分组将BABL/c小鼠随机分为3组,即对照组:正常小鼠、致死量照射组;实验组:骨髓移植组.照射后观察小鼠生存状态,定期检测外周血P-选择素、肝功能及肝脏指数的变化,HE染色观察肝血管内皮及肝细胞损伤情况;免疫组化观察肝脏内皮变化;对肝脏损伤进行评分;临床检测:定期收集临床移植病人血标本,检测外周血P-选择素比例变化.结果:1.照射后早期致死量照射组和骨髓移植组小鼠肝功能、肝指数及P-选择素均明显升高,以致死量照射组更为明显;2.照射后小鼠肝脏内皮的损伤:致死量照射组小鼠肝脏HE染色及免疫组化可见肝窦内皮损伤明显,肝细胞水肿及炎性细胞浸润严重;骨髓移植组早期肝细胞水肿、肝窦内皮损伤亦很明显,第15天时肝窦内皮损伤较前稍减轻,第20天肝细胞水肿、坏死减轻,但炎性细胞浸润明显,第30天未恢复正常;3.临床移植病人从预处理到移植后30内,外周血P选择素比例持续明显高于正常水平.结论:骨髓移植预处理造成移植受鼠肝指数增加、肝功能异常、P-选择素升高及肝细胞肝窦内皮严重破坏;肝脏损伤程度与血小板的活化程度成正相关,P-选择素可作为一个预测移植后并发HVOD的指标.

关键词：

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溴结构域蛋白4抑制剂GSK525762A对急性B淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响及可能机制

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中华血液学杂志 2014年第6期35卷 528-532页

作者：王缦陈翀徐杰王力宋旭光张焕新曾令宇徐开林徐州医学院移植免疫实验室 221002 徐州医学院附属医院血液科

目的探究溴结构域蛋白4（BRD4）抑制剂对急性B淋巴细胞白血病细胞生物学行为的影响及可能机制.方法用BRD4抑制剂GSK525762A抑制急性B淋巴细胞白血病细胞株RS4; 11细胞BRD4活性,并以急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞作对照.采用CC... 详细信息

目的探究溴结构域蛋白4（BRD4）抑制剂对急性B淋巴细胞白血病细胞生物学行为的影响及可能机制.方法用BRD4抑制剂GSK525762A抑制急性B淋巴细胞白血病细胞株RS4; 11细胞BRD4活性,并以急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞作对照.采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;用Annexin Ⅴ/7-AAD标记,流式细胞术检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测抗凋亡基因c-myc、Bcl-2、CDK6和促凋亡基因Bad、Bak、Bax的转录水平;Western blot检测Bcl-2及Bak蛋白的表达.结果不同浓度GSK525762A对RS4; 11细胞增殖均有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,作用48、72 h其半数抑制率分别为6.174和1.996 μmol/L.与DMSO处理组比较,GSK525762A处理后RS4; 11细胞c-myc、Bcl-2、CDK6mRNA转录水平降低,而Bad、Bak、Bax mRNA转录水平升高,且Bcl-2蛋白表达水平下调,Bak蛋白表达水平上调.而GSK525762A对Jurkat细胞的增殖抑制作用并不明显.结论 GSK525762A可抑制RS4; 11细胞的增殖,并促进其凋亡;该作用可能通过下调Bcl-2表达,诱导白血病细胞凋亡而实现的.

关键词：溴结构域蛋白4抑制剂 RS4 11细胞细胞增殖

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