检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2011年第3期19卷 730-733页

作者：曹江李秀芹陈翀曾令宇程海李振宇潘秀英徐开林徐州医学院附属医院血液科实验室江苏徐州221002

本研究检测免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中Th17细胞和调节性T细胞(Treg)的表达并初步阐明Th17/Treg细胞比率失衡在ITP中的作用及意义。ITP患者根据血小板计数及治疗效果分为治疗前组(活动组38例)、治疗后组(缓解组24例、部分缓解... 详细信息

本研究检测免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中Th17细胞和调节性T细胞(Treg)的表达并初步阐明Th17/Treg细胞比率失衡在ITP中的作用及意义。ITP患者根据血小板计数及治疗效果分为治疗前组(活动组38例)、治疗后组(缓解组24例、部分缓解组10例、未缓解组4例),30例健康体检者设为对照组。用流式细胞术检测ITP患者、健康者外周血Th17细胞及Treg细胞分别占CD4+T细胞的百分率。结果表明,活动组、未缓解组Th17细胞的百分率均高于对照组(p<0.05);缓解组、部分缓解组亦高于对照组,但均无统计学意义(p>0.05);缓解组低于活动组,但无统计学意义(p>0.05)。活动组、部分缓解组、未缓解组Treg细胞百分率均明显低于对照组(p<0.01);缓解组亦低于对照组,但无统计学意义(p>0.05);缓解组高于活动组(p<0.05)。活动组、部分缓解组、未缓解组Th17/Treg细胞比率均高于对照组(p<0.05);缓解组亦高于对照组,但无统计学意义(p>0.05);缓解组低于活动组(p<0.05)。结论 :ITP患者活动组Th17细胞百分率、Th17/Treg细胞比率升高。ITP患者活动组、部分缓解组、未缓解组Treg细胞百分率降低,缓解组Treg细胞百分率较活动组升高。Th17/Treg细胞比率失衡在ITP的发病机制中可能有重要作用。

关键词：免疫性血小板减少症 Th17细胞 Treg细胞

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移植预处理后肝脏内皮的电镜制作方法

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江苏医药 2011年第13期37卷 1489-1490页

作者：于红丽齐昆明宋国梁闫志凌陈翀董红燕曾令宇徐州医学院神经生物学研究中心 221002 徐州医学院附属医院血液病科移植免疫实验室

目的介绍一种移植预处理后肝脏内皮的电镜制作方法。方法将30只C57BL/6小鼠随机均分为A组(60Co 7.5 Gy致死量照射)、B组(60Co 5.0 Gy减低剂量照射)和C组(正常对照),通过透射电镜定期观察肝脏内皮变化。结果透射电镜下可见:A组肝脏内皮... 详细信息

目的介绍一种移植预处理后肝脏内皮的电镜制作方法。方法将30只C57BL/6小鼠随机均分为A组(60Co 7.5 Gy致死量照射)、B组(60Co 5.0 Gy减低剂量照射)和C组(正常对照),通过透射电镜定期观察肝脏内皮变化。结果透射电镜下可见:A组肝脏内皮细胞核碎裂、内皮破坏严重;B组染色质边集,内皮无明显损伤;C组未见明显异常。结论对肝脏组织进行恰当的处理后,透射电镜下能清楚地观察到内皮细胞表面结构和内壁损伤的形态改变。

关键词：移植预处理肝脏内皮透射电镜

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Th17细胞发育调控的研究进展

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国际输血及血液学杂志 2011年第2期34卷 159-162页

作者：张焕新(综述) 陈翀(综述) 曾令宇(综述) 徐开林(审校) 徐州医学院移植免疫实验室徐州医学院附属医院血液科 221002

Th17细胞是近年来发现的一个独立于Th1、Th2和Treg细胞的辅助性T细胞亚群，其在自身免疫性疾病和感染性疾病中发挥重要作用。Th17细胞发育调控机制的研究已成为研究者关注的焦点。细胞因子在其发育过程中发挥主导作用，转录因子直接驱动... 详细信息

Th17细胞是近年来发现的一个独立于Th1、Th2和Treg细胞的辅助性T细胞亚群，其在自身免疫性疾病和感染性疾病中发挥重要作用。Th17细胞发育调控机制的研究已成为研究者关注的焦点。细胞因子在其发育过程中发挥主导作用，转录因子直接驱动Th17细胞的发育。Th17细胞的发育还受到各种表观遗传学调控机制的影响。本文就Th17细胞发育调控的研究进展作一综述。

关键词： Th17细胞细胞因子转录因子表观遗传学发育调控

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靶向stathmin和mdr1基因逆转卵巢癌细胞紫杉醇耐药的研究

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肿瘤防治研究 2011年第3期38卷 243-246页

作者：肖玉洁王红梅韩正祥高向阳裴冬生曾令宇杜秀平湖南中医药大学中西医结合学院长沙410208 徐州医学院公共卫生学系徐州医学院附属医院肿瘤科徐州医学院肿瘤生物治疗实验室徐州医学院血液科实验室

目的探讨以RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术靶向stathmin和mdr1基因逆转卵巢癌细胞紫杉醇耐药的可行性。方法分别构建靶向stathmin和mdr1基因的质粒:pGU6-GFP-neo-ST-MN1和pGU6-GFP-neo-MDR1;将质粒转染到卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TAX。Real-ti me RT-PCR检测stathminm和mdr1的mRNA变化;Western blot检测其蛋白表达变化;荧光显微镜检测细胞凋亡情况;CCK-8法分析细胞对紫杉醇的敏感度。结果 Real-ti me RT-PCR及Western blot显示pGU6-GFP-neo-MDR1质粒对mdr1基因,pGU6-GFP-STMN1-294shRNA质粒对stathmin基因在mR-NA水平和蛋白水平均有明显抑制(P<0.05),荧光显微镜下共转染组细胞凋亡增多,CCK-8示共转染组逆转紫杉醇耐药效果最明显。结论体外RNAi可有效沉默卵巢癌紫杉醇耐药株SKOV3/TAX细胞内stathmin基因和mdr1基因,逆转其紫杉醇耐药。

关键词： RNAi stathmin mdr1 紫杉醇耐药

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造血干细胞移植预处理因素对小鼠肝脏作用的研究

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四川大学学报（医学版） 2010年第5期41卷 803-806页

作者：贾路闫志凌许世娟徐开林曾令宇徐州医学院移植免疫实验室徐州221002 徐州医学院附属医院血液科徐州221002

目的探讨造血干细胞移植各种常用预处理因素对小鼠肝脏的损伤作用。方法 8~10周龄雌性BALB/c小鼠40只,随机分为正常对照组、非清髓全身照射组、清髓剂量全身照射组、白消安组和环磷酰胺组,每组8只。观察小鼠的一般情况,计数外周血白细胞... 详细信息

目的探讨造血干细胞移植各种常用预处理因素对小鼠肝脏的损伤作用。方法 8~10周龄雌性BALB/c小鼠40只,随机分为正常对照组、非清髓全身照射组、清髓剂量全身照射组、白消安组和环磷酰胺组,每组8只。观察小鼠的一般情况,计数外周血白细胞,组织病理观察肝脏病理变化,透射电镜观察肝脏细胞以及血管内皮的超微结构变化。结果移植预处理后各实验组白细胞减少(P<0.05),各预处理组肝脏组织光镜下有不同程度的病理改变,电镜下肝细胞和肝脏血管内皮细胞亦有不同程度的损害。结论造血干细胞移植预处理中全身照射、白消安和环磷酰胺均可导致肝脏病变以及血管内皮损害,是发生肝静脉闭塞病的重要原因。

关键词：造血干细胞移植肝静脉闭塞病预处理血管内皮

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鼠VEGF红色荧光慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达

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四川大学学报（医学版） 2010年第2期41卷 199-202,217页

作者：王东洋贾路陈翀李艳杰曾令宇徐州医学院移植免疫实验室徐州221002 徐州医学院附属医院血液科实验室徐州221002

目的构建含鼠血管内皮细胞生长因子(mVEGF)红色荧光慢病毒载体,鉴定其在293T细胞中的表达。方法构建含mVEGF和红色荧光蛋白(DsRed)基因双顺反子重组慢病毒质粒;采用脂染法将慢病毒系统三质粒共转染293T细胞,转染后24 h和48 h荧光显微镜... 详细信息

目的构建含鼠血管内皮细胞生长因子(mVEGF)红色荧光慢病毒载体,鉴定其在293T细胞中的表达。方法构建含mVEGF和红色荧光蛋白(DsRed)基因双顺反子重组慢病毒质粒;采用脂染法将慢病毒系统三质粒共转染293T细胞,转染后24 h和48 h荧光显微镜下观察DsRed表达,收集48 h和72 h病毒上清并感染靶细胞239T,荧光显微镜下观察DsRed表达情况,并行Western blot分析培养上清和胞浆内mVEGF表达。结果成功构建慢病毒表达质粒pTK208-mVEGF-IRES-DsRed,重组慢病毒滴度达5×106PFU/mL,并获得蛋白DsRed和mVEGF的表达。结论含mVEGF红色荧光慢病毒质粒成功介导mVEGF蛋白的表达,该载体有望为研究VEGF的病理生理学机制及基因靶向治疗提供有效的工具。

关键词：慢病毒载体血管内皮细胞生长因子红色荧光蛋白 293T细胞

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携带小鼠RORγt基因慢病毒载体的构建及其在293FT细胞中的表达

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中国实验血液学杂志 2010年第6期18卷 1600-1603页

作者：陈翀张焕新曾令宇张滢张建军徐开林徐州医学院附属医院血液科江苏徐州221002 徐州医学院移植免疫实验室江苏徐州221002

本研究构建携带小鼠ROFγt和glp基因的重组慢病毒载体,检测RORγt蛋白在293FT细胞中的表达。用RT-PCR扩增小鼠RORγt基因,将其克隆至PCR2.1T载体,酶切制备RORγtDNA片段,插入MigR1质粒后将RORγt-IRES-GFP定向连入慢病毒转移质粒pTK208... 详细信息

本研究构建携带小鼠ROFγt和glp基因的重组慢病毒载体,检测RORγt蛋白在293FT细胞中的表达。用RT-PCR扩增小鼠RORγt基因,将其克隆至PCR2.1T载体,酶切制备RORγtDNA片段,插入MigR1质粒后将RORγt-IRES-GFP定向连入慢病毒转移质粒pTK208,生成pXZ9-RORγt。用脂质体介导三质粒共转染法转染293FT细胞,荧光显微镜下观察GFP表达情况,以Western blot鉴定RORγt的表达。结果表明,RT-PCR扩增出RORγt基因并克隆入PCR2.1T载体;经亚克隆构建了慢病毒转移质粒XZ9-RORγt。质粒经脂质体转染293FT细胞获慢病毒颗粒,慢病毒颗粒体外高效感染293FT细胞,感染后Western blot检测到RORγt蛋白表达。结论:成功构建慢病毒载体pXZ9-RORγt,并在293细胞内获得表达。

关键词：慢病毒载体 RORγt 293FT细胞

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小鼠造血干细胞移植后移植物抗宿主病与内皮细胞损伤的关系

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中华器官移植杂志 2010年第12期31卷 720-723页

作者：闫志凌贾路许世娟徐开林潘彬宋国梁陈翀曾令宇徐州医学院附属医院血液科徐州医学院移植免疫室江苏省徐州市221002

目的探讨异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病（GVHD）与内皮细胞损伤的关系.方法以C57BL/6小鼠为供者、Balb/c小鼠为受者,分4组进行异基因造血干细胞移植,每组受者15只：对照组（仅输入磷酸盐缓冲液）、单纯骨髓移植组（仅输入骨... 详细信息

目的探讨异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病（GVHD）与内皮细胞损伤的关系.方法以C57BL/6小鼠为供者、Balb/c小鼠为受者,分4组进行异基因造血干细胞移植,每组受者15只：对照组（仅输入磷酸盐缓冲液）、单纯骨髓移植组（仅输入骨髓单个核细胞）、GVHD组（输入骨髓单个核细胞和脾细胞）、GVHD减轻组（在GVHD组基础上加用环孢素A）.分别于移植后不同时间观察受者的表现,检测外周血中内皮细胞及组织病理学变化.结果术后第5天,各组受者均无典型的GVHD表现及组织病理学改变;术后第9天,GVHD组受者出现明显的GVHD的表现及病理学改变,并于15 d内全部死亡.术后第5天,单纯移植组、GVHD组和GVHD减轻组受者的外周血中内皮细胞数分别为（11.51±7.40）、（7.34±1.26）和（7.36±0.16）个/μl,三组间差异均无统计学意义（P＞0.05）;术后第9天,内皮细胞数分别为（10.49±5.61）、（153.64±35.35）及（47.82±4.69）个/μl,三组间差异均有统计学意义（P＜0.05）.术后第5天,单纯移植组、GVHD组、GVHD减轻组受者GVHD靶器官组织病理学评分分别为3.33±0.58、4.33±1.53及4.0±1.73,三组间差异均无统计学意义（P＞0.05）;术后第9天,评分分别为3.33±1.15、10.0及4.33±0.58,三组间差异均有统计学意义（P＜0.05）;术后第14天,评分分别为2.33±1.25、10.33±2.58和3.33±1.15,三组间差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 GVHD的发生再次引起内皮的损伤,同时损伤的内皮加重了GVHD.

关键词：造血干细胞移植内皮细胞内皮损伤移植物抗宿主病

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HSCs移植预处理对骨髓微环境损伤的研究

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江苏医药 2010年第4期36卷 440-442,F0003页

作者：丁爽徐开林鹿群先闫志凌陈翀曾令宇徐州医学院附属医院血液科实验室 221002

目的研究异基因造血干细胞(HSCs)移植预处理-清髓照射对受者骨髓微环境的损伤。方法20只BALB/C小鼠随机分为:正常对照组(10只);单纯照射组(10只),予8.5Gy照射,剂量率0.57Gy,距离2.33m。显微镜下计数外周血中白细胞的变化,流式细胞术分... 详细信息

目的研究异基因造血干细胞(HSCs)移植预处理-清髓照射对受者骨髓微环境的损伤。方法20只BALB/C小鼠随机分为:正常对照组(10只);单纯照射组(10只),予8.5Gy照射,剂量率0.57Gy,距离2.33m。显微镜下计数外周血中白细胞的变化,流式细胞术分析外周血中内皮细胞(ECs)的变化;病理和电镜观察骨髓微环境的损伤。结果照射后外周血中白细胞减少,ECs升高,第5天达高峰,持续至第7天,与正常组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。照射后3d光镜下观察骨髓微环境中大量出血;电镜下ECs和基底膜间被损坏。结论移植预处理中的清髓照射可引起严重的骨髓微环境中内皮损伤。

关键词：照射骨髓微环境内皮细胞损伤

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人成熟转化生长因子β1蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定

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中国医疗前沿 2010年第12期5卷 19-21页

作者：张建军王东洋齐共建曾令宇徐开林徐州医学院移植免疫实验室徐州医学院附属医院血液科实验室

目的构建人成熟转化生长因子β1(hmTGF-β1)的原核表达载体,表达并纯化hmTGF-β1蛋白。方法应用RT-PCR方法获得hmTGF-β1基因,连接至自带6His标签表达载体pET23b,构建原核表达质粒pET23b-hmTGF-β1,诱导表达hmTGF-β1融合蛋白,镍亲合层... 详细信息

目的构建人成熟转化生长因子β1(hmTGF-β1)的原核表达载体,表达并纯化hmTGF-β1蛋白。方法应用RT-PCR方法获得hmTGF-β1基因,连接至自带6His标签表达载体pET23b,构建原核表达质粒pET23b-hmTGF-β1,诱导表达hmTGF-β1融合蛋白,镍亲合层析法纯化融合蛋白,并对纯化产物进行纯度分析。结果成功构建了hmTGF-β1原核表达质粒pET23b-hmTGF-β1,IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE电泳分析,在约15kD处出现了一条新的蛋白条带,WesternBlot结果显示该条带能够与His抗体特异性结合。应用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,分析纯度达95%。结论成功构建了hmTGF-β1蛋白的原核表达质粒,并成功表达与纯化hmTGF-β1蛋白,为进一步复性、获得有活性的hmTGF-β1打下基础。

关键词：转化生长因子β1(TGF-β1) 原核表达重组蛋白分离和提纯

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