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中华医学会第十二次全国血液学学术会议

作者：张焕新陈翀曾令宇李振宇徐开林徐州医学院移植免疫实验室、徐州医学院附属医院血液科

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趋化因子受体7基因绿色荧光慢病毒载体构建及在未成熟树突状细胞中的表达

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中国组织工程研究与临床康复 2012年第1期16卷 134-138页

作者：宋立孝张璞李德鹏曾令宇陈翀潘秀英徐开林黄一虹徐州医学院附属医院血液科江苏省徐州市221002 徐州医学院附属医院移植免疫实验室江苏省徐州市221002

背景:趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受。目的:构建携带... 详细信息

背景:趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受。目的:构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法:采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体。将CCR7DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7。采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒(重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒ΔNRF及包膜质粒pVSVG)共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达。结果与结论:实验成功扩增出小鼠CCR7DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293FT细胞后,24h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒。慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态。结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达。

关键词：趋化因子受体7 未成熟树突状细胞慢病毒载体真核表达组织工程

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血小板生成素在异基因造血干细胞移植后促进血小板植入的临床研究

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中华血液学杂志 2012年第5期33卷 362-365页

作者：苗瞄吴德沛曹祥山董伟民王彪欧阳建李振宇李德鹏杨明珍苏州大学附属第一医院血液科、江苏省血液研究所；卫生部血栓与止血重点实验室 215006 常州市第一人民医院南京大学医学院附属鼓楼医院徐州医学院附属医院安徽医科大学第一附属医院

目的观察血小板生成素（TPO）在恶性血液病患者异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后促进血小板恢复治疗中的临床反应和安全性。方法采用多中心、开放、随机、对照的临床研究，共120例allo-HSCT后的患者根据入组标准进入研究，按患者入... 详细信息

目的观察血小板生成素（TPO）在恶性血液病患者异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后促进血小板恢复治疗中的临床反应和安全性。方法采用多中心、开放、随机、对照的临床研究，共120例allo-HSCT后的患者根据入组标准进入研究，按患者入组时间的先后顺序随机分为4组，对照组（A组）：不用TPO；试验组：用TPO，剂量为300U·kg^-1·d^-1，根据不同的用药时机[分别为移植后1天（＋1）、＋4、＋7d开始]，分为B、C、D3组。最终可评估的患者共89例，其中A组22例，B组23例，C组20例，D组24例。观察有效性评价指标（血小板恢复时间、血小板输注次数）和安全性评价指标[不良事件、血常规、肝。肾功能、凝血功能和移植物抗宿主病（GVHD）的发生]。结果试验组B、C、D3组的血小板植入时间分别为（13．17±2．89）、（12．15±2．08）和（12．33±1．76）d；对照组为（14．82±5．05）d，差异有统计学意义（P=0．029）。试验组3组间在血小板恢复时间、血小板最低值及输血量方面差异无统计学意义。试验组未见明显不良反应。结论TPO应用于恶性血液病患者***后可以缩短血小板恢复时间，于＋7d开始应用是有效和安全的。

关键词：血小板生成素造血干细胞移植异基因血小板恢复时间用药时机

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预缺血处理通过增强nNOS磷酸化对缺血性脑损伤的保护作用

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徐州医学院学报 2012年第6期32卷 371-373页

作者：周翠许静张光毅桑威徐州医学院机能学科教学实验室江苏徐州221002 徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院附属医院血液科江苏徐州221002

目的观察预缺血处理对脑缺血／再灌注后神经型一氧化氮合酶（nNOS）磷酸化的影响及其具体的分子信号机制。方法制备SD大鼠大脑四动脉结扎模型及预缺血模型，采用免疫印迹、免疫沉淀等技术，检测各实验组中nNOS与突触后致密体95（PSD95... 详细信息

目的观察预缺血处理对脑缺血／再灌注后神经型一氧化氮合酶（nNOS）磷酸化的影响及其具体的分子信号机制。方法制备SD大鼠大脑四动脉结扎模型及预缺血模型，采用免疫印迹、免疫沉淀等技术，检测各实验组中nNOS与突触后致密体95（PSD95）的结合体及nNOS（Ser847）磷酸化水平的变化。结果预缺血组nNOS与PSD95的结合体及nNOS（Ser847）磷酸化水平较缺血／再灌注组明显升高（P〈0．05）。结论预缺血通过增强nNOS与PSD95的结合从而促进nNOS（Ser847）的磷酸化发挥其对神经元的保护作用。

关键词：预缺血神经型一氧化氮合酶磷酸化大鼠

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硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病的抑制作用

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中华器官移植杂志 2011年第1期32卷 11-15页

作者：孙海英耿华云曾令宇李振宇徐开林徐州医学院附属医院血液科徐州医学院移植免疫实验室江苏省徐州市221002

目的探讨硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病（aGVHD）的抑制作用及其可能机制.方法以C57BL/6小鼠为供鼠,获取骨髓细胞及脾细胞.以Balb/c小鼠为受鼠,共分为5组：空白对照组（n=17）小鼠不予任何处理;单纯照射组（n=17）小鼠仅接受7.0 G... 详细信息

目的探讨硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病（aGVHD）的抑制作用及其可能机制.方法以C57BL/6小鼠为供鼠,获取骨髓细胞及脾细胞.以Balb/c小鼠为受鼠,共分为5组：空白对照组（n=17）小鼠不予任何处理;单纯照射组（n=17）小鼠仅接受7.0 Gy X射线全身照射（TBI）;药物对照组（n=17）小鼠也接受TBI,并且由尾静脉注射硼替佐米;aGVHD组（n=8）小鼠TBI后注射供鼠骨髓细胞及脾细胞;实验组（n=8）小鼠TBI后输注供鼠骨髓细胞及脾细胞,并予以硼替佐米.观察各组小鼠aGVHD的发生情况、存活时间及嵌合状态,蛋白印迹法测定空白对照组、单纯照射组和药物对照组小鼠肝脏及小肠组织细胞核中核因子κB（NF-κB）p65的表达.结果 aGVHD组和实验组的临床aGVHD评分分别为7.37±0.32和5.85±0.40,实验组明显低于aGVHD组（P＜0.05）.aGVHD组受鼠肝脏、小肠及皮肤组织为Thomas GVHD病理分级Ⅲ～Ⅳ级改变.实验组受鼠肝脏、小肠及皮肤组织为Ⅰ～Ⅲ级GVHD改变,较aGVHD组有所减轻.实验组存活时间长于aGVHD组（P＜0.05）.aGVHD组和实验组小鼠移植后12 d时外周血细胞中H-2Kb分子阳性细胞的百分率均＞90%.药物对照组肝脏及小肠组织细胞核内NF-κB p65表达均高于单纯照射组（P＜0.05）.结论硼替佐米可能通过在一定程度上抑制照射预处理损伤所致肝脏及小肠组织中NF-κB的激活起到减轻aGVHD的作用.

关键词：硼替佐米移植物抗宿主病核因子κB 小鼠

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联合内皮祖细胞移植对小鼠骨髓移植预处理中肝脏内皮损伤的修复作用

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中华器官移植杂志 2011年第2期32卷 82-86页

作者：齐昆明许世娟贾路宋国梁闫志凌陈翀徐开林曾令宇徐州医学院附属医院血液科徐州医学院移植免疫实验室江苏省徐州市221002

目的研究联合内皮祖细胞（EPC）移植对小鼠骨髓移植预处理中肝脏内皮损伤的修复作用。方法将C57BL／6小鼠分为4组，每组10只。（1）正常对照组：小鼠不做任何处理，仅作为正常对照；（2）单纯照射组：单次给予全身照射（TBI）预处理，... 详细信息

目的研究联合内皮祖细胞（EPC）移植对小鼠骨髓移植预处理中肝脏内皮损伤的修复作用。方法将C57BL／6小鼠分为4组，每组10只。（1）正常对照组：小鼠不做任何处理，仅作为正常对照；（2）单纯照射组：单次给予全身照射（TBI）预处理，不进行骨髓移植；（3）单纯移植组：给予单纯照射组相同的TBI预处理，TBI后4h内经小鼠尾静脉输注C57BL／6小鼠骨髓单个核细胞5×10^6／只；（4）联合移植组，小鼠的处理方式与单纯移植组相同，仅在骨髓移植的同时经尾静脉输注C57BL／6小鼠EPC5×10^5／只。TBI后第2、4、7、14、21天，检测各组小鼠肝脏重量的变化情况，并于TBI后第4、7、14、21天对各组小鼠肝脏进行组织病理学检查。结果单纯照射组、单纯移植组和联合移植组小鼠肝脏重量均于TBI后第2天开始明显增加，于第14天达到高峰，峰值分别为正常对照组的（1．65±0．15）倍（P〈0．05）、（1．61±0．06）倍（P〈0．05）和（1．11±0．40）倍（P〈0．05）；以后均呈下降趋势，第21天时单纯照射组和单纯移植组肝脏重量仍明显高于正常对照组（P〈0．05），但联合移植组小鼠肝脏重量已完全恢复正常。组织病理学检查显示，单纯照射组小鼠肝窦内皮损伤明显，肝细胞水肿及严重的炎症细胞浸润，第7天时肝细胞水肿、坏死较前明显加重，几乎无存活的肝血窦内皮细胞；第14天时单纯移植组小鼠肝窦内皮损伤较前有所减轻，但到第21天时仍未恢复正常；联合移植组小鼠第7天时肝窦内皮及肝细胞水肿、坏死程度均较轻，到第14天时已基本恢复正常。结论造血干细胞移植前的预处理会造成受者肝脏内皮损伤，且此损伤持续存在;移植时联合输注EPC能修复肝窦内皮的损伤。

关键词：骨髓移植内皮组细胞移植预处理损伤小鼠肝脏

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携带人VE-cadherin基因的慢病毒载体的构建及其在Sup-B15白血病细胞株的表达

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中国实验血液学杂志 2011年第3期19卷 574-577页

作者：张焕新陈翀曾令宇闫志凌李振宇徐开林徐州医学院移植免疫实验室江苏徐州221002 徐州医学院附属医院血液科江苏徐州221002

本研究旨在构建携带人血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)基因的重组慢病毒载体及探讨VE-cadherin蛋白在Sup-B15细胞中的表达。采用RT-PCR扩增人VE-cadherin基因并克隆至pCR-Blunt载体。将VE-cadherinDNA片段连入慢病毒转移质粒pLB,生成重... 详细信息

本研究旨在构建携带人血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)基因的重组慢病毒载体及探讨VE-cadherin蛋白在Sup-B15细胞中的表达。采用RT-PCR扩增人VE-cadherin基因并克隆至pCR-Blunt载体。将VE-cadherinDNA片段连入慢病毒转移质粒pLB,生成重组慢病毒质粒pLB-VEC。用三质粒共转染法包装慢病毒,重组慢病毒感染Sup-B15细胞,在光学显微镜下观察细胞状态,用流式细胞术及Western blot法鉴定VE-cadherin蛋白表达。结果表明,成功扩增出人VE-cadherinDNA片段并克隆至pCR-Blunt载体;亚克隆构建慢病毒载体pLB-VEC。经三质粒包装系统包装后获得高滴度慢病毒颗粒,体外可有效感染Sup-B15细胞。感染后细胞发生明显的形态改变,流式细胞术及Western blot检测到VE-cadherin蛋白表达。结论 :成功构建携带人VE-cadherin基因的慢病毒载体pLB-VEC,并可在Sup-B15白血病细胞株获得有效的表达。

关键词：慢病毒载体血管内皮钙黏蛋白 Sup—B15细胞真核表达

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免疫性血小板减少症患者外周血Th17/Treg细胞比率失衡的研究

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中国实验血液学杂志 2011年第3期19卷 730-733页

作者：曹江李秀芹陈翀曾令宇程海李振宇潘秀英徐开林徐州医学院附属医院血液科实验室江苏徐州221002

本研究检测免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中Th17细胞和调节性T细胞(Treg)的表达并初步阐明Th17/Treg细胞比率失衡在ITP中的作用及意义。ITP患者根据血小板计数及治疗效果分为治疗前组(活动组38例)、治疗后组(缓解组24例、部分缓解... 详细信息

本研究检测免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中Th17细胞和调节性T细胞(Treg)的表达并初步阐明Th17/Treg细胞比率失衡在ITP中的作用及意义。ITP患者根据血小板计数及治疗效果分为治疗前组(活动组38例)、治疗后组(缓解组24例、部分缓解组10例、未缓解组4例),30例健康体检者设为对照组。用流式细胞术检测ITP患者、健康者外周血Th17细胞及Treg细胞分别占CD4+T细胞的百分率。结果表明,活动组、未缓解组Th17细胞的百分率均高于对照组(p<0.05);缓解组、部分缓解组亦高于对照组,但均无统计学意义(p>0.05);缓解组低于活动组,但无统计学意义(p>0.05)。活动组、部分缓解组、未缓解组Treg细胞百分率均明显低于对照组(p<0.01);缓解组亦低于对照组,但无统计学意义(p>0.05);缓解组高于活动组(p<0.05)。活动组、部分缓解组、未缓解组Th17/Treg细胞比率均高于对照组(p<0.05);缓解组亦高于对照组,但无统计学意义(p>0.05);缓解组低于活动组(p<0.05)。结论 :ITP患者活动组Th17细胞百分率、Th17/Treg细胞比率升高。ITP患者活动组、部分缓解组、未缓解组Treg细胞百分率降低,缓解组Treg细胞百分率较活动组升高。Th17/Treg细胞比率失衡在ITP的发病机制中可能有重要作用。

关键词：免疫性血小板减少症 Th17细胞 Treg细胞

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移植预处理后肝脏内皮的电镜制作方法

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江苏医药 2011年第13期37卷 1489-1490页

作者：于红丽齐昆明宋国梁闫志凌陈翀董红燕曾令宇徐州医学院神经生物学研究中心 221002 徐州医学院附属医院血液病科移植免疫实验室

目的介绍一种移植预处理后肝脏内皮的电镜制作方法。方法将30只C57BL/6小鼠随机均分为A组(60Co 7.5 Gy致死量照射)、B组(60Co 5.0 Gy减低剂量照射)和C组(正常对照),通过透射电镜定期观察肝脏内皮变化。结果透射电镜下可见:A组肝脏内皮... 详细信息

目的介绍一种移植预处理后肝脏内皮的电镜制作方法。方法将30只C57BL/6小鼠随机均分为A组(60Co 7.5 Gy致死量照射)、B组(60Co 5.0 Gy减低剂量照射)和C组(正常对照),通过透射电镜定期观察肝脏内皮变化。结果透射电镜下可见:A组肝脏内皮细胞核碎裂、内皮破坏严重;B组染色质边集,内皮无明显损伤;C组未见明显异常。结论对肝脏组织进行恰当的处理后,透射电镜下能清楚地观察到内皮细胞表面结构和内壁损伤的形态改变。

关键词：移植预处理肝脏内皮透射电镜

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Th17细胞发育调控的研究进展

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国际输血及血液学杂志 2011年第2期34卷 159-162页

作者：张焕新(综述) 陈翀(综述) 曾令宇(综述) 徐开林(审校) 徐州医学院移植免疫实验室徐州医学院附属医院血液科 221002

Th17细胞是近年来发现的一个独立于Th1、Th2和Treg细胞的辅助性T细胞亚群，其在自身免疫性疾病和感染性疾病中发挥重要作用。Th17细胞发育调控机制的研究已成为研究者关注的焦点。细胞因子在其发育过程中发挥主导作用，转录因子直接驱动... 详细信息

Th17细胞是近年来发现的一个独立于Th1、Th2和Treg细胞的辅助性T细胞亚群，其在自身免疫性疾病和感染性疾病中发挥重要作用。Th17细胞发育调控机制的研究已成为研究者关注的焦点。细胞因子在其发育过程中发挥主导作用，转录因子直接驱动Th17细胞的发育。Th17细胞的发育还受到各种表观遗传学调控机制的影响。本文就Th17细胞发育调控的研究进展作一综述。

关键词： Th17细胞细胞因子转录因子表观遗传学发育调控

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