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靶向AATF基因shRNA表达载体的构建及其稳定表达的白血病U937细胞系的建立

中国实验血液学杂志 2013年第3期21卷 567-570页

作者：吕超曹江孟凡静曾令宇潘彬陈翀吴庆运宋旭光李振宇潘秀英徐开林徐州医学院移植免疫实验室江苏徐州221002 徐州医学院附属医院血液科

本研究旨在构建靶向AATF基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人白血病U937细胞系。根据GenBank数据库提供的AATF mRNA序列,以228～249、303～324、443～464位序列作为RNA干扰位点,排除同源可能,合成3对互补并编... 详细信息

本研究旨在构建靶向AATF基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人白血病U937细胞系。根据GenBank数据库提供的AATF mRNA序列,以228～249、303～324、443～464位序列作为RNA干扰位点,排除同源可能,合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆至经BamHⅠ、HindⅢ双酶切线性化的pSilencer 3.1人H1启动子干扰载体中,利用测序鉴定所构建的重组载体是否正确,经电穿孔将3个重组载体(pSA-1、pSA-2、pSA-3)转染人白血病U937细胞系,G418(500 mg/L)有限稀释法持续筛选8周后,扩增获得稳定表达的细胞系;RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染细胞系的AATF mRNA和AATF蛋白表达。结果表明,AATF干扰序列及读码框完全正确。稳定转染细胞AATF mRNA表达下调,AATF蛋白表达量下降(P<0.05)。结论:成功地构建AATF shRNA真核表达载体及AATF表达稳定抑制的白血病U937细胞系,为以AATF基因为靶点的人白血病进一步研究奠定了实验基础。

关键词： AATF 短发夹RNA 白血病基因表达载体构建

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异基因骨髓移植并发移植物抗宿主病小鼠体内IL-22的细胞来源

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中国实验血液学杂志 2013年第6期21卷 1526-1529页

作者：赵恺黄栋赵冬梅陈翀吴庆运潘彬曾令宇李振宇徐开林徐州医学院移植免疫实验室徐州医学院附属医院血液科江苏徐州221002

本研究探讨小鼠经异基因骨髓移植后发生移植物抗宿主病(GVHD)时体内IL-22的细胞来源。分别以C57BL/6和BALB/c小鼠为供受鼠,受鼠经致死剂量全身照射后输注供鼠骨髓和脾淋巴细胞悬液,建立GVHD模型。实验分为正常组(normal)、单纯照射组(T... 详细信息

本研究探讨小鼠经异基因骨髓移植后发生移植物抗宿主病(GVHD)时体内IL-22的细胞来源。分别以C57BL/6和BALB/c小鼠为供受鼠,受鼠经致死剂量全身照射后输注供鼠骨髓和脾淋巴细胞悬液,建立GVHD模型。实验分为正常组(normal)、单纯照射组(TBI)、骨髓移植组(BMT)和骨髓联合脾细胞诱导GVHD组(BS)。ELISA法检测小鼠血浆中IL-22的水平;流式细胞术检测IL-22的细胞来源及所属亚群情况。结果表明,BS组小鼠血浆中IL-22水平最高,与正常小鼠相比差异有统计学意义(P<0.01);BS组小鼠脾、淋巴结和外周血中淋巴细胞均可产生IL-22,且IL-22+CD4+T细胞百分率高于IL-22+CD8+T细胞;除Th22细胞外,Th1细胞和Th17细胞也是GVHD小鼠体内IL-22的细胞来源,但以Th22细胞分泌IL-22为主。结论:GVHD小鼠体内可产生高水平的IL-22,其主要来源于IFN-γ-IL-17-IL-22+的Th22细胞。

关键词：骨髓移植移植物抗宿主病 T细胞白介素-22

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白血病干细胞的新型标志蛋白IL1RAP杂交瘤细胞的制备及其分泌单克隆抗体的检测

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中国实验血液学杂志 2013年第6期21卷 1390-1393页

作者：赵恺尹玲玲赵冬梅吴庆运陈翀潘彬曾令宇姚瑶徐开林徐州医学院移植免疫实验室徐州医学院附属医院血液科江苏徐州221002

本研究旨在制备针对白血病干细胞表面标志蛋白IL1RAP(IL-1 receptor accessory protein)的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。用重组人IL1RAP作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过常规杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0细胞经PEG融合,筛选... 详细信息

本研究旨在制备针对白血病干细胞表面标志蛋白IL1RAP(IL-1 receptor accessory protein)的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。用重组人IL1RAP作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过常规杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0细胞经PEG融合,筛选阳性杂交瘤细胞株。分别应用ELISA和Western blot法对杂交瘤细胞上清中分泌抗体进行抗体类型、滴度和敏感性检测。分离人外周单个核细胞,检测所得抗体对细胞内源性抗原的特异性。结果表明,获得了8株可稳定分泌IL1RAP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为3H6E10、4B6A6、8G11B5、9E9F2、10D8A7、1C7H7、1D7G11和2D3D3;抗体类型鉴定为IgG1/κ型;分泌的单克隆抗体能特异性识别单个核细胞表达的IL1RAP。结论:本实验成功制备了可稳定分泌IL1RAP单克隆抗体的杂交瘤细胞及其特异性的IL1RAP单克隆抗体,为将来有效清除体内白血病干细胞提供了新途径。

关键词： IL1RAP杂交瘤单克隆抗体白血病干细胞

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急慢性布加综合征MRI特征对照研究

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中华放射学杂志 2013年第9期47卷 816-819页

作者：成德雷徐浩华荣祖茂衡徐凯路欣张庆桥鹿彩銮杜洪涛仇焕徐新建江苏省徐州医学院附属医院介入放射科 221002 江苏省徐州医学院附属医院放射科 221002 江苏省徐州医学院附属医院超声室 221002

目的研究急、慢性布加综合征（BCS）MRI特征，探讨MRI对急、慢性BCS的诊断价值。方法以11例急性BCS患者作为急性组，以同期连续收治的42例慢性BCS患者作为慢性组。回顾性分析两组患者MR检查结果。腹水量两组间比较采用WilcoxonW秩和检... 详细信息

目的研究急、慢性布加综合征（BCS）MRI特征，探讨MRI对急、慢性BCS的诊断价值。方法以11例急性BCS患者作为急性组，以同期连续收治的42例慢性BCS患者作为慢性组。回顾性分析两组患者MR检查结果。腹水量两组间比较采用WilcoxonW秩和检验；肝内外交通支形成比例两组间比较采用Fisher确切概率法。结果急性组MR检查均发现T：WI高信号的肝静脉血栓，其中3例患者合并下腔静脉血栓；与肝脏中央区相比，肝脏外周带T1WI均呈稍低信号，T2WI均为稍高信号，动态增强扫描时动脉期及静脉期强化程度均相对较低。慢性组中单纯下腔静脉阻塞3例，单纯肝静脉阻塞9例，肝静脉和下腔静脉联合受累30例，仅有3例患者下腔静脉内可发现T2WI高信号的静脉血栓。慢性组患者均示淤血性肝硬化征象。MR平扫及增强扫描时，慢性BCS患者肝脏外周带与中央区信号无明显差异。急性组均有腹水形成（中等量腹水2例、大量腹水9例），慢性组中22例（52．4％）患者腹水形成（少量腹水15例、中等量腹水2例、大量腹水5例），急性组腹水发生率高于慢性组（Z=4．15，P〈0．01）；急性组肝内交通支形成2例、肝外交通支1例，慢性组肝内交通支形成37例、肝外交通支形成34例，急性组中肝内及肝外交通支形成患者比例均低于慢性组（P均〈0．01），以上各指标组间差异均有统计学意义。结论MRI能准确显示BCS的各种直接征象及间接征象，能够对急、慢性BCS做出准确诊断。

关键词：布加综合征磁共振成像急性慢性肝静脉血栓形成

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非同源脑脊液诱导非同源间充质干细胞分化为神经干细胞的对比研究

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生物医学工程学杂志 2013年第6期30卷 1290-1297页

作者：任超刘小云万美荣耿德勤葛巍李金梅张伟伟徐州医学院神经病学教研室徐州221002 山东省泰安市中医医院脑病中心泰安271001 徐州医学院附属医院中心实验室徐州221002 徐州医学院附属医院神经内科徐州221002

寻找一种符合患者治疗需求的干细胞获取模式,从而进一步推动神经干细胞广泛应用于临床。本实验采用志愿者、患者脑脊液体外诱导异体脐血源间充质干细胞(UMSCs)和患者骨髓源间充质干细胞(BMSCs)分化为神经干细胞,并采用形态学、流式细胞... 详细信息

寻找一种符合患者治疗需求的干细胞获取模式,从而进一步推动神经干细胞广泛应用于临床。本实验采用志愿者、患者脑脊液体外诱导异体脐血源间充质干细胞(UMSCs)和患者骨髓源间充质干细胞(BMSCs)分化为神经干细胞,并采用形态学、流式细胞分析、免疫组化、荧光免疫组化法等方法对诱导后的细胞进行签定;同时,记录各诱导组获得临床可用神经干细胞所需的时间及细胞数计数。结果证实各组均可使间充质干细胞(MSCs)定向分化为神经干细胞,所获得的细胞数亦可满足临床需要,但在所需的天数及具体获得细胞数量上各组间有一定差异,其中以患者BMSCs用自愿者脑脊液诱导组所获得神经干细胞计数最高,且其所需时间最短。

关键词：骨髓脐血间充质干细胞脑脊液诱导神经干细胞

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对麻醉学科教育改革的思考

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中华医学教育探索杂志 2014年第11期13卷 1092-1094页

作者：刘苏王光磊齐敦益刘岳鹏刘公俭徐州医学院附属医院麻醉科 221002 江苏省麻醉学重点实验室/江苏省麻醉与镇痛应用技术重点实验室

目前，麻醉学本科教育设立的大环境已经不再存在，其专业面狭窄的副作用日益显现，取消麻醉学本科专业势在必行。麻醉学科教育必须进行改革，但是改革的方向并不明确。“麻醉长学制教育”和“麻醉和围术期医学教育”是两个可能的方向，... 详细信息

目前，麻醉学本科教育设立的大环境已经不再存在，其专业面狭窄的副作用日益显现，取消麻醉学本科专业势在必行。麻醉学科教育必须进行改革，但是改革的方向并不明确。“麻醉长学制教育”和“麻醉和围术期医学教育”是两个可能的方向，各具优点和缺点。比较而言，“麻醉和围术期医学教育”是麻醉学教育改革的一个较优方向。

关键词：麻醉学围术期医学:长学制教育

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双标骨髓间充质干细胞构建纳米生物探针

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中华实验外科杂志 2014年第11期31卷 2404-2404页

作者：曹爱红杨欣郭子威胡维张超徐州医学院第二附属医院影像科江苏221006 江苏省分子影像与功能影像实验室

我们应用超顺磁性氧化铁（SPIO）及羰花青荧光染料（DiI）标记大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs），双标构建BMSCs—SPIO—DiI生物探针，为磁共振精确示踪移植干后细胞在大鼠体内分布提供探针。一、材料与方法选用东南大学医学院动物实验中... 详细信息

我们应用超顺磁性氧化铁（SPIO）及羰花青荧光染料（DiI）标记大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs），双标构建BMSCs—SPIO—DiI生物探针，为磁共振精确示踪移植干后细胞在大鼠体内分布提供探针。一、材料与方法选用东南大学医学院动物实验中心提供的健康sD大鼠，体质量约120g，普通清洁级。用颈椎脱臼法处死SD大鼠，在超净工作台内，用磷酸盐缓冲液（PBS）液反复冲洗骨髓腔制成BMSCs单细胞悬液，采用全骨髓培养法进行干细胞培养，利用差异贴壁培养法纯化细胞。

关键词：骨髓间充质干细胞生物探针细胞构建双标超顺磁性氧化铁东南大学医学院 BMSCs 纳米

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胃癌组织脂肪酸和脂肪酸酰胺水平的变化及其意义

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中国现代普通外科进展 2014年第6期17卷 448-451页

作者：宋虎彭俊生郑骏年宋军符炜徐溢新徐为徐州医学院附属医院胃肠外科江苏徐州221002 中山大学附属第六医院食管胃肠外科广东广州510655 江苏省肿瘤生物治疗重点实验室江苏徐州221000

目的:观察胃癌组织中脂肪酸和脂肪酸酰胺水平的变化并寻找与胃癌相关的特征性小分子标志物。方法:利用气相色谱质谱联用技术(GC/MS)分析30例胃癌组织和30例癌旁正常组织的脂肪酸和脂肪酸酰胺水平。获得的脂类数据通过OPLS-DA多维统计分... 详细信息

目的:观察胃癌组织中脂肪酸和脂肪酸酰胺水平的变化并寻找与胃癌相关的特征性小分子标志物。方法:利用气相色谱质谱联用技术(GC/MS)分析30例胃癌组织和30例癌旁正常组织的脂肪酸和脂肪酸酰胺水平。获得的脂类数据通过OPLS-DA多维统计分析方法建立胃癌诊断模型,应用非参数Wilcoxon检验发现具有统计学差异的组织标志物。结果:利用GC/MS分析共获得13种脂肪酸和4种脂肪酸酰胺,通过OPLS-DA建模后可以较好的区分胃癌组和对照组,但不能区分不同TNM分期的胃癌。胃癌组织中发现5种脂肪酸和油酸酰胺的变化较正常黏膜差异有统计学意义(P<0.05)。8种脂肪酸对OPLS-DA模型中两组患者的区分作用具有较大的贡献(VIP值>1)。结论:胃癌组织中脂肪酸和脂肪酸酰胺的代谢发生了紊乱,胃癌脂类代谢谱对于该病的诊断具有很大的潜力,有助于理解肿瘤发生的分子机制。

关键词：胃肿瘤脂肪酸脂肪酸酰胺

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缺氧诱导因子-1α、核因子-κB及肿瘤坏死因子－α在布加综合征导致淤血性肝硬化的表达及其意义

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中华实验外科杂志 2013年第4期30卷 836-838页

作者：成德雷徐浩徐新建杜洪涛张庆桥华荣仇焕江苏省徐州医学院附属医院介入科 221002 江苏省徐州医学院附属医院放射科江苏省徐州医学院附属医院超声室

目的观察缺氧在布加综合征（BCS）导致淤血性肝硬化形成过程中的作用。方法选取2012年5月至2012年7月在徐州医学院附属医院收治的30例BCS致淤血性肝硬化患者作为实验组，选取10名健康志愿者作为对照组。采用酶联免疫法检测受试对象血清... 详细信息

目的观察缺氧在布加综合征（BCS）导致淤血性肝硬化形成过程中的作用。方法选取2012年5月至2012年7月在徐州医学院附属医院收治的30例BCS致淤血性肝硬化患者作为实验组，选取10名健康志愿者作为对照组。采用酶联免疫法检测受试对象血清中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、核因子．KB（***）及肿瘤坏死因子-仪（TNF—d）的含量。采用独立样本t检验统计分析3个指标组问差异性。结果实验组血清中HIF-1α、NF—KB及TNF-α的含量分别为：（2．49±0．70）μg／L、（307．37±140．65）ng／L及（48．16±8．57）ng／L；对照组血清中3个指标的含量分别为：（1．72±0．10）μg／L、（211．16±6．05）ng／L及（38．97±3．84）ng／L。实验组各个指标含量均高于对照组，组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论缺氧以及HIF-10l、NF—KB2种缺氧敏感性转录因子的活化与BCS导致淤血性肝硬化形成有关；早期对BCS患者进行血管再通治疗，可能会减慢（甚至逆转）缺氧导致淤血性肝硬化进程。

关键词：布加综合征淤血性肝硬化缺氧诱导因子-1α 核因子-κB 肿瘤坏死因子-α

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茉莉酸甲酯对胃癌SGC7901细胞生长抑制机制探讨

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中华肿瘤防治杂志 2013年第9期20卷 641-645页

作者：董秋菊张建福韩红霞汪诗卉高之峰费素娟徐州医学院附属医院消化内科教研室江苏徐州221002 徐州医学院生理学教研室江苏徐州221002

目的:探讨茉莉酸甲酯(MJ)对胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用及其机制。方法:四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞生长活性;Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡细胞核的形态学变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;蛋白质印迹法... 详细信息

目的:探讨茉莉酸甲酯(MJ)对胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用及其机制。方法:四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞生长活性;Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡细胞核的形态学变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;蛋白质印迹法检测凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达。结果:MTT法显示,MJ对胃癌SGC7901细胞生长有显著抑制作用,且呈剂量-时间依赖关系,0.5、1.0和2.0mmol/L MJ作用6h后,抑制率分别为(7.10±0.84)%、(18.22±1.82)%和(26.89±1.56)%,溶剂对照组为(0.43±0.26)%,顺铂(DDP)组为(10.44±1.17)%,总体比较差异有统计学意义(F=232,P=0.000),各组间比较差异均有统计学意义,P值均<0.01;采用MJ上述3种浓度作用12h后,抑制率分别为(12.44±1.20)%、(32.70±1.29)%和(52.94±2.29)%,溶剂对照组为(0.31±0.41)%,DDP组为(22.60±1.97)%,总体比较差异有统计学意义(F=1 013,P=0.000),各组间比较差异均有统计学意义,P值均<0.01;MJ三种浓度作用24h后,抑制率分别为(17.37±1.95)%、(41.79±4.40)%和(71.93±4.65)%,溶剂对照组为(0.34±0.21)%,DDP组为(27.72±2.45)%,总体比较差异有统计学意义(F=444,P=0.000),各组间比较差异均有统计学意义,P值均<0.01;其中以浓度为2.0mmol/L MJ作用24h后,对SGC7901细胞的抑制率效果最佳。荧光染色法观察MJ能够诱导人胃癌SGC7901细胞株的凋亡。流式细胞检测显示,MJ可促进胃癌SGC7901细胞的凋亡,凋亡率为(68.14±7.91)%;与溶剂对照组(6.98±1.45)%相比,差异有统计学意义,P=0.013。蛋白质印迹法检测显示,MJ可上调凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达;事先采用辣椒素受体拮抗剂(Cap)预处理,MJ的抗胃癌SGC7901细胞的效应可被消除,与MJ单独给药组相比,MJ对癌细胞的生长抑制率下降为(38.79±2.77)%,P=0.05;凋亡细胞明显减少;肿瘤细胞凋亡率降为(39.81±4.57)%,P=0.045;凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9表达也降低。结论:MJ有显著抑制胃癌SGC7901细胞增殖的作用;辣椒素受体(VR1)可能介导了MJ对SGC7901细胞增殖的抑制作用,使细胞内凋亡信号通路激活,促进了肿瘤细胞的凋亡。

关键词：胃肿瘤茉莉酸甲酯辣椒辣素细胞凋亡

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