目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是多种心脑血管疾病的基础,血液流动产生的剪切应力对内皮细胞形态和功能的影响在心血管系统疾病中起重要作用。在内皮细胞,已发现多种受剪切应力调节的基因,包括趋化因子。Fractalkine(FKN)是已发现的趋化因子CX3C亚家族仅有成员,因兼有趋化和粘附的特殊性,与多种炎症性疾病相关,并且在体研究发现低剪切应力诱导形成的AS斑块处FKN表达增加,大量研究也表明FKN对于AS的形成和发展具有重要意义。方法:为阐明内皮细胞Fractalkine m RNA及蛋白表达与剪切应力强度的关系,我们用不同强度的流体剪切应力(2.62,4.58,6.54,10.47,15.71,19.64dyne/cm2)处理培养的***926人脐静脉内皮细胞株,然后采用荧光定量RT-PCR的方法检测内皮细胞Fractalkine m RNA的表达量,采用双抗体夹心ABC-ELISA技术检测内皮细胞Fractalkine蛋白的生成。结果:荧光定量FKN m RNA表达量,未处理组基础表达量极少,为0.01±0.00,在剪切应力4.58dyne/cm2时的表达量最高,为1.92±0.22,进行单因素的方差分析,六组不同剪切应力之间总P<0.05,4.58dyne/cm2与其余组的相差比较均为P<0.05,差别有统计学意义。ELISA法测定Fractalkine的蛋白表达量,未处理组基础表达量极少,为0.016±0.00,剪切应力4.58 dyne/cm2时的Fractalkine蛋白表达量最高,为0.15±0.04,进行单因素方差分析均与其他剪切应力下的蛋白表达量差异有统计学意义。结论:剪切应力诱导内皮细胞Fractalkine表达的最佳强度为4.58dyne/cm2,根据此强度可进一步研究Fractalkine基因表达与作用时间的关系。流体低剪切应力诱导内皮细胞Fractalkine m RNA的表达增高,可能在炎症和动脉粥样硬化的发生、发展过程中具有重要作用。
目的检测6种倍半萜内酯化合物对人乳腺癌细胞增殖活性的影响,并探讨其可能的作用机制。方法人乳腺癌细胞MCF-7和人乳腺癌脑转移细胞KT分别与6种倍半萜内酯化合物作用48h,噻唑蓝比色法检测细胞存活率;珊塔玛内酯10μmol/L作用MCF-7细胞24h,双荧光素酶报告基因检测系统检测细胞内Bax报告基因和激活T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)报告基因的表达。结果异土木香内酯和珊塔玛内酯对2种人乳腺癌细胞均显示极强的抑制作用,呈剂量依赖性,半数抑制浓度仅为4.40μmol/L和4.57μmol/L,而其他试验用倍半萜内酯即使在100μmol/L高浓度下,对人乳腺癌肿瘤细胞的增殖不显示抑制活性;珊塔玛内酯可显著诱导MCF-7细胞内Bax和NFAT报告基因表达(P<0.01)。结论异土木香内酯和珊塔玛内酯对2种人乳腺癌细胞均显示极强的抑制作用;珊塔玛内酯对人乳腺肿瘤细胞增殖的抑制作用可能是通过诱导MCF-7细胞的Bax表达,使NFAT激活,导致线粒体膜的转移渗透孔通透性改变,使细胞色素C从线粒体释出,活化caspase 9,进而激活caspase 3,导致细胞凋亡的发生所致。
目的:建立荧光标记D1S1676、D2S441、D3S4529、D22S1045、amelogenin 5个mini短串联重复序列(Short tandem repeat,STR)基因座复合扩增体系,并对重庆地区汉族200名无关个体此5个基因座的遗传多态性进行研究分析。方法:分别用5’TAMRA标...
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目的:建立荧光标记D1S1676、D2S441、D3S4529、D22S1045、amelogenin 5个mini短串联重复序列(Short tandem repeat,STR)基因座复合扩增体系,并对重庆地区汉族200名无关个体此5个基因座的遗传多态性进行研究分析。方法:分别用5’TAMRA标记D1S1676引物,5’6-FAM标记D2S441和D3S4529引物,5’HEX标记D22S1045引物,5’TET标记amelogenin引物,构建及优化符合扩增体系,运用3130基因分析仪检测并收集电泳结果数据,通过Gene Mapper v3.2.1软件计算扩增产物片段相对大小以及进行样本基因型分型。结果:5个miniSTR基因座荧光标记复合扩增体系每个位点都获得清晰的分型结果。对重庆地区汉族无关个体200份血样进行分型,5个基因座分别检出9、9、8、9、2个等位基因和103种基因型,其基因型分布均符Hardy-Weinberg平衡。其中D1S1676、D2S441、D3S4529、D22S1045基因座在重庆汉族群体的杂合度(Heterozygosity,Ho)分别依次为0.710、0.765、0.730、0.710;多态信息含量(Polymorphism information content,PIC)分别依次为:0.660 041、0.798 329、0.753 177、0.797 888;累计非父排除率(Exclusion probability of paternity,EP)为0.924 800 4,累计个人识别率为0.999 955 1。结论:荧光标记D1S1676、D2S441、D3S4529、D22S1045、amelogenin 5个miniSTR基因座复合扩增体系,每个基因座可获得准确分型;重庆汉族群体该5个基因座的遗传学数据,可作为群体遗传学和法医学研究与应用的基础资料。
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