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安徽医科大学学报 2016年第8期51卷 1111-1115页

作者：谭林林王建新李涛王慧安徽医科大学军事医学科学院微生物流行病研究所合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用Red重组系统的同源重组功能,敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)的乙酰转移酶基因z4832,构建z4832基因缺失突变株。方法EHEC O157∶H7的基因组作为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列;将上下游同源臂连接于p UC19-... 详细信息

目的利用Red重组系统的同源重组功能,敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)的乙酰转移酶基因z4832,构建z4832基因缺失突变株。方法EHEC O157∶H7的基因组作为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列;将上下游同源臂连接于p UC19-kana质粒上卡那霉素(kana)抗性基因的两端;PCR扩增获得中间嵌合卡那霉素抗性基因的同源臂线性片段,利用质粒p KD46介导的重组技术敲除z4832基因,利用p CP20质粒介导的重组技术去除抗性标记。PCR扩增及DNA测序验证目的基因缺失后,测定突变株及野生株的生长曲线,检测在抗菌药物氧氟沙星中的存活率。结果成功构建EHEC O157∶H7 z4832基因缺失突变株。z4832缺失突变株生长速度与野生株差异无统计学意义,但在含氧氟沙星的LB培养基中突变株存活率升高(P<0.05),在含氧氟沙星的M9培养基中存活率下降(P<0.05)。结论构建z4832缺失突变株,研究z4832与肠出血性大肠杆菌耐药性之间的关系,为进一步研究乙酰转移酶在EHEC O157∶H7中的作用机制奠定了基础。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Red重组系统乙酰转移酶抗生素

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我国中东部地区蜱中斑点热群立克次体与新型布尼亚病毒复合感染调查研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2016年第2期23卷 86-90页

作者：范亚迪胡建功崔晓鸣郭辰涛沃颖张小爱张泮河黎浩刘玮曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 安徽医科大学合肥230032

为了验证我国中东部发热伴血小板减少综合征流行地区-信阳和济南的蜱中有斑点热群立克次体存在，且有复合感染新型布尼亚病毒的情况，用布旗法和动物体表检查法在河南省信阳市和山东省济南市捕获蜱，采用PCR和RT-RCR进行病原体感染筛查... 详细信息

为了验证我国中东部发热伴血小板减少综合征流行地区-信阳和济南的蜱中有斑点热群立克次体存在，且有复合感染新型布尼亚病毒的情况，用布旗法和动物体表检查法在河南省信阳市和山东省济南市捕获蜱，采用PCR和RT-RCR进行病原体感染筛查。信阳市捕获长角血蜱215只，其中游离蜱164只，寄生蜱51只。37只蜱斑点热群立克次体检测阳性，阳性率17．2％；38只蜱新型布尼亚病毒检测阳性，阳性率为17．7％；4只蜱斑点热群立克次体与新型布尼亚病毒复合感染，复合感染率为1．9％。山东省捕捉到166只寄生蜱，均为长角血蜱，4只蜱斑点热群立克次体检测阳性，阳性率为2．4％。6只蜱新型布尼亚病毒检测阳性，阳性率为3．6％；2只蜱为斑点热立克次体与新型布尼亚病毒复合感染，复合感染率为1．2％。结果证实我国中东部地区存在斑点热立克次体与新型布尼亚病毒复合感染。

关键词：斑点热群立克次体新型布尼亚病毒蜱复合感染

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一株弗氏柠檬酸杆菌噬菌体IME-CF2的分离、测序及全基因组分析

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安徽医科大学学报 2016年第3期51卷 315-319页

作者：刘小东王伟黄勇张湘莉兰孙强安小平米志强童贻刚安徽医科大学军事医学科学院微生物流行病研究所合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的从医院污水中分离一株能裂解弗氏柠檬酸杆菌的噬菌体,观察其形态,并进行全基因组测序和全基因组分析,为治疗和控制弗氏柠檬酸杆菌感染提供基础。方法以弗氏柠檬酸杆菌为宿主,从医院污水分离噬菌体,用透射电镜观察其形态;使用Ion Tor... 详细信息

目的从医院污水中分离一株能裂解弗氏柠檬酸杆菌的噬菌体,观察其形态,并进行全基因组测序和全基因组分析,为治疗和控制弗氏柠檬酸杆菌感染提供基础。方法以弗氏柠檬酸杆菌为宿主,从医院污水分离噬菌体,用透射电镜观察其形态;使用Ion Torrent测序平台进行噬菌体全基因组测序,测序后进行噬菌体全基因组序列组装、注释、进化分析和比较分析。结果成功分离一株弗氏柠檬酸杆菌噬菌体,命名为IME-CF2;电镜观察显示,该噬菌体具有二十面体的头部,形态类似肌尾噬菌体科;IME-CF2核酸类型为DNA,基因组全长为177 685 bp,GC含量为43.2%;编码267个编码区(CDS),2个tRNA;进化分析表明,IME-CF2属于T4类噬菌体,全基因组比较分析表明,IME-CF2与柠檬酸杆菌噬菌体Miller同源性最高。结论分离鉴定了一株弗氏柠檬酸杆菌噬菌体,进行了全基因组测序和分析,为噬菌体治疗多重耐药细菌奠定了基础。

关键词：弗氏柠檬酸杆菌噬菌体全基因组测序基因组分析

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肠出血性大肠杆菌效应因子z2151的E3泛素连接酶活性鉴定

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安徽医科大学学报 2016年第8期51卷 1077-1080页

作者：陈芳红李涛李崭孙超尘王慧安徽医科大学军事医学科学院微生物流行病研究所合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用基因工程方法原核表达z2151蛋白,并鉴定其E3泛素连接酶活性。方法以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因,构建重组表达载体p ET22b-z2151,转化BL21(DE3),诱导蛋白表达,采用镍柱亲和纯化获取目的蛋白;通过体外泛素... 详细信息

目的利用基因工程方法原核表达z2151蛋白,并鉴定其E3泛素连接酶活性。方法以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因,构建重组表达载体p ET22b-z2151,转化BL21(DE3),诱导蛋白表达,采用镍柱亲和纯化获取目的蛋白;通过体外泛素化实验检测蛋白泛素连接酶活性。结果亲和纯化得到较高浓度和纯度的z2151蛋白,其在体外泛素化反应中能够促使泛素小分子形成多聚泛素链,即有E3泛素连接酶活性;而且对E2泛素结合酶具有一定的选择特异性。结论原核表达质粒p ET22b-z2151构建成功,目的蛋白z2151具有泛素连接酶的体外泛素化能力,并且针对不同的E2酶亲和力不同,这些都为后续功能机制研究奠定了基础。

关键词：基因工程肠出血性大肠杆菌O157∶H7 泛素连接酶体外泛素化

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细菌的噬菌体感染耐受机制研究进展

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军事医学 2016年第7期40卷 606-609页

作者：肖丽生祁芝珍宋亚军安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 青海省地方病预防控制所西宁811602

噬菌体是能感染细菌的病毒,在自然界中分布十分广泛。随着发酵工业中的噬菌体污染以及多药耐药菌株的出现,噬菌体越来越受到关注。噬菌体感染细菌包括吸附、注入、复制、组装、释放等环节;细菌在与噬菌体的共进化过程中,针对这些环节产... 详细信息

噬菌体是能感染细菌的病毒,在自然界中分布十分广泛。随着发酵工业中的噬菌体污染以及多药耐药菌株的出现,噬菌体越来越受到关注。噬菌体感染细菌包括吸附、注入、复制、组装、释放等环节;细菌在与噬菌体的共进化过程中,针对这些环节产生了不同的抗感染机制。该文围绕抗吸附、超感染排斥、限制修饰系统、CRISPR系统、流产感染、组装感染等细菌的噬菌体感染耐受机制研究进行了简要综述。

关键词：细菌噬菌体超感染排斥限制修饰系统流产感染

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北京市房山区长角血蜱携带山羊无形体的调查？

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寄生虫与医学昆虫学报 2016年第1期23卷 45-50页

作者：王亚伟江佳富贾娜郭东辉江瑞若常巧呈蒋宝贵刘洪波魏然曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

为确认我国华北地区广泛分布的长角血蜱是否携带新近发现的山羊无形体Anaplasma capra，2012、2015年5～9月期间，在北京房山地区采集长角血蜱并进行检测。结果共采集游离的长角血蜱311只，其中成蜱95只，若蜱156只，幼蜱60只。提取蜱... 详细信息

为确认我国华北地区广泛分布的长角血蜱是否携带新近发现的山羊无形体Anaplasma capra，2012、2015年5～9月期间，在北京房山地区采集长角血蜱并进行检测。结果共采集游离的长角血蜱311只，其中成蜱95只，若蜱156只，幼蜱60只。提取蜱基因组DNA后对山羊无形体的gltA和16S rRNA两个基因片段进行PCR扩增。结果显示，共有3（3.2％）只成蜱阳性，若蜱和幼蜱中未检测到山羊无形体。遗传进化分析显示，扩增出的gltA和16S rRNA序列和早先报道的牡丹江人感染的A． capra的序列相一致。证实了在我国华北地区的媒介蜱携带该新发现的山羊无形体，该地区为山羊无形体潜在的自然疫源地。加强该地区蜱媒传染病的防控工作具有必要性和紧迫性。

关键词：山羊无形体长角血蜱北京房山区

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猪链球菌溶血素(SLY)引起血小板聚集活性分析

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军事医学 2016年第1期40卷 40-44页

作者：张省委刘鹏徐茂凯尚学义郑玉玲袁媛姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院附属医院重症医学科北京100071

目的研究重组表达的2型猪链球菌溶血素(SLY)与血小板的相互作用,为临床猪链球菌感染的救治提供理论基础。方法镍柱亲和层析法纯化重组SLY蛋白,光密度法检测其溶血活性,再通过血小板聚集仪和扫描电子显微镜观察SLY蛋白与血小板的相互作用... 详细信息

目的研究重组表达的2型猪链球菌溶血素(SLY)与血小板的相互作用,为临床猪链球菌感染的救治提供理论基础。方法镍柱亲和层析法纯化重组SLY蛋白,光密度法检测其溶血活性,再通过血小板聚集仪和扫描电子显微镜观察SLY蛋白与血小板的相互作用,并研究抗血小板药物阿司匹林对SLY引起的血小板聚集的影响,通过比较野生株05ZYH33和sly基因突变株Δsly对小鼠体内血小板体积和数量的影响,推测SLY蛋白对体内血小板的影响。结果与结论重组SLY蛋白溶血活性为2000 HU,1μg/ml SLY蛋白可引起血小板高度聚集,5 mmol/L阿司匹林可显著抑制聚集,SLY蛋白可引起小鼠体内单个血小板体积增大和血小板数量减少。

关键词： 2型猪链球菌猪链球菌溶血素血小板聚集阿司匹林血小板减少

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一株携带MCR-1的食品动物源多药耐药奇异变形杆菌耐药性状研究

一株携带MCR-1的食品动物源多药耐药奇异变形杆菌耐药性状研究

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中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛

作者：张德福赵禹宗安慧冯娇刘雪飞杨立娜白凤翎李春周冬生殷喆励建荣渤海大学食品科学与工程学院辽宁省食品安全重点实验室生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室渤海大学数理学院

在对食品动物源性多药耐药菌的调查过程中,发现一株携带MCR-1的多药耐药奇异变形杆菌F160211,对其耐药表型及基因型进行了进一步研究。通过扩增16S rRNA基因对该菌进行了鉴定,用纸片扩散法初步鉴定了该菌的耐药谱,在此基础上又鉴定了多... 详细信息

在对食品动物源性多药耐药菌的调查过程中,发现一株携带MCR-1的多药耐药奇异变形杆菌F160211,对其耐药表型及基因型进行了进一步研究。通过扩增16S rRNA基因对该菌进行了鉴定,用纸片扩散法初步鉴定了该菌的耐药谱,在此基础上又鉴定了多种药物对其最小抑菌浓度,用PCR方法扩增了常见的耐药基因,最后分析了携带MCR-1的质粒的复制类型。结果表明,该菌为奇异变形杆菌;纸片扩散法和肉汤稀释法测定MIC表明,该菌对青霉素类、第1代和第2代头孢菌素类、大环内酯类、氨基糖苷类、酰胺醇类、四环素类、磺胺类、利福霉素类和粘菌素类等耐药,对呋喃类、多肽类、喹诺酮类中介耐药,对第3代和第4代头孢菌素类、单环β-内酰胺类、碳青酶烯类、甘氨酰四环素类敏感;携带bla、bla、bla、bla、mph（A）、qnrS和mcr-1等多种耐药基因;mcr-1基因位于与文献报道的pHNSHP45类似的IncI2型不相容性质粒上。本研究表明,mer-1基因的宿主范围已由报道的大肠杆菌、沙门氏菌等进一步扩大至奇异变形杆菌,食品动物源性细菌耐药的形势正加严峻,对食品安全和公众健康都是严重的威胁。

关键词：副溶血弧菌耐药质粒移动元件

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一株携带MCR-1的食源性弗氏柠檬酸杆菌多药耐药性研究

一株携带MCR-1的食源性弗氏柠檬酸杆菌多药耐药性研究

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中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛

作者：张德福赵禹宗安慧刘雪飞杨立娜白凤翎李春周冬生殷喆励建荣渤海大学食品科学与工程学院辽宁省食品安全重点实验室生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室渤海大学数理学院

在对食源性革兰氏阴性致病菌的耐药情况的调查过程中,从养猪场分离得到了一株携带mcr-1的多药耐药菌株F160188,并对其耐药表型和基因型进行进一步研究。通过扩增16S rRNA基因对分离株进行物种鉴定,用纸片扩散法对耐药谱进行初步鉴定,肉... 详细信息

在对食源性革兰氏阴性致病菌的耐药情况的调查过程中,从养猪场分离得到了一株携带mcr-1的多药耐药菌株F160188,并对其耐药表型和基因型进行进一步研究。通过扩增16S rRNA基因对分离株进行物种鉴定,用纸片扩散法对耐药谱进行初步鉴定,肉汤稀释法鉴定其MIC（Minimal Inhibitory Concentration）值,用PCR扩增方法对常见耐药基因进行筛查并分析携带耐药基因mcr-1的质粒复制类型。结果表明,分离株为弗氏柠檬酸杆菌,耐药性非常严重,除了对碳青酶烯类、甘氨酰四环素敏感外,对呋喃类、氨基糖苷类中介耐药,对包括ESBLs和黏菌素类几乎所有常见抗生素全部耐药,为广泛耐药（extensively drug resistance,XDR）株,携带bla、bla、bla、bla、ere（A）和mcr-1耐药基因。mcr-1基因由质粒介导,位于IneI2型不相容性质粒上,该基因可通过可接合性质粒在不同菌种间传播。mcr-1基因在弗氏柠檬酸杆菌的出现表明其宿主范围已由报道的大肠杆菌、沙门氏菌等进一步扩大至弗氏柠檬酸杆菌,食源性的革兰氏阴性菌的耐药性传播形势十分严峻,对食品安全和公众健康存在严重的威胁。

关键词： MCR-1 多药耐药食源性细菌食品安全弗氏柠檬酸杆菌

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副溶血弧菌耐药及其机制的研究进展

副溶血弧菌耐药及其机制的研究进展

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中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛

作者：张德福赵禹宗冯娇刘雪飞李春白凤翎周冬生殷喆励建荣渤海大学食品科学与工程学院辽宁省食品安全重点实验室生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室渤海大学数理学院

副溶血弧菌是引起食源性疾病的主要致病菌之一,也给水产品养殖业造成重大经济损失。临床和养殖业者一般使用抗菌药物治疗副溶血弧菌引起的感染,但由于抗菌药物的不规范使用等原因,导致耐药性副溶血弧菌的大量出现。耐药性副溶血弧菌可... 详细信息

副溶血弧菌是引起食源性疾病的主要致病菌之一,也给水产品养殖业造成重大经济损失。临床和养殖业者一般使用抗菌药物治疗副溶血弧菌引起的感染,但由于抗菌药物的不规范使用等原因,导致耐药性副溶血弧菌的大量出现。耐药性副溶血弧菌可以通过食物链传播给人类,严重威胁食品安全和人民群众的身体健康。目前,文献报道关于副溶血弧菌的耐药谱分析较多,但关于耐药基因和相关移动元件、耐药机理的研究较少。本文综述了世界上多个国家副溶血弧菌耐药性的情况及其耐药机理的研究现状,并时发展前景进行了分析。

关键词：副溶血弧菌耐药质粒移动元件

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