检索结果-内蒙古大学图书馆

昆明理工大学学报（自然科学版） 2023年第3期48卷 136-144页

作者：王亚茹凤梓涵李世青徐健皓袁兵王景林刘丽袁媛昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500 军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军第96110部队医院疾病预防控制科宁夏银川750021

创伤弧菌溶血素(*** Hemolysin, VVH)是创伤弧菌重要的致病因子之一,但目前国内外重组表达的VVH多为包涵体形式.本研究建立了创伤弧菌培养上清中分泌型溶血素的纯化制备方法,并评价了胆固醇及雌二醇对天然VVH溶血活性的影响,为进一步深... 详细信息

创伤弧菌溶血素(*** Hemolysin, VVH)是创伤弧菌重要的致病因子之一,但目前国内外重组表达的VVH多为包涵体形式.本研究建立了创伤弧菌培养上清中分泌型溶血素的纯化制备方法,并评价了胆固醇及雌二醇对天然VVH溶血活性的影响,为进一步深入研究VVH蛋白的生物学功能及致病机制奠定了基础.研究采用硫酸铵沉淀法结合脱盐柱、阴离子层析及疏水相互作用纯化制备出天然VVH,用溶血试验验证了蛋白活性,评价了胆固醇、雌二醇对创伤弧菌YJ016培养上清以及天然VVH溶血活性的影响.结果显示:从创伤弧菌培养上清中纯化制备的天然VVH纯度较高,其具有良好的溶血活性(2μg/HU),100μg/mL的胆固醇或雌二醇均能有效抑制VVH的溶血活性.本研究成功建立了制备天然VVH的有效方法,为创伤弧菌重症感染的致病机制、防控与治疗研究奠定了基础,同时对其他致病弧菌溶血素的制备也具有借鉴意义.

关键词： VVH 天然蛋白纯化溶血活性胆固醇雌二醇

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质粒基因注释可视化系统VPA V1.0的研建

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军事医学 2022年第3期46卷 167-172页

作者：穆凯孙岩松周冬生赵月峨杨慧盈殷喆王鹏军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立临床医学研究中便捷易用的质粒基因注释可视化系统,用于直观展示质粒结构与基因分布。方法运用Perl语言编写VPA系统4个主要模块(文件配置模块、颜色系统模块、图形生成模块和出错帮助模块),生成Perl脚本***。结果构建了质粒基... 详细信息

目的建立临床医学研究中便捷易用的质粒基因注释可视化系统,用于直观展示质粒结构与基因分布。方法运用Perl语言编写VPA系统4个主要模块(文件配置模块、颜色系统模块、图形生成模块和出错帮助模块),生成Perl脚本***。结果构建了质粒基因注释可视化系统VPA,该系统可实现多种类别、不同长度质粒的基因注释可视化显示,展示信息丰富全面、操作简单便捷。结论VPA系统可适用于目前细菌研究中常见的大部分质粒基因注释工作,为细菌的比较基因组学和结构基因组学提供了更直观的图像展示,并为其他相关可视化系统的开发提供了参考模型。

关键词： VPA系统质粒基因注释可视化

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下调自噬相关蛋白ATG4B抑制贝氏柯克斯体细胞内增殖

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军事医学 2022年第8期46卷 569-575页

作者：张家宁付梦姣焦俊欧阳譞于永慧赵明亮张珊温博海熊小路孙岩松军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究宿主细胞自噬相关基因4B(ATG4B)对贝氏柯克斯体胞内生长繁殖的影响。方法用ATG4B特异小干扰RNA(siRNA)处理宿主细胞(THP-1和Vero),以非特异siRNA和无siRNA处理的细胞为对照;逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测抑... 详细信息

目的研究宿主细胞自噬相关基因4B(ATG4B)对贝氏柯克斯体胞内生长繁殖的影响。方法用ATG4B特异小干扰RNA(siRNA)处理宿主细胞(THP-1和Vero),以非特异siRNA和无siRNA处理的细胞为对照;逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测抑制效果;Western印迹分析细胞自噬标识蛋白(p62和LC3)的量变;qRT-PCR检测贝氏柯克斯体感染细胞中细菌增殖水平;共聚焦显微镜观察贝氏柯克斯体感染细胞中细菌寄生囊泡发育状况。结果与对照组比较,ATG4B特异siRNA处理组的细胞自噬标识蛋白p62和LC3-Ⅱ明显增多,细菌繁殖量更低,细菌寄生囊泡为散在分布小囊泡而不是单一成熟大囊泡。结论宿主细胞ATG4B表达下调可部分阻断自噬,自噬的部分阻断使贝氏柯克斯体寄生囊泡发育受阻,进而抑制贝氏柯克斯体胞内生长繁殖,为阐明宿主细胞的自噬促进贝氏柯克斯体繁殖的致病机制提供了新的依据。

关键词：贝氏柯克斯体自噬相关基因4B 小干扰RNA 胞内寄生感染细胞增殖

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河北省保定市HIV-1感染者毒株基因亚型和耐药研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第2期42卷 88-93页

作者：范伟光邢颖韩磊磊苏苗苗孟娟戴二黑石鹏辉李韩平河北省保定市人民医院检验科保定071000 河北医科大学附属石家庄市第五医院检验科石家庄050021 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所艾滋病研究室病原与生物安全国家重点实验室北京100071

目的了解河北省保定地区2020年全部新诊断的HIV-1感染者中,HIV-1毒株基因型和耐药发生情况。方法使用自建的方法扩增HIV-1 pol区全长基因并测序,系统进化分析鉴定HIV-1亚型,将基因序列上传至美国斯坦福大学的HIV耐药数据库,分析耐药突... 详细信息

目的了解河北省保定地区2020年全部新诊断的HIV-1感染者中,HIV-1毒株基因型和耐药发生情况。方法使用自建的方法扩增HIV-1 pol区全长基因并测序,系统进化分析鉴定HIV-1亚型,将基因序列上传至美国斯坦福大学的HIV耐药数据库,分析耐药突变位点发生情况。结果共收集新诊断HIV-1感染者96例,获得pol区全长83条,研究人群中男性88例(91.7%),平均年龄为39岁,已婚者54例(56.3%),感染途径以性接触途径(95.8%,92/96)为主,其中同性性传播占75.0%(72/96);系统进化分析显示,HIV-1毒株亚型多样,以CRF01_AE(51.8%,43/83)、CRF07_BC(24.1%,20/83)和B亚型(10.8%,9/83)为主,近年来新鉴定的重组毒株占13.3%(11/83);耐药分析结果显示,治疗前耐药率为8.4%(7/83),其中蛋白酶抑制剂(PIs)、非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)和整合酶抑制剂(INIs)的耐药率分别为3.6%(3/83)、1.2%(1/83)和3.6%(3/83)。结论河北省保定地区2020年新诊断HIV-1感染者中毒株亚型复杂多样,存在多种独特重组毒株和耐药突变毒株,需要加强耐药监测和防控。

关键词： HIV-1 基因型耐药突变位点

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山东省部分地区媒介蜱类携带病原体的分子流行病学调查

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寄生虫与医学昆虫学报 2023年第4期30卷 210-218页

作者：李程张明珠叶润泽王宁王百惠林哲韬王晓阳刘婧徐晴高婉迎崔晓鸣赵琳曹务春山东大学齐鲁医学院公共卫生学院济南250012 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为探究山东省部分地区蜱类及其携带病原体情况,本研究对2021—2022年在山东省7个地区采集的游离和寄生蜱标本进行形态学鉴定;并对5种常见蜱传病原体进行PCR检测,统计其病原体的自然携带情况,并对阳性样本的病原体序列进行系统发育分析... 详细信息

为探究山东省部分地区蜱类及其携带病原体情况,本研究对2021—2022年在山东省7个地区采集的游离和寄生蜱标本进行形态学鉴定;并对5种常见蜱传病原体进行PCR检测,统计其病原体的自然携带情况,并对阳性样本的病原体序列进行系统发育分析。结果显示,采集到的蜱虫样本包括2属4种,分别包括长角血蜱145只、嗜群血蜱2只、铃头血蜱2只和血红扇头蜱5只。PCR检测结果显示携带斑点热群立克次体34份,总阳性率为22.08%;携带无形体样本29份,总感染率为18.83%;泰勒虫和伯氏疏螺旋体总感染率分别为5.84%和0.65%,所有样本均没有检测到回归热螺旋体感染。结果提示,长角血蜱为山东省内优势蜱种,不同蜱种内存在较高病原体感染率,应加强当地对蜱虫监测和防控宣传。

关键词：蜱蜱传病原体分子流行病学山东省

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金黄色葡萄球菌噬菌体vB_Sau_P68的基因组分析和裂解酶

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微生物学通报 2022年第8期49卷 3107-3119页

作者：于诗筠吕金晖文会淇张雅倩喻鑫婷米志强黄海龙吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 安徽医科大学解放军307临床学院北京100071

【背景】金黄色葡萄球菌是常见的人畜共患条件致病菌,随着多耐药菌株分离率的增长,研发与抗生素作用模式不同的抗菌剂迫在眉睫。【目的】分离高效且特异性强的金黄色葡萄球菌噬菌体,对其进行功能注释,并对其编码的裂解酶进行功能验证。... 详细信息

【背景】金黄色葡萄球菌是常见的人畜共患条件致病菌,随着多耐药菌株分离率的增长,研发与抗生素作用模式不同的抗菌剂迫在眉睫。【目的】分离高效且特异性强的金黄色葡萄球菌噬菌体,对其进行功能注释,并对其编码的裂解酶进行功能验证。【方法】通过对噬菌体全基因组序列进行分析找到裂解酶基因,利用原核表达系统对其编码的2个裂解酶蛋白进行克隆,用SDS-PAGE与蛋白免疫印迹法(Western blotting)鉴定目的蛋白是否表达,并采用单斑法验证其裂解活性。【结果】本研究的噬菌体为一株新的金黄色葡萄球菌噬菌体,命名为vB_Sau_P68,该基因组全长为139409 bp,GC含量为31.0%,编码220个开放阅读框(open reading frame,ORF),透射电镜观察具有正二十面体头部和收缩性尾部,形态学分类属于肌尾噬菌体。该噬菌体编码2个裂解酶基因,分别具有CHAP催化结构域与SH3_5结合结构域,SDS-PAGE与Western blotting表明Lys161能够表达且有裂解活性,Lys163则无法外源表达。对Lys161序列进行分析,该裂解酶无信号肽,无跨膜区域,以无规则卷曲为主。【结论】本研究对一株新的金黄色葡萄球菌噬菌体编码的2个裂解酶基因进行了克隆表达,结果提示CHAP催化结构域具有裂解活性,而SH3_5结合结构域则不表达。这一结果可为裂解酶的机制探索及应用提供理论基础。

关键词：全基因组分析 CHAP结构域 SH3_5结构域蛋白结构

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产气荚膜梭菌α毒素作用机制研究进展

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军事医学 2022年第9期46卷 711-714页

作者：郭子槊辛文文王景林军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

毒素是产气荚膜梭菌的主要毒力因子之一,具有磷脂酶C和鞘磷脂酶两种酶活性,能水解宿主细胞膜上的磷脂酰胆碱和鞘磷脂,导致多种人畜疾病。同时,该毒素也是一种潜在的生物战剂,对国家生物安全存在潜在威胁。该文主要对产气荚膜梭菌α毒素... 详细信息

毒素是产气荚膜梭菌的主要毒力因子之一,具有磷脂酶C和鞘磷脂酶两种酶活性,能水解宿主细胞膜上的磷脂酰胆碱和鞘磷脂,导致多种人畜疾病。同时,该毒素也是一种潜在的生物战剂,对国家生物安全存在潜在威胁。该文主要对产气荚膜梭菌α毒素的生物学结构与性质、细胞毒性作用的信号通路、激活血小板的分子机制以及治疗方面进行综述。

关键词：产气荚膜梭菌 α毒素细胞毒性作用溶血机制血小板

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带荧光标签的产气荚膜梭菌ε毒素融合蛋白纯化及特性鉴定

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军事医学 2022年第10期46卷 744-748页

作者：郭子槊吕若梅黄静柳婷婷陈铭康琳王景林辛文文军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的表达纯化带eGFP和mScarlet标签的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)ε毒素(ETX),鉴定ETX的毒素特性。方法在大肠杆菌中表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,镍柱纯化蛋白;用MTS法测定带不同标签ETX的毒性;用共聚焦显微镜... 详细信息

目的表达纯化带eGFP和mScarlet标签的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)ε毒素(ETX),鉴定ETX的毒素特性。方法在大肠杆菌中表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,镍柱纯化蛋白;用MTS法测定带不同标签ETX的毒性;用共聚焦显微镜观察mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞和不同物种红细胞的结合情况。结果成功表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,纯化后得到纯度较高的eGFP-ETX和mScarlet-ETX融合蛋白。通过细胞毒实验,证实eGFP-ETX毒素与未加荧光标签的His-ETX相比毒性减弱,mScarlet-ETX毒素与His-ETX毒性基本一致,确定了eGFP-ETX和mScarlet-ETX的最佳荧光值。将mScarlet-ETX应用于HaCaT细胞和HEKa细胞,观察到mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞结合,证实HaCaT细胞、HEKa细胞对ETX敏感。将mScarlet-ETX应用于人、小鼠和兔红细胞,mScarlet-ETX只与人红细胞结合。结论 mScarlet-ETX具有良好的毒素活性,可应用于对ETX毒性研究的多个方面。

关键词：产气荚膜梭菌 ε毒素 eGFP标签 mScarlet标签融合蛋白

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四环素降低致倦库蚊共生Wolbachia密度方法的建立及效果评价

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寄生虫与医学昆虫学报 2023年第2期30卷 74-79页

作者：吕慧鑫姜玉庭郭晓霞倪孟邢丹赵彤言张灵玲福建农林大学生命科学学院福州350002 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071

胞内共生菌Wolbachia在昆虫生理生殖和天然免疫方面发挥着重要作用,蚊虫体内的Wolbachia密度与其抗病毒作用有很强的相关关系。本研究建立了一种利用四环素处理幼虫降低致倦库蚊共生Wolbachia密度的方法,并采用实时荧光定量PCR进行了效... 详细信息

胞内共生菌Wolbachia在昆虫生理生殖和天然免疫方面发挥着重要作用,蚊虫体内的Wolbachia密度与其抗病毒作用有很强的相关关系。本研究建立了一种利用四环素处理幼虫降低致倦库蚊共生Wolbachia密度的方法,并采用实时荧光定量PCR进行了效果评估。结果显示,使用0.05 mg/mL四环素处理致倦库蚊海口株和温州株,处理后Wolbachia密度中位数分别下降2729和3507倍;卵巢及其余组织的Wolbachia密度均下降至0.001以下,其中,卵巢中Wolbachia密度下降825629倍。可见,0.05 mg/mL四环素处理幼虫能显著降低蚊虫体内Wolbachia密度,为后续清除Wolbachia、探究Wolbachia对致倦库蚊感染和传播病毒的影响提供了技术基础。

关键词：致倦库蚊四环素沃尔巴克氏体

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登革病毒在人与蚊虫细胞正选择压力下的致病性与基因序列变化分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2022年第1期29卷 14-24页

作者：朱小娟姜玉庭张恒端高剑吴治明李春晓董言德邢丹郭晓霞赵彤言军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京市虫媒病与自然疫源性疾病重点实验室北京100071

自然界中登革病毒在蚊虫与哺乳动物宿主内交替循环复制,研究病毒与不同类型宿主细胞间的相互作用有助于理解病毒基因突变与毒力变化的关系。本研究将登革2型病毒在人肝癌细胞(Huh-7)和蚊虫细胞(C6/36)之间交替传代模拟登革病毒在自然界... 详细信息

自然界中登革病毒在蚊虫与哺乳动物宿主内交替循环复制,研究病毒与不同类型宿主细胞间的相互作用有助于理解病毒基因突变与毒力变化的关系。本研究将登革2型病毒在人肝癌细胞(Huh-7)和蚊虫细胞(C6/36)之间交替传代模拟登革病毒在自然界中的人类与蚊虫间的交替感染,通过检测第10、18代病毒对小鼠的毒力以及在蚊虫中的感染率、传播率来评价病毒的适应性,同时对病毒基因组进行了测序。结果显示,登革2型病毒经交替传代后适应性降低,单种细胞中连续传代后适应性增高。序列分析显示病毒在C6/36细胞中连续传代后积累的突变数少于在Huh-7细胞中连续传代或两种细胞中交替传代积累的突变。另外,连续传代过程中出现的E蛋白155和186位点的氨基酸突变可能与毒力增强有关,交替传代过程中出现的E蛋白307位点氨基酸突变可能与毒力减弱有关。结果揭示了登革病毒毒力变化与基因突变的关系,有助于监测病毒毒力变化,预测疾病的流行。

关键词：登革2型病毒交替传代核苷酸突变毒力

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