由于单细胞具有异质性,因此人们越来越关注单细胞的检测[1,2]。许多疾病的发生和细胞中的一些特定代谢物有关,例如细胞中的ATP,ADP和AMP影响着帕金森症、心脏病和肥胖症的发生,所以对单细胞中的这些代谢物进行靶向测定具有重要意义[3,4]。但细胞培养基中含有与胞内代谢物类似或一致的分子[1],细胞自身的基质也非常复杂,并且细胞处理时使用的含盐缓冲液也会影响质谱检测。对小体积单细胞内的靶向物进行测定时如何去除基质干扰,该问题一直未能解决。在本课题组针对小体积样品除盐问题的研究基础上[5],最近我们提出了一种联合液滴萃取与挥发重溶离子化的方法,适用于单细胞质谱分析时去除基质干扰。我们将经过甲酸铵溶液清洗的MCF-7细胞干燥,随后在显微操作平台上,用2 n L 25%甲醇水溶液作为萃取剂包覆单个MCF-7细胞约10 s后吸回毛细管。待萃取剂挥发后,将电极插入毛细管,用一滴辅助溶剂(含0.1%氨水的50%甲醇水溶液)润湿管尖,随后施加高压直流电(-1.4 k V)进行电喷雾。萃取的使用能有效去除细胞培养基的干扰,而将萃取液挥发再用辅助溶剂重新溶解萃取物的方式,可实现小体积样品的除盐。利用该方法,我们已成功检测出了MCF-7单细胞中的UDP-Glc NAc、GSH、GSSG、AMP、ADP和ATP,并将其应用于细胞氧化磷酸化失调过程的研究中。该方法不但能实现良好的除基质干扰效果,而且能通过变换溶剂选择性地获得细胞中的代谢物,实现单细胞内特定代谢物的高灵敏检测。并且,该方法具有对单细胞样品进行大规模检测的能力,有望用于单细胞高通量质谱分析。
暂无评论