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中国血吸虫病防治杂志 2013年第3期25卷 263-267页

作者：常雪莲薛玉芹张安冬朱国鼎方强蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院临床医学二系江苏省血吸虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室

目的了解安徽省沿淮地区疟疾媒介中华按蚊对溴氰菊酯杀虫剂的抗性状况及谷胱甘肽S转移酶(GSTs)、细胞色素氧化酶(P450s)等代谢解毒酶活性和钠离子通道击倒抗性基因(Knockdown resistance,kdr)的突变情况。方法2011年8-9月采集安徽省蚌... 详细信息

目的了解安徽省沿淮地区疟疾媒介中华按蚊对溴氰菊酯杀虫剂的抗性状况及谷胱甘肽S转移酶(GSTs)、细胞色素氧化酶(P450s)等代谢解毒酶活性和钠离子通道击倒抗性基因(Knockdown resistance,kdr)的突变情况。方法2011年8-9月采集安徽省蚌埠市李楼乡、沫河口镇和沱湖乡中华按蚊成蚊样本,采用WHO成蚊接触筒药膜滤纸接触法,调查3个地区中华按蚊对溴氰菊酯抗性状况。随机挑选样本采用生化法检测代谢解毒酶活性并用PCR扩增产物直接测序法检测分析钠离子通道kdr基因IIS6片段L1014位点基因型。结果李楼乡、沫河口镇和沱湖乡3个检测点的中华按蚊对溴氰菊酯60 min内击倒率分别为4.1%、7.0%和8.2%,恢复24 h后校正死亡率分别为8.2%、12.0%、12.8%,均为抗性种群。3个检测点的中华按蚊GSTs和P450s活性均显著高于实验室敏感种群(P<0.001)。3个检测点的中华按蚊kdr基因均发生突变,存在L1014C和L1014F两种突变类型,无野生纯合型(TTG/TTG),实验室敏感种群kdr基因均为无突变的野生纯合型。结论安徽省沿淮地区的中华按蚊已对溴氰菊酯产生较强的抗性,代谢解毒酶活性比实验室敏感种群显著升高,钠离子通道kdr基因L1014位点出现高频率的突变。

关键词：中华按蚊溴氰菊酯抗性代谢解毒酶 kdr 基因突变沿淮地区

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抗猪带绦虫六钩蚴兔血清的制备及重组质粒pcDNA3.1/TSO45-4B在小鼠骨骼肌的表达

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蚌埠医学院学报 2006年第5期31卷 441-444,F0004页

作者：徐胜贵方强孙新夏惠杨小迪胡守锋陈兴智王雪梅蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室(蚌埠医学院) 安徽蚌埠233030

目的:制备抗六钩蚴全虫可溶性抗原的兔血清,观察本室制备的猪带绦虫六钩蚴期特异性抗原基因TSO45-4B的重组核酸疫苗pcDNA3.1/TSO45-4B经肌肉接种后在宿主体内的表达。方法:用次氯酸钠法孵化六钩蚴,Dot-Blo、tELISA检测兔血清中特异性抗... 详细信息

目的:制备抗六钩蚴全虫可溶性抗原的兔血清,观察本室制备的猪带绦虫六钩蚴期特异性抗原基因TSO45-4B的重组核酸疫苗pcDNA3.1/TSO45-4B经肌肉接种后在宿主体内的表达。方法:用次氯酸钠法孵化六钩蚴,Dot-Blo、tELISA检测兔血清中特异性抗体及滴度;以pcDNA3.1/TSO45-4B进行体内转染,继之免疫组化法观察其在鼠体骨骼肌的表达。结果:抗六钩蚴兔血清多克隆抗体制备成功,抗体效价为1∶20 100;免疫组化染色后在重组质粒注射部位肌肉组织的肌纤维内显示阳性的棕黄色分泌颗粒。结论:重组质粒在小鼠骨骼肌内成功地表达为猪囊尾蚴病多基因DNA疫苗的研制提供了体内表达的依据之一。

关键词：带绦虫六钩蚴抗血清质粒骨骼肌表达

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结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因的克隆与序列分析

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蚌埠医学院学报 2013年第11期38卷 1385-1388页

作者：薛玉芹王英陈勇李江艳李倩唐洁夏惠王雪梅方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的:克隆结核分枝杆菌减毒株H37Ra培养滤液蛋白10(CFP10)基因,并对其进行序列分析。方法:自结核菌H37Ra株抽提基因组DNA为模板,以已知结核菌H37Ra株CFP10基因设计引物。通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增出结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,... 详细信息

目的:克隆结核分枝杆菌减毒株H37Ra培养滤液蛋白10(CFP10)基因,并对其进行序列分析。方法:自结核菌H37Ra株抽提基因组DNA为模板,以已知结核菌H37Ra株CFP10基因设计引物。通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增出结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,将其克隆至pTG19-T载体后,经PCR和双酶切鉴定后进行DNA序列测定,并以BLAST在线软件进行序列比对分析。结果:PCR产物电泳显示扩增片段约为300 bp,测序获得的片段开放编码框由303 bp组成,与H37Rv株CFP10基因同源性为100%,推导出编码氨基酸序列同源性为100%。结论:成功克隆结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,其基因序列与H37Rv株CFP10基因序列无差异。

关键词：结核分枝杆菌 H37Ra株培养滤液蛋白10基因克隆序列分析

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囊包形成初期旋毛虫感染小鼠脾脏分泌白细胞介素-22的淋巴细胞来源分析

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中华地方病学杂志 2019年第6期38卷 458-462页

作者：周亚兰陶志勇刘晓婕王悦悦马梦晴赵旋辰唐洁李柏青夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院临床医学院2016级安徽蚌埠233030 蚌埠医学院精神医学系2017级安徽蚌埠233030 蚌埠医学院临床医学院2017级安徽蚌埠233030 蚌埠医学院公共基础学院安徽蚌埠233030

目的探讨囊包形成初期旋毛虫感染的小鼠脾脏分泌白细胞介素(IL)-22的淋巴细胞来源。方法选择12只Balb/c小鼠,按体重采用随机数字表法分为感染组与对照组,每组6只。感染组小鼠经口感染旋毛虫肌幼虫300条/只,对照组给予等量生理盐水灌胃... 详细信息

目的探讨囊包形成初期旋毛虫感染的小鼠脾脏分泌白细胞介素(IL)-22的淋巴细胞来源。方法选择12只Balb/c小鼠,按体重采用随机数字表法分为感染组与对照组,每组6只。感染组小鼠经口感染旋毛虫肌幼虫300条/只,对照组给予等量生理盐水灌胃。于感染后第4周用流式细胞术分析两组小鼠脾脏淋巴细胞中分泌IL-22的细胞亚群。结果感染组小鼠脾脏淋巴细胞中产生IL-22的淋巴细胞比例相比于对照组明显升高[(0.88±0.25)%比(0.28±0.17)%,t =- 4.899,P<0.05];感染组小鼠脾脏淋巴细胞中CD3^+IL-22^+细胞比例与CD3-IL-22^+细胞比例相比未见明显改变[(0.29±0.17)%比(0.51±0.17)%,t =- 2.195,P > 0.05],感染组CD3-IL-22^+细胞比例与对照组相比,差异无统计学意义[(0.51±0.17)%比(0.44±0.22)%,t =- 0.600,P > 0.05],感染组CD3^+IL-22^+细胞比例相比于对照组显著升高[(0.29±0.17)%比(0.07±0.06)%,t =- 3.068,P<0.05];CD3^+淋巴细胞中,感染组小鼠CD4^+IL-22^+ T细胞比例和γδTCR^+IL-22^+ T细胞比例相比于对照组明显升高[(1.28±0.54)%比(0.16±0.07)%,(0.33±0.22)%比(0.02±0.00)%,t =- 4.997、- 3.342,P均< 0.05]。结论囊包形成初期感染旋毛虫的小鼠脾脏分泌IL-22的淋巴细胞比例增高,主要由分泌IL-22的CD3^+淋巴细胞(尤其是分泌IL-22的CD4^+ T细胞和γδT细胞)比例升高所致。

关键词：旋毛虫小鼠脾白细胞介素-22 CD4^+ T细胞 γδT细胞

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幽门螺杆菌对胃黏膜上皮细胞自噬和凋亡的影响

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蚌埠医学院学报 2014年第6期39卷 705-710页

作者：吕杰李柏青刘勇马丽娜刘婷婷刘丛森蚌埠医学院微生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的：探讨幽门螺杆菌（Hp）对胃黏膜上皮细胞（GES-1）自噬和凋亡的影响。方法：Hp与GES-1体外共培养，同时设立雷帕霉素（RAPA）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预组及空白对照组，于2、4、6、12及24 h终止感染，通过免疫蛋白印迹、荧光染... 详细信息

目的：探讨幽门螺杆菌（Hp）对胃黏膜上皮细胞（GES-1）自噬和凋亡的影响。方法：Hp与GES-1体外共培养，同时设立雷帕霉素（RAPA）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预组及空白对照组，于2、4、6、12及24 h终止感染，通过免疫蛋白印迹、荧光染色、透射电镜、流式细胞术及细胞内活菌计数等方法观察Hp对GES-1自噬和凋亡的影响。结果：Hp＋GES-1组在2 h出现自噬标志蛋白LC3-Ⅱ表达及细胞内荧光自噬颗粒，透射电镜观察到细胞内出现双层或多层膜包裹的自噬小体样结构，细胞自噬在4 h达高峰，感染中后期逐渐减弱并消失；RAPA＋Hp＋GES-1组细胞自噬程度进一步增强，细胞凋亡率及细胞内活菌数均降低（P〈0.05-P〈0.01）；3-MA＋Hp＋GES-1组细胞自噬强度显著降低，而其细胞凋亡率和细胞内活菌数均明显升高（P 〈0.01）。结论：Hp可在感染早期诱导GES-1自噬；RAPA和3-MA可增强或降低自噬发生程度，从而减轻或促进细胞损伤。

关键词：幽门螺杆菌自噬细胞凋亡雷帕霉素 3-甲基腺嘌呤

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结核分枝杆菌ESAT6疫苗的研究进展

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淮海医药 2013年第6期31卷 576-579页

作者：王英王雪梅方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

结核病是由结核分枝杆菌（MTB）引起的一种严重危害人类健康的重要传染性疾病。根据WHO发布的《2011年全球结核病（TB）控制报告》，患结核病的人数降到2010年的880万，结核病死亡数降到140万人，结核病死亡率在1990年和2010年之间下降... 详细信息

结核病是由结核分枝杆菌（MTB）引起的一种严重危害人类健康的重要传染性疾病。根据WHO发布的《2011年全球结核病（TB）控制报告》，患结核病的人数降到2010年的880万，结核病死亡数降到140万人，结核病死亡率在1990年和2010年之间下降了40％，除非洲之外，其他区域都可按期实现到2015年时使死亡率降低50％这一目标；但是流动人口剧增、结核菌与艾滋病毒双重感染和耐药结核菌病的增多均增加了结核病防治工作的难度，使得结核病疫情的形势依然严峻，防治任务仍然十分艰巨。在艾滋病感染患者中结核的发病率则更高，艾滋病毒携带者同时感染了结核分枝杆菌后，发生结核病的可能性是正常人的34倍。

关键词：结核分枝杆菌疫苗 ESAT6

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基于蛋白重复序列及线性B细胞表位预测筛选间日疟原虫特异性抗原肽

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中国血吸虫病防治杂志 2014年第3期26卷 292-295,310页

作者：陶志勇徐岁王媛媛方强夏惠高琪蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫分子生物学重点实验室

目的建立一种基于蛋白重复序列及线性B细胞表位预测筛选间日疟原虫(Plasmodium vivax,***)特异性抗原肽的方法。方法以PlasmoDB数据为基础,建立间日疟原虫蛋白序列数据库。编写重复序列查找软件,逐一检索16 aa多肽在全部蛋白序列中的重... 详细信息

目的建立一种基于蛋白重复序列及线性B细胞表位预测筛选间日疟原虫(Plasmodium vivax,***)特异性抗原肽的方法。方法以PlasmoDB数据为基础,建立间日疟原虫蛋白序列数据库。编写重复序列查找软件,逐一检索16 aa多肽在全部蛋白序列中的重复次数,统计出重复较高者进行连续B细胞表位预测,优选具有间日疟原虫特异性的肽进行合成,偶联钥孔戚血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)后免疫小鼠,并检测抗体滴度。结果通过软件分析间日疟原虫全部5 432个蛋白序列中的16肽的重复次数,利用BcePred网站预测其中重复较高的1 000个序列,获得22个候选肽,经聚类分析和相似性比较,优选到5个潜在特异性肽,人工合成并偶联KLH后免疫小鼠诱生的抗体滴度均超过1:9 000。结论建立了一种基于蛋白重复序列联合线性B细胞表位预测筛选间日疟原虫特异性抗原肽的方法,得到的5个肽均能诱导小鼠产生高滴度抗体。

关键词：间日疟原虫疟疾重复蛋白序列抗原表位

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人白细胞介素23 p19亚基基因的克隆和序列分析

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蚌埠医学院学报 2010年第6期35卷 545-547页

作者：骆江坤方强齐文娟王雪梅蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030

目的:克隆人白细胞介素-23(IL-23)p19亚基基因。方法:分离健康成年人外周血单个核细胞,常规培养后用脂多糖至终浓度为100 ng/m l刺激增殖12 h,收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增人IL-23 p19 cDNA编码基因,克隆至pMD18-T载体,PC... 详细信息

目的:克隆人白细胞介素-23(IL-23)p19亚基基因。方法:分离健康成年人外周血单个核细胞,常规培养后用脂多糖至终浓度为100 ng/m l刺激增殖12 h,收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增人IL-23 p19 cDNA编码基因,克隆至pMD18-T载体,PCR鉴定后进行序列测定。结果:RT-PCR产物电泳结果显示所扩增的基因为734 bp,基因测序显示其序列与GenBank报道的人IL-23 p19基因序列完全一致。结论:成功地克隆了人IL-23 p19 cDNA编码基因。

关键词：白细胞介素23,人 p19 RT-PCR 基因克隆序列测定

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怀远县居民华支睾吸虫病健康知识及行为的调查

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应用预防医学 2019年第2期25卷 125-127+130页

作者：席进李江艳唐洁杨小迪申林方强蚌埠医学院科研仪器中心蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室

目的了解安徽省怀远县居民对华支睾吸虫病知晓情况以及相关行为,为华支睾吸虫病防治工作提供参考。方法以当地常住居民为研究对象,采用自拟问卷进行华支睾吸虫病健康知识及行为调查,统计分析当地居民对华支睾吸虫病的知晓率及相关行为... 详细信息

目的了解安徽省怀远县居民对华支睾吸虫病知晓情况以及相关行为,为华支睾吸虫病防治工作提供参考。方法以当地常住居民为研究对象,采用自拟问卷进行华支睾吸虫病健康知识及行为调查,统计分析当地居民对华支睾吸虫病的知晓率及相关行为。结果共发放307份问卷,回收率100.00%。调查对象年龄以41～60岁(45.27%)、男性(55.56%)、初中文化(42.99%)和农民(89.25%)为主。怀远县居民的华支睾吸虫病知识知晓率在1.62%～6.19%范围之间,知晓率普遍不高。在听说过华支睾吸虫病、知道华支睾吸虫病对人体有害方面,不同年龄和职业组人群存在差异;在传播途径、患病后临床表现以及预防措施方面,不同职业组人群中存在差异,以上差异均有统计学意义(P<0.01)。怀远县居民的华支睾吸虫病相关行为正确率最高的选项为患病后愿意花钱去治疗(97.71%),最低的选项为生熟案板分开(1.62%)。在患病后愿意花钱治疗方面,不同年龄组和文化程度的人群存在差异;在生吃和半生吃鱼虾方面,不同性别和文化程度的人群存在差异;在抓鱼后洗手或不用嘴叼鱼方面,不同性别、年龄、文化程度和职业的人群均存在差异,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论安徽省怀远县居民对华支睾吸虫病相关知识知晓率较低,且存在不良饮食习惯,因此有必要加大华支睾吸虫病和正确健康行为的宣传力度,确立健康信念,促进健康生活方式与行为的形成。

关键词：华支睾吸虫病肝吸虫病流行病学健康教育相关行为

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猪白细胞介素12 p35、p40亚基基因的克隆和序列分析

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蚌埠医学院学报 2008年第6期33卷 644-647页

作者：袁远英方强孙新王雪梅李柏青夏惠蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室(蚌埠医学院) 安徽蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030

目的:克隆猪白细胞介素(IL)-12p35、p40亚基基因,为制备猪囊尾蚴的复合基因疫苗奠定基础。方法:分别分离成年猪的外周血单个核细胞和脾细胞,培养10h后用IFN-γ(100ng/ml)刺激增殖12h,随后加入细菌脂多糖(1μg/ml)刺激培养3h,分别收集细... 详细信息

目的:克隆猪白细胞介素(IL)-12p35、p40亚基基因,为制备猪囊尾蚴的复合基因疫苗奠定基础。方法:分别分离成年猪的外周血单个核细胞和脾细胞,培养10h后用IFN-γ(100ng/ml)刺激增殖12h,随后加入细菌脂多糖(1μg/ml)刺激培养3h,分别收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增猪IL-12p35、p40cDNA编码基因,克隆至pMD18-T载体,经PCR和双酶切鉴定后进行序列测定。结果:猪IL-12p35、p40cDNAPCR产物电泳结果证明所克隆的基因分别为616bp和1011bp,基因测序结果与GenBank报道的基因序列各有一个碱基差异,但编码氨基酸无差异,证实分别为猪IL-12p35、p40cDNA编码基因。结论:成功克隆了猪IL-12p35、p40cDNA编码基因。

关键词：囊尾蚴病白细胞介素12 p35 p40 RT-PCR 基因克隆序列测定

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