检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究 2015年第46期19卷 7451-7455页

作者：阮光萍姚翔刘菊芬王金祥庞荣清潘兴华解放军成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心云南省昆明市650032 干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省昆明市650032 云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省昆明市650032

背景:如果一种提取液与细胞共培养后,能增加细胞周期的S期,减少细胞凋亡百分比,则证明这种提取液有促细胞增殖的作用。目的:验证鸡卵清提取液不同组分对293T细胞的增殖及细胞生长周期及细胞凋亡的影响。方法:用超滤管将鸡卵清提取液分... 详细信息

背景:如果一种提取液与细胞共培养后,能增加细胞周期的S期,减少细胞凋亡百分比,则证明这种提取液有促细胞增殖的作用。目的:验证鸡卵清提取液不同组分对293T细胞的增殖及细胞生长周期及细胞凋亡的影响。方法:用超滤管将鸡卵清提取液分离为大于10 ku和小于10 ku和大于3 ku和小于3 ku的成分,用于与细胞共培养,培养3 d后,检测细胞增殖,细胞周期与细胞凋亡情况。结果与结论:鸡卵清提取液中小于10 ku和小于3 ku的成分有促细胞增殖的作用,同时有促进细胞周期S期百分比增加,细胞凋亡百分比减少的作用。结果提示鸡卵清提取液中小于10 ku和小于3 ku的成分有促细胞增殖的作用,还有促进细胞周期S期百分比增加,细胞凋亡百分比减小的作用。

关键词：组织构建组织工程鸡卵清提取液不同成分细胞周期细胞凋亡细胞增殖

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重编程细胞的命运

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中国组织工程研究 2015年第23期19卷 3768-3772页

作者：阮光萍姚翔刘菊芬胡媛媛王金祥何洁赵晶潘兴华解放军成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省昆明市650032

背景:体细胞重新编程技术也称细胞重组技术,使已经完成分化的体细胞回到原始的全能性或多能性状态,并可以重新分化成与原来不一样的细胞。通过重编程技术可以获得患者特异性诱导多能干细胞和疾病特异性诱导多能干细胞,显著减少了免疫排... 详细信息

背景:体细胞重新编程技术也称细胞重组技术,使已经完成分化的体细胞回到原始的全能性或多能性状态,并可以重新分化成与原来不一样的细胞。通过重编程技术可以获得患者特异性诱导多能干细胞和疾病特异性诱导多能干细胞,显著减少了免疫排斥反应。目的:探讨关于直接重编程到特定系的方法,总结参与重编程的分子机制。方法:以"重编程"为中文检索词,"reprogramming"为英文检索词,应用计算机检索维普(VIP)期刊全文数据库、万方全文数据库、中国知网全文数据库、PubM ed数据库、Springer数据库1958年1月至2015年4月有关细胞重编程技术的文献,排除与研究目的无关及重复性研究,保留40篇文献进一步分析。结果与结论:当前重编程的步骤效率很低,在特定群只有相对少量的细胞能进行重编程,重编程的完整性和程度也有待证实。直接重编程成体、定系的细胞从一种细胞到另一种细胞一直是发育生物学很难达到的目标。最近的研究证明分化的细胞强制表达特异转录因子能促进细胞分化。这些发现使再生医学领域有了重大进展,可以提供替代细胞治疗各种再生紊乱。目前,基本的分子机制需要进一步阐明,在直接重编程被应用于临床之前还有许多问题需要解决。

关键词：核程序重排转录因子诱导多功能干细胞干细胞分化重编程特异转录因子再生医学多能性

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Notch1基因沉默抑制骨髓源性脂肪祖细胞向成熟脂肪细胞分化

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西南国防医药 2016年第12期26卷 1374-1378页

作者：王金祥王小华白盈盈周芳蔡学敏刘菊芬李自安余争平朱光旭潘兴华成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心、干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合实验室、云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室、昆明医科大学成都军区昆明总医院临床学院昆明650032 重庆市公安局渝中区分局物证鉴定所第三军医大学预防医学院电磁辐射生物学效应研究所

目的探讨Notch1对骨髓源性脂肪祖细胞（BMAPCs）向脂肪细胞分化的影响。方法无菌取sD大鼠股、胫骨骨髓制作细胞悬液，差速贴壁法培养，流式分析检测细胞表面标志表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（real-timeqPCR）检测脂肪相关基因和No... 详细信息

目的探讨Notch1对骨髓源性脂肪祖细胞（BMAPCs）向脂肪细胞分化的影响。方法无菌取sD大鼠股、胫骨骨髓制作细胞悬液，差速贴壁法培养，流式分析检测细胞表面标志表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（real-timeqPCR）检测脂肪相关基因和Notch信号分子表达。Notch1基因沉默实验分为空载体组和Notch1小RNA干扰组。Westernblotting检测干扰效率；STEMPRO Adipogenesis Differentiation Kit行细胞成脂诱导。结果BMAPCs表达CD34、CD44、CD45及CD90，且表达6种脂肪相关基因及Notch信号分子；成脂诱导促进Notch1mRNA表达（P〈0．01）；Notch1小RNA干扰抑制Notch1蛋白表达（P〈0．05）。Notch1小RNA干扰组的Cebpa、Lpl和Ppqγ、Slc2a4与Fabp4 mRNA表达均较对照显著降低，而pread1mRNA表达显著增加（P〈0．05-P〈0．01）；Notch小RNA干扰显著抑制脂肪细胞百分率（P〈0．05）。结论Notch1基因沉默抑制BMAPCs向成熟脂肪细胞分化。

关键词：骨髓源性脂肪祖细胞造血干细胞间充质干细胞 Notch 1

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Notch1基因沉默抑制骨髓源性脂肪祖细胞向成熟脂肪细胞分化

Notch1基因沉默抑制骨髓源性脂肪祖细胞向成熟脂肪细胞分化

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第十五届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：王金祥王小华周芳蔡学敏刘菊芬李自安康华莉朱光旭潘兴华 650032昆明成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室 400013重庆重庆市公安局渝中区分局物证鉴定所 400037重庆第三军医大学新桥医院全军心血管疾病研究所 650032昆明成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室 650032昆明昆明医科大学成都军区昆明总医院临床学院 400037重庆第三军医大学新桥医院全军心血管疾病研究所

目的：探讨Notch1表达对骨髓源性脂肪祖细胞(BMAPCs)向脂肪细胞分化的影响. 方法：无菌取SD大鼠股、胫骨骨髓制作细胞悬液,差速贴壁法培养扩增.流式细胞分析检测表面标志表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)检测脂肪分... 详细信息

目的：探讨Notch1表达对骨髓源性脂肪祖细胞(BMAPCs)向脂肪细胞分化的影响. 方法：无菌取SD大鼠股、胫骨骨髓制作细胞悬液,差速贴壁法培养扩增.流式细胞分析检测表面标志表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)检测脂肪分化相关基因和Notch信号分子表达;实验分为空载体组和Notch1小RNA干扰组,Western blotting检测Norch1干扰效率;STEMPRO Adipogenesis Differentiation Kit行细胞成脂肪分化诱导,油红O染色且DAPI标记核检测成脂肪细胞百分率. 结果：BMAPCs表达CD34、CD44、CD45以及CD90;PCR扩增显示BMAPCs表达Ppaγ等6种脂肪分化标志基因以及Notch信号分子受体和配体;成脂诱导促进Notch1mRNA在BMAPCs表达,与第1天相比,成脂肪分化诱导第2天Notch1mRNA表达显著增加(P＜0.01);与空载体组相比,Notch1小RNA干扰组蛋白表达量显著降低(P＜0.05);与空载体组相比,Notch siRNA组Cebpa(P＜0.05)、Lpl(P＜0.05)、Ppaγ(P＜0.05)、S1c2a4(P＜0.01)及Fabp4(P＜0.01)mRNA表达均显著降低,而pread1mRNA表达显著增加(P＜0.05);与空载体组相比,Notch siRNA组脂肪细胞百分率显著降低(P＜o.05). 结论：Notch1基因沉默抑制骨髓源性脂肪祖细胞向成熟脂肪细胞分化.

关键词：骨髓源性脂肪祖细胞脂肪细胞定向分化 Notch1基因抑制作用

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脐带间充质干细胞对体外外周血单核细胞的影响

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西南国防医药 2015年第8期25卷 820-822页

作者：庞荣清王强石琳琳杨建勇何洁朱向情阮光萍朱光旭潘兴华成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省干细胞工程实验室昆明650032

目的观察脐带间充质干细胞(UC-MSC)对体外外周血单核细胞的影响。方法分离人UC-MSC和外周血单核细胞,流式分析技术鉴定单核细胞CD45和CD3的表达率;UC-MSC和单核细胞按不同比例共培养72 h,采用免疫荧光染色和ELISA方法检测γ干扰素(IFN-... 详细信息

目的观察脐带间充质干细胞(UC-MSC)对体外外周血单核细胞的影响。方法分离人UC-MSC和外周血单核细胞,流式分析技术鉴定单核细胞CD45和CD3的表达率;UC-MSC和单核细胞按不同比例共培养72 h,采用免疫荧光染色和ELISA方法检测γ干扰素(IFN-γ)在细胞内和培养上清的表达。结果采用含10%血清的DMEM/F12可以从新鲜脐带分离到UC-MSC,密度梯度离心法可以从外周血中分离到单核细胞,CD45阳性率为89.4%,CD3阳性率为80.7%。可在CD3/CD28刺激培养的单核细胞检测到IFN-γ的表达,1∶10和1∶20共培养上清IFN-γ的含量显著低于仅有单核细胞的对照组(P<0.01)。结论UC-MSC的存在可以影响IFN-γ在单核细胞的表达,这种影响与两种细胞的比例有关。

关键词：脐带间充质干细胞单核细胞共培养 γ干扰素影响

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体外诱导体细胞逆分化为多能干细胞及对老年猴的影响

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西南国防医药 2015年第8期25卷 816-819页

作者：朱向情蔡学敏王强沈丽蓉朱光旭庞荣清潘兴华成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省干细胞工程实验室昆明650032

目的探讨诱导自体外周血单个核细胞逆向分化为多能干细胞样细胞的方法及诱导细胞对老年猕猴衰老相关血液生化指标的影响。方法利用鱼卵母细胞提取物与体外共培养法诱导猕猴外周血单个核细胞转化为多能干细胞样细胞,采用静脉回输的方法,... 详细信息

目的探讨诱导自体外周血单个核细胞逆向分化为多能干细胞样细胞的方法及诱导细胞对老年猕猴衰老相关血液生化指标的影响。方法利用鱼卵母细胞提取物与体外共培养法诱导猕猴外周血单个核细胞转化为多能干细胞样细胞,采用静脉回输的方法,将该细胞回输给20～24周岁的老年猕猴,检测并比较回输前后猕猴的体重、血常规以及超氧化物歧化酶（SOD）等指标的变化。结果与自体诱导性多潜能干细胞回输前相比,回输后3个月,猕猴体重无明显变化,外周血中SOD的活力和血小板的数量显著升高,血Na＋、K＋、CO2、AG含量显著升高,肌酐、尿酸、LDL-胆固醇含量显著降低。结论鱼卵细胞提取物可诱导部分外周血单个核细胞逆向分化为多能干细胞样细胞,该细胞能够显著改善与衰老相关的血液生化指标。

关键词：猕猴诱导性多潜能干细胞生化指标成体细胞抗衰老

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干细胞治疗技术研究与实践

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西南国防医药 2015年第8期25卷 840-843页

作者：潘兴华庞荣清蔡学敏阮光萍朱光旭杨建勇成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省干细胞工程实验室昆明650032

利用干细胞（stem cell,SC）的自我更新和多向分化特性来治疗损伤、退变性疾病是医学发展的新方向。SC可来源于早期胚胎和成体组织,还可通过体细胞核移植、基因导入及生物活性因子诱导等方式获得[1]。不同来源的干细胞具有共同的生物特... 详细信息

利用干细胞（stem cell,SC）的自我更新和多向分化特性来治疗损伤、退变性疾病是医学发展的新方向。SC可来源于早期胚胎和成体组织,还可通过体细胞核移植、基因导入及生物活性因子诱导等方式获得[1]。不同来源的干细胞具有共同的生物特性,但在分化潜能上有一定差异。胚胎干细胞（embryonic stem cell，ESC）具有强大的可塑性，但涉及临床应用尚存在伦理、安全及技术问题。

关键词：干细胞治疗技术实践

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鸡卵清提取液促进C57小鼠骨髓间充质干细胞增殖的研究

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西南国防医药 2015年第8期25卷 826-828页

作者：阮光萍刘菊芬王金祥何洁杨建勇潘兴华成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省干细胞工程实验室昆明650032

目的研究鸡卵清提取液是否有促进间充质干细胞增殖的作用。方法分离培养C57小鼠骨髓间充质干细胞,并用细胞增殖检测试剂盒检测培养基、PBS、HBSS和鸡卵清提取液不同终浓度、不同培养时间对细胞增殖的作用。结果鸡卵清提取液在不同终浓... 详细信息

目的研究鸡卵清提取液是否有促进间充质干细胞增殖的作用。方法分离培养C57小鼠骨髓间充质干细胞,并用细胞增殖检测试剂盒检测培养基、PBS、HBSS和鸡卵清提取液不同终浓度、不同培养时间对细胞增殖的作用。结果鸡卵清提取液在不同终浓度、培养不同时间条件下,对细胞的促增殖作用都大于培养基、PBS和HBSS。结论鸡卵清提取液能促进C57小鼠骨髓间充质干细胞增殖。

关键词：鸡卵清 C57小鼠骨髓间充质干细胞增殖

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骨髓胚胎样干细胞体内重建dystrophin的表达

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西南国防医药 2015年第8期25卷 823-825页

作者：庞荣清王强杨建勇朱光旭李自安何洁朱向情阮光萍潘兴华成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省干细胞工程实验室昆明650032

目的观察骨髓胚胎样干细胞体内再生dystrophin的可行性。方法采用SSP-PCR方法鉴定mdx小鼠的基因型。分离扩增人骨髓胚胎样干细胞,采用DIR标记后,注射细胞到mdx小鼠腹股沟三角皮下,采用活体成像法观察植入细胞的存活情况,采用免疫荧光染... 详细信息

目的观察骨髓胚胎样干细胞体内再生dystrophin的可行性。方法采用SSP-PCR方法鉴定mdx小鼠的基因型。分离扩增人骨髓胚胎样干细胞,采用DIR标记后,注射细胞到mdx小鼠腹股沟三角皮下,采用活体成像法观察植入细胞的存活情况,采用免疫荧光染色法检测dystrophin的表达。结果杂合子鼠交配可以产生3个基因型的子代鼠,采用SSP-PCR可以鉴定出mdx小鼠基因型;采用无血清培养基可从骨髓中分离到表达SSEA-4和FZD-9的胚胎样干细胞,可在注射细胞的mdx小鼠离体后肢肌肉检测到明显的荧光信号,并在肌肉组织中检测到人dystrophin的表达。结论人骨髓胚胎样干细胞可在mdx小鼠体内存活并表达dystrophin。

关键词：骨髓胚胎样干细胞 mdx小鼠基因型 dystrophin Duchenne型肌营养不良

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多次贴壁法高效制备人脐带间充质干细胞

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西南国防医药 2015年第8期25卷 828-831页

作者：何洁赵晶王金祥蔡学敏庞荣清潘兴华成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省干细胞工程实验室昆明市干细胞与再生医学研究重点实验室昆明650032

目的建立一套简单、高效、稳定、规范的人脐带间充质干细胞体外制备与鉴定技术,为人脐带间充质干细胞库建设及临床应用提供技术规范。方法改进前期技术方法,重复验证,建立规范化技术方法。无菌采集足月剖宫产分娩胎儿脐带,采用不剥离血... 详细信息

目的建立一套简单、高效、稳定、规范的人脐带间充质干细胞体外制备与鉴定技术,为人脐带间充质干细胞库建设及临床应用提供技术规范。方法改进前期技术方法,重复验证,建立规范化技术方法。无菌采集足月剖宫产分娩胎儿脐带,采用不剥离血管和包膜组织贴壁法培养脐带间充质干细胞。待原代细胞长出时,收集原本换液应丢弃的组织块,进行二次贴壁培养,如此反复,待二次贴壁组织块长出细胞时,收集组织块进行三次贴壁培养。对三次贴壁培养长出的第三代细胞进行生物学特性分析。结果首次组织贴壁后10～12 d可见成纤维样细胞从组织块爬出,二次、三次贴壁后第2 d就可见成纤维细胞样细胞爬出,且生长状况好,细胞形态更为均一。三次贴壁培养的第三代细胞都高表达CD29、CD44、CD90和CD105,不表达CD34和CD45。细胞生长曲线呈＂S＂型,均具有成脂、成骨、成软骨分化的能力。结论采用多次贴壁法制备的人脐带间充质干细胞充分利用了脐带组织块,且得到的原代细胞数量翻倍,其生物学特性稳定。

关键词：脐带间充质干细胞分离贴壁培养

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