检索结果-内蒙古大学图书馆

四川大学学报（医学版） 2010年第3期41卷 394-397页

作者：薛红利蔺诗佳何东孟文彤牛挺四川大学华西医院血液科血液病研究室成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞生物学研究室成都610041

目的构建含有小鼠干扰素-γ(mIFN-γ)基因的腺病毒载体,为探索IFN-γ在肝纤维化治疗中的作用研究奠定基础。方法从含有mIFN-γ基因的质粒载体pORF5-mIFN-γ中PCR扩增出mIFN-γ基因片段,双酶切将该基因克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV中,限... 详细信息

目的构建含有小鼠干扰素-γ(mIFN-γ)基因的腺病毒载体,为探索IFN-γ在肝纤维化治疗中的作用研究奠定基础。方法从含有mIFN-γ基因的质粒载体pORF5-mIFN-γ中PCR扩增出mIFN-γ基因片段,双酶切将该基因克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV中,限制性内切酶PmeⅠ线性化pAdTrack-CMV-mIFN-γ,转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌株BJ5183细胞,同源重组。卡那霉素及酶切筛选出重组子pAd-mIFN-γ,内切酶PacⅠ线性化重组子,用磷酸钙法转染细胞株AD-293进行包装,收集病毒进行鉴定。结果 PCR后测序获得mIFN-γ基因,全长468 bp,与GenBank中发表的mIFN-γ基因核苷酸序列完全一致。经酶切和PCR证实各中间过程载体均含有目的基因。包装的病毒Ad-mIFN-γ在转染的4～6 d观察到荧光产生,8～11 d荧光逐渐增加,12 d收集病毒液。蛋白酶K裂解重组腺病毒,经PCR和Western blot方法鉴定,证实携带有目的基因mIFN-γ。结论大肠杆菌内同源重组法能有效和较为方便地构建出含有目的基因的腺病毒载体pAd-mIFN-γ,重组子能够在AD-293细胞中进行包装和扩增,病毒包装的成功为进一步研究mIFN-γ基因治疗小鼠肝纤维化提供了一个良好的转导载体。

关键词： mIFN-γ基因腺病毒载体重组

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脂质体包裹水泡口炎病毒基质蛋白对小鼠淋巴瘤的治疗作用及机制研究

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四川大学学报（医学版） 2011年第2期42卷 213-217页

作者：蔺诗佳喻琴梅孟文彤文艳君陈俐娟牛挺四川大学华西医院血液科血液病研究室成都610041 四川大学干细胞生物学研究室成都610041 四川大学生物治疗国家重点实验室肿瘤生物治疗研究室成都610041

目的探讨采用阳离子脂质体包裹水泡口炎病毒(VSV)基质蛋白(M蛋白)基因重组质粒制备的脂质体质粒DNA复合物(Lip-MP)在实验动物体内的抗淋巴瘤效应及其机制。方法建立C57BL/6小鼠EL4淋巴瘤模型,将60只荷瘤小鼠随机分为5组:脂质体-pcDNA3.1... 详细信息

目的探讨采用阳离子脂质体包裹水泡口炎病毒(VSV)基质蛋白(M蛋白)基因重组质粒制备的脂质体质粒DNA复合物(Lip-MP)在实验动物体内的抗淋巴瘤效应及其机制。方法建立C57BL/6小鼠EL4淋巴瘤模型,将60只荷瘤小鼠随机分为5组:脂质体-pcDNA3.1-MP复合物(Lip-MP)组、脂质体-pcDNA3.1空质粒复合物(Lip-pVAX)组、单纯脂质体(Lip)组、阿霉素(ADM)组和生理盐水(NS)组,经尾静脉给药,观察各组小鼠的一般情况、肿瘤生长体积、小鼠生存期,采用CD31染色检测肿瘤组织的微血管密度(MVD)、TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,Ki-67染色检测细胞增殖。结果 Lip-MP组小鼠与Lip-pVAX组、Lip组、NS组相比,中位生存期延长(P<0.05),与ADM组相比中位生存期差异无统计学意义。从治疗的第6 d开始到观察结束时,Lip-MP组小鼠肿瘤生长更缓慢,体积更小,与Lip-pVAX组、Lip组、NS组相比差异有统计学意义(P<0.05),与ADM组相比差异无统计学意义。肿瘤组织TUNEL、CD31和Ki67染色结果显示,Lip-MP组肿瘤组织凋亡细胞增多,微血管数减少,增殖活性降低,与Lip-pVAX组、Lip组、NS组3个组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论体内研究显示脂质体包裹的水泡口炎病毒M蛋白对小鼠EL4淋巴瘤产生明显抑制作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成和抑制肿瘤细胞增殖有关。

关键词：水泡口炎病毒基质蛋白阳离子脂质体淋巴瘤基因治疗

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大鼠前列腺特异膜抗原基因重组腺病毒诱导小鼠特异性抗体的研究

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四川大学学报（医学版） 2011年第2期42卷 147-151页

作者：王绍军张冬梅杨莉四川大学生命科学学院细胞生物学教研室成都610064 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室肿瘤生物治疗研究室成都610041

目的构建含大鼠前列腺特异膜抗原基因(PSMA)的重组腺病毒Ad-rPSMA,并研究其在小鼠体内的特异性体液免疫反应。方法提取大鼠脑组织总RNA,经RT-PCR扩增PSMA基因片段,利用Adeasy腺病毒载体系统构建pAd-rPSMA重组腺病毒质粒,包装复制缺陷型... 详细信息

目的构建含大鼠前列腺特异膜抗原基因(PSMA)的重组腺病毒Ad-rPSMA,并研究其在小鼠体内的特异性体液免疫反应。方法提取大鼠脑组织总RNA,经RT-PCR扩增PSMA基因片段,利用Adeasy腺病毒载体系统构建pAd-rPSMA重组腺病毒质粒,包装复制缺陷型重组腺病毒Ad-rPSMA,制备病毒颗粒。用制备的病毒感染HeLa细胞,Western blot检测PSMA基因的表达。以Ad-rPSMA重组腺病毒免疫C57小鼠,检测血清中PSMA特异性抗体。结果成功构建了含有大鼠PSMA基因的重组腺病毒,制备的病毒颗粒数为1.97×1012VP/mL,A260/A280值为1.32,病毒滴度为5×1010IU/mL;Western blot检测可见大鼠PSMA基因在HeLa细胞中的表达;ELISA法检测出免疫小鼠血清中存在PSMA特异性抗体。结论成功构建了大鼠前列腺特异膜抗原基因重组腺病毒Ad-rPSMA,并诱导小鼠产生了针对PSMA的特异性抗体。

关键词：前列腺癌前列腺特异膜抗原腺病毒载体同源异种免疫

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斑马鱼管腔器官空腔形态发生及分子机制

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遗传 2013年第4期35卷 449-458页

作者：肖春胡火珍莫显明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室医学干细胞生物学中心四川大学生命科学院成都610041

后生动物复杂的体内结构和器官结构多以网络状的管道系统出现。中空的管腔作为这个系统的重要结构单元承担了运输物质、区分器官不同部位功能、分隔机体和外环境等诸多重要的生理功能。管腔的发育障碍将致使相关器官形态发生畸形、功能... 详细信息

后生动物复杂的体内结构和器官结构多以网络状的管道系统出现。中空的管腔作为这个系统的重要结构单元承担了运输物质、区分器官不同部位功能、分隔机体和外环境等诸多重要的生理功能。管腔的发育障碍将致使相关器官形态发生畸形、功能紊乱。管腔型器官形态发生易被直接观察以及各种相关突变鱼和荧光转基因鱼的出现,使得斑马鱼(Danio rerio)成为管道器官研究的优秀模式动物。斑马鱼血管、神经管、小肠、胰腺外分泌腺、前肾管等几种重要的器官的形态发生都伴随着典型的腔道发育过程,是研究管腔形成的重要器官模型。管腔形成由胞外信号诱导、细胞极性化、胞内物质定向运输、腔内液体形成和胞内细胞骨架重构等相关管腔细胞内外发生的结构功能变化过程所构成,而这些结构与功能的变化过程是通过精确而复杂的分子调控网络来实现,最终形成管道器官。文章对斑马鱼4种典型管腔型器官的空腔形态发生过程进行了综述,并总结了此过程中的分子机制,为今后的相关研究提供了参考。

关键词：管腔管腔器官极性细胞骨架

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Numb与神经发育

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中国细胞生物学学报 2010年第1期32卷 1-16页

作者：钱文雨李华顺四川大学华西第二医院华西发育与干细胞生物学研究所生物治疗国家重点实验室成都610041

不对称性细胞分裂是一个母细胞通过一次分裂,产生两个不同命运的子细胞的分裂方式,是单细胞生物向多细胞生物进化的关键一步。根据现有的证据推论,不称性细胞分裂是在器官发育过程中产生细胞多样化的一种基本方式。Numb是第一个被发现... 详细信息

不对称性细胞分裂是一个母细胞通过一次分裂,产生两个不同命运的子细胞的分裂方式,是单细胞生物向多细胞生物进化的关键一步。根据现有的证据推论,不称性细胞分裂是在器官发育过程中产生细胞多样化的一种基本方式。Numb是第一个被发现决定多细胞生物不对称细胞分裂的信号蛋白。在果蝇中,Numb通过促进Notch泛素化拮抗Notch信号通路,从而决定子细胞的命运,后来的研究表明Numb是细胞内吞调节蛋白,并用通过内吞参与调节神经细胞的粘附,轴突的生长及细胞迁移等过程;并且发现Numb与肿瘤抑制基因p53、泛素化蛋白HDM2形成三聚体抑制p53的泛素化,从而调节肿瘤的恶性程度。本文系统地分析了Numb发现的历史及后来在脊椎动物中的作用和机制,重点介绍了Numb在神经发育过程中的功能。

关键词： Numb 不对称性细胞分裂神经发育 Notch 内吞

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OX-M-AdmCLB1重组腺病毒制备及其诱导的体内抗肿瘤效应

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细胞生物学杂志 2006年第6期28卷 855-860页

作者：张伶魏于全蒋磊李继承浙江大学细胞生物学研究所杭州310031 四川大学华西医院肿瘤生物治疗国家重点实验室成都610041

构建小鼠细胞周期蛋白B1(mcyclinB1)重组腺病毒(AdmCLB1),将氧化型甘露聚糖(OX-M)与AdmCLB1偶联,制备OX-M-AdmCLB1,研究OX-M-AdmCLB1诱导的抗肿瘤效应。利用AdEasy系统构建携带靶基因小鼠细胞周期蛋白B1的复制缺陷型重组腺病毒AdmCLB1,... 详细信息

构建小鼠细胞周期蛋白B1(mcyclinB1)重组腺病毒(AdmCLB1),将氧化型甘露聚糖(OX-M)与AdmCLB1偶联,制备OX-M-AdmCLB1,研究OX-M-AdmCLB1诱导的抗肿瘤效应。利用AdEasy系统构建携带靶基因小鼠细胞周期蛋白B1的复制缺陷型重组腺病毒AdmCLB1,抽提AdmCLB1基因组DNA,进行PCR扩增。重组病毒经扩增、纯化后与OX-M混合,制备OX-M-AdmCLB1;OX-M-AdmCLB1体外感染小鼠树突状细胞(DC),RT-PCR扩增分析靶基因表达;OX-M-AdmCLB1处理BALB/C小鼠,处理后再荷瘤,观察小鼠肿瘤生长及生存情况。重组病毒AdmCLB1终滴度为2.1×1011pfu/ml;DC内靶基因的表达量在OX-M-AdmCLB1组较AdmCLB1组高;体内研究提示OX-M-AdmCLB1可明显抑制CT26肿瘤增殖(抑瘤率44%)、延长动物生存期(P<0.01)。实验制备的新型重组腺病毒OX-M-AdmCLB1体内能够诱导明显的抗肿瘤效应,估计此效应的产生与DC特异识别OX-M-AdmCLB1,进而激活机体抗肿瘤免疫有关。

关键词：细胞周期蛋白B1 氧化型甘露聚糖重组腺病毒肿瘤树突状细胞

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AS-mCLB1重组质粒体外抗肿瘤及化疗增敏作用

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细胞生物学杂志 2007年第4期29卷 539-544页

作者：张伶魏于全宋英蒋磊陈平陈县城李继承浙江大学细胞生物学研究所杭州310058 四川大学华西医院肿瘤生物治疗国家重点实验室成都610041

研究反义全长小鼠细胞周期蛋白B1重组质粒(pAS-mCLB1)体外抗肿瘤及化疗增敏作用。扩增后少量抽提并纯化pAS-mCLB1,通过脂质体将其转染入小鼠露易丝肺癌(LL/2)细胞,RT-PCR和Western印迹测定细胞内细胞周期蛋白B1的表达,观察转染后细胞形... 详细信息

研究反义全长小鼠细胞周期蛋白B1重组质粒(pAS-mCLB1)体外抗肿瘤及化疗增敏作用。扩增后少量抽提并纯化pAS-mCLB1,通过脂质体将其转染入小鼠露易丝肺癌(LL/2)细胞,RT-PCR和Western印迹测定细胞内细胞周期蛋白B1的表达,观察转染后细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。细胞转染48h后,用化疗药物健择(gemcitabine;0.2μmol/L)处理24h,MTT法测定健择对细胞的杀伤作用。研究提示pAS-mCLB1转染后LL/2细胞形态明显异常,细胞内细胞周期蛋白B1表达显著下调,细胞周期阻滞于G1期,增殖受抑,凋亡增加;健择对pAS-mCLB1转染后LL/2细胞的杀伤作用显著增强。重组质粒pAS-mCLB1体外具有明显的抗肿瘤作用,并能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,估计上述作用与其下调肿瘤细胞内细胞周期蛋白B1表达,从而诱导细胞周期阻滞及凋亡等作用相关。

关键词：反义全长cDNA 细胞周期蛋白B1 细胞周期阻滞凋亡化疗敏感性

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PDGF α受体维持胃癌循环肿瘤干细胞存活的机制(英文)

PDGF α受体维持胃癌循环肿瘤干细胞存活的机制(英文)

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第三届"模式生物与人类健康"发育遗传学全国学术研讨会

作者：莫显明成都华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞生物学研究室

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PDGF α受体维持胃癌循环肿瘤干细胞存活的机制(英文)

PDGF α受体维持胃癌循环肿瘤干细胞存活的机制(英文)

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第三届“模式生物与人类健康”发育遗传学全国学术研讨会

作者：莫显明成都华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞生物学研究室

Gastric cancer is the fourth most common cancer worldwide,with a high rate of death and low 5-year survival *** date,there is a lack of efficient therapeutic protocols for gastric *** studies suggest that cancer stem cells(CSCs)are responsible for tumor initiation,invasion,metastasis,and resistance to anticancer *** CSCs have been shown to migrate from tumor tissues into blood vessels to travel to distant sites in body to conduct metastatic *** circulation,

关键词：循环肿瘤干细胞 α受体

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Adiponectin Gene Variation -4522C/T Is Associated with Type 2 Diabetic Obesity and Insulin Resistance in Chinese

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Journal of Genetics and Genomics 2007年第10期34卷 877-884页

作者：刘合焜陈素云张思仲肖翠英任艳田浩明李雪飞四川大学华西医院医学遗传学研究室生物治疗国家重点实验室疾病基因组学研究室成都610041 福建医科大学细胞生物学与遗传学系神经生物学研究中心福州350004 厦门医学高等专科学校微生物与免疫学教研室成都610041 四川大学华西医院内分泌科

The authors investigated the possible association of -4522C/T variation of adiponectin gene with coronary heart disease （CHD） and type 2 diabetes mellitus （T2DM）. Genotyping of SNP --4522C/T in 304 patients with CHD, 389 patients with T2DM, and 405 age and sex-matched healthy control subjects was carried out by means of PCR-RFLP approach. No significant difference in the genotype or allele frequencies was found, either between patients with CHD and control subjects, or between patients with T2DM and control subjects. However, in the subgroup analysis, an association of the TAr genotype and T allele with type 2 diabetes combined with obesity （BMI ≥ 25 kg/m2） was found （P = 0.014 and P = 0.034, respectively）. Also the homeostasis model assessment of insulin resistance （HOMA-IR） in T2DM patients with T/T genotype was significantly higher than that in T2DM patients carrying C allele （P = 0.0069）. The authors＇ findings for the first time demonstrated that SNP --4522 in the adiponectin gene was associated with T2DM that combined with obesity and higher insulin resistance index in patients with T2DM. This indicated that the variation might associate with an increased susceptibility to type 2 diabetic obesity and insulin resistance. But -4522C/T polymorphism did not contribute to the susceptibility of CHD.

关键词： adiponectin single nucleotide polymorphism coronary heart disease type 2 diabetes insulin resistance

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