检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2008年第11期18卷 5-10页

作者：时红星张小荣吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的建立表达CD150基因的非洲绿猴肾细胞系Vero-CD150,提高犬瘟热病毒的分离效率。方法分离健康犬血液中的白细胞,并克隆编码CD150的基因,构建真核表达质粒pIRES-CD150,将该质粒转染Vero细胞系,经过克隆化筛选获得Vero-CD150细胞系。利... 详细信息

目的建立表达CD150基因的非洲绿猴肾细胞系Vero-CD150,提高犬瘟热病毒的分离效率。方法分离健康犬血液中的白细胞,并克隆编码CD150的基因,构建真核表达质粒pIRES-CD150,将该质粒转染Vero细胞系,经过克隆化筛选获得Vero-CD150细胞系。利用RT-PCR、流式细胞仪(FCM)进行鉴定,同时对临床检测为阳性的自然发病犬,取肝、肺、脾脏等脏器为病料,接种于Vero-CD150细胞系。结果RT-PCR和流式细胞仪皆检测到CD150在Vero细胞中能够稳定表达;与Vero细胞系相比,Vero-CD150细胞系的生长特性相似;接种病料后,感染细胞不仅产生明显的细胞病变,且用RT-PCR可检测到病毒核酸。结论本试验使CD150基因能在体外转入正常的非洲绿猴肾细胞系Vero中,获得稳定表达CD150基因的Vero细胞亚克隆,并使后者结合CDV的能力明显增强。该细胞系的建立,为更有效的分离犬瘟热病毒打下了基础,可用于进一步研究。

关键词：犬瘟热病毒 CD150 Vero细胞系

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2006～2007年流行流感病毒减毒疫苗株的构建(英文)

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生物化学与生物物理进展 2008年第3期35卷 312-319页

作者：杨鹏辉叶艺石辛甫罗德炎张钰颜艳张鹏飞段跃强邢丽刘秀梵王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 西北农林科技大学动物科技学院杨陵712100 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

选择冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株作为骨架病毒,对其6个内部基因片段进行了全基因合成,同时人工引入5个氨基酸突变(PB1-391E,581G,661T,PB2-265S,NP-34G).HA和NA来源于2006～2007当年流行株A/New Caledonia/20/99(H1N1).8个基因片段通过与改造后的转录载体pAD3000连接,构建8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒:pMDV-A-PB2、pMDV-A-PB1、pMDV-A-PA、pMDV-A-NP、pMDV-A-M、pMDV-A-NS、pMDV-A-HA、pMDV-A-NA.6质粒与当年流行株的表面基因HA和NA进行"6+2"组合的病毒拯救,8个重组质粒共转染COS-1细胞,成功拯救出了具有血凝性的冷适应减毒的重组A型人流感病毒.鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝效价为1∶29～1∶210.构建的A/AA/6/606个内部基因的病毒骨架拯救系统,为深入研究冷适应减毒人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础.

关键词：流感病毒反向遗传学 8质粒拯救系统重组流感病毒

来源：评论

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两株表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力

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畜牧兽医学报 2008年第3期39卷 327-332页

作者：刘武杰孙蕾陈素娟徐忠林刘金彪刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 中国科学院微生物研究所分子病毒中心北京100101

将H9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因插入到具有新复制非必需区的通用型质粒载体pP12LS中构建转移载体pP12LSH9A,再分别转染预先感染不同毒力的2种鸡痘病毒(FPV)282E4株和LP株的鸡胚成纤维细胞,经系列蓝斑筛选纯化,获得了2种重组鸡痘病毒(rFP... 详细信息

将H9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因插入到具有新复制非必需区的通用型质粒载体pP12LS中构建转移载体pP12LSH9A,再分别转染预先感染不同毒力的2种鸡痘病毒(FPV)282E4株和LP株的鸡胚成纤维细胞,经系列蓝斑筛选纯化,获得了2种重组鸡痘病毒(rFPV),分别命名为rFPV282-12LSH9A和rFPVLP-12LSH9A。将这2株rFPV在SPF鸡和带有高水平抗H9亚型AIV母源抗体的商品鸡上分别进行免疫效力试验。结果:rF-PV282-12LSH9A和rFPVLP-12LSH9A在SPF鸡上的排毒保护率均为100%(10/10),在商品鸡上的排毒保护率分别为88%(23/26)和92%(24/26)。结果表明获得了2株在带有抗H9亚型AIV高水平母源抗体的商品鸡上免疫效力较好的rFPV。

关键词： H9亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒母源抗体免疫效力

来源：评论

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HSN1亚型禽流感病毒基因重排后毒力的变化

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微生物学报 2008年第6期48卷 745-749页

作者：唐应华吴培培彭大新龙进学张评浒张文俊李彦芳汪文斌刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

【目的】为了探讨高致病性禽流感病毒对水禽致病性差异的分子致病机理。【方法】我们对从野鸭分离到的H5N1亚型禽流感病毒的生物学特性进行鉴定，其中A/mallard/Huadong/Y/2003（Y）是对麻鸭无致病性病毒，而A/mallard/Huadong/S/2005（... 详细信息

【目的】为了探讨高致病性禽流感病毒对水禽致病性差异的分子致病机理。【方法】我们对从野鸭分离到的H5N1亚型禽流感病毒的生物学特性进行鉴定，其中A/mallard/Huadong/Y/2003（Y）是对麻鸭无致病性病毒，而A/mallard/Huadong/S/2005（S）是对麻鸭高致病性病毒。利用反向遗传技术构建一系列单个和多个基因组合替换基因重排病毒，并验证重排病毒在麻鸭上的致病力。【结果】研究表明，PB2，PB1，PA（3P），HA单基因以及3P基因组合替换的使S病毒对麻鸭的毒力完全致弱，但相应的基因替换后仅使Y病毒对麻鸭的毒力略有上升。两病毒的其它基因对毒力影响较小。【结论】H5N1亚型禽流感病毒对麻鸭的致病力受多基因调控，且这种调控作用在不同病毒骨架上的影响不一致，强毒受影响程度远比弱毒的大。

关键词： H5N1 致病力反向遗传麻鸭

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猪细小病毒的PCR检测、分离及鉴定

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中国兽药杂志 2008年第12期42卷 1-4页

作者：刘金彪姚月琴高崧彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

根据GenBank中报道的猪细小病毒基因组序列,利用PCR引物设计软件,设计并合成了1对引物,通过对PCR反应条件的优化,成功地扩增出了511bp的目的片段,建立了PCR检测PPV的方法。利用该方法对120份临床样品进行检测,共检测到4份阳性样品,并成... 详细信息

根据GenBank中报道的猪细小病毒基因组序列,利用PCR引物设计软件,设计并合成了1对引物,通过对PCR反应条件的优化,成功地扩增出了511bp的目的片段,建立了PCR检测PPV的方法。利用该方法对120份临床样品进行检测,共检测到4份阳性样品,并成功地分离到2株PPV,1#病毒分离株理化特性鉴定表明其符合PPV的特性。

关键词：猪细小病毒 PCR 分离鉴定

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应用IIF和PCR方法对病猪肺泡巨噬细胞PRRSV、PCV2的检测

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上海畜牧兽医通讯 2008年第1期 21-22页

作者：李文杰叶俊平高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

对66份2004年10月至2005年8月患呼吸道疾病发病猪的肺组织进行PBS灌洗处理,获得肺泡巨噬细胞(PAM),用PAM抹片,应用间接免疫荧光试验(IIF)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV);同时提取PAMDNA作为模板,应用PCR方法检测猪圆环病毒2型。结果... 详细信息

对66份2004年10月至2005年8月患呼吸道疾病发病猪的肺组织进行PBS灌洗处理,获得肺泡巨噬细胞(PAM),用PAM抹片,应用间接免疫荧光试验(IIF)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV);同时提取PAMDNA作为模板,应用PCR方法检测猪圆环病毒2型。结果在66份PAM中,26份PRRSV阳性,23份PCV2阳性,其中8份同时检测出PRRSV和PCV2。以上结果表明,猪群中PRRSV和PCV2混合感染情况比较严重;应用IIF和PCR方法可以在PAM中检测PRRSV和PCV2。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型间接免疫荧光试验 PCR方法

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用8质粒病毒拯救系统产生冷适应减毒的重组A型人流感病毒的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第2期28卷 139-143页

作者：杨鹏辉石辛甫颜艳罗德炎张钰邢丽龙进学刘秀梵王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

目的利用流感病毒8质粒病毒拯救系统，产生冷适应减毒的重组A型人流感病毒，建立以冷适应流感病毒株为拯救骨架的反向遗传学技术平台。方法以冷适应、温度敏感、减毒的A／Ann Arbor／6／60（H2N2）流感病毒株作为拯救病毒的骨架，人工... 详细信息

目的利用流感病毒8质粒病毒拯救系统，产生冷适应减毒的重组A型人流感病毒，建立以冷适应流感病毒株为拯救骨架的反向遗传学技术平台。方法以冷适应、温度敏感、减毒的A／Ann Arbor／6／60（H2N2）流感病毒株作为拯救病毒的骨架，人工合成了该病毒株的6个内部基因片段，即PB2、PB1、PA、NP、M和NS，同时引入5个氨基酸突变作为标签。6个基因片段通过与改造后的转录载体pAD3000连接，构建6个基因的拯救载体，经测序获得序列准确的拯救质粒：pMDV-A-PB2、pMDV-A-PB1、pMDV-A-PA、pMDV-A-NP、pMDV-A-M、pMDV-A-NS。结果6质粒与PR8的表面基因HA和NA进行“6＋2”组合的病毒拯救，8个重组质粒共转染COS-1细胞，成功拯救出了具有血凝活性的冷适应减毒的重组A型人流感病毒，命名为rMDV-A。鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝（HA）效价为1：2^9～1：2^10。结论构建的A／Ann Arbor／6／60的6个内部基因的病毒骨架拯救系统，为深入研究冷适应减毒人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发提供了试验材料。

关键词：流感病毒反向遗传学 8质粒拯救系统重组流感病毒

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四株鸽源NDV的生物学特性鉴定及其全基因组序列分析

四株鸽源NDV的生物学特性鉴定及其全基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会

作者：王伟伟刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

新城疫(Newcastle disease,ND)是一种烈性、高度接触性传染病,是家禽传染病中危害最为严重的疾病之一。近来,其宿主范围不断扩大,给养禽业造成了巨大的经济损失。本实验以鸽源NDV毒株(PPMV-I)为研究对象,对鸽源NDV的基因序列特征及生物... 详细信息

新城疫(Newcastle disease,ND)是一种烈性、高度接触性传染病,是家禽传染病中危害最为严重的疾病之一。近来,其宿主范围不断扩大,给养禽业造成了巨大的经济损失。本实验以鸽源NDV毒株(PPMV-I)为研究对象,对鸽源NDV的基因序列特征及生物学特性进行了如下研究。

关键词： NDV 全基因组序列分析全基因序列生物学特性

来源：评论

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我国部分地区新城疫病毒分离株的分子流行病学研究

我国部分地区新城疫病毒分离株的分子流行病学研究

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会

作者：吴双王伟伟王晓泉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

1前言新城疫(Newcastle disease,ND)是一种严重的传染性疾病,能够感染多种禽类,给世界养禽业造成了巨大的损失。该病的病原,新城疫病毒(Newcas- tle disease virus,NDV)的基因组由一条单负股RNA构成,长约15 kb,主要编码6种病毒蛋白,即... 详细信息

1前言新城疫(Newcastle disease,ND)是一种严重的传染性疾病,能够感染多种禽类,给世界养禽业造成了巨大的损失。该病的病原,新城疫病毒(Newcas- tle disease virus,NDV)的基因组由一条单负股RNA构成,长约15 kb,主要编码6种病毒蛋白,即核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素-神经氨酸酶(HN)和大蛋白(L)。

关键词：新城疫病毒分离株糖基化位点分子流行病学

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2005-2006年江苏地区猪高热病病例中主要继发病原的多重PCR检测与分析

2005-2006年江苏地区猪高热病病例中主要继发病原的多重PCR检测与...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：叶俊平盛瑜朱丽娜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

应用建立的两个多重PCR方法,对2005-2006年收集于江苏地区的211份猪高热病疑似病料进行检测,结果PRRSV阳性率为51.2%;PCV阳性率为44.1%;CSFV阳性率为10.4%;PPV阳性率为3.904;PRV阳性率为2.4%。同时发现,2005年病料中PCV2的阳性率为21.2%... 详细信息

应用建立的两个多重PCR方法,对2005-2006年收集于江苏地区的211份猪高热病疑似病料进行检测,结果PRRSV阳性率为51.2%;PCV阳性率为44.1%;CSFV阳性率为10.4%;PPV阳性率为3.904;PRV阳性率为2.4%。同时发现,2005年病料中PCV2的阳性率为21.2%,2006年为73.2%;2005年PRRSV的阳性率为38.1%,2006年为67.7%.2006年猪高热病疫情比2005年严重,PCV2和PRRSV可能在其中发挥了协同致病作用。对PRRSV分离株ORF5和Nsp2基因进行测序,发现2006年分离株Nsp2基因中有连续87个碱基的缺失。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型猪细小病毒猪瘟病毒猪伪狂犬病病毒猪高热病多重PCR ORF5 Nsp2

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