检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2025年第5期57卷 24-30页

作者：夏潇潇王佳琳李玲佰伍加宋志贤岳恒曹少先袁玉国扬州大学兽医学院/扬州大学动物基因工程重点实验室江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学医学院江苏扬州225009 江苏省农业科学院畜牧研究所/江苏省畜禽精准育种工程研究中心/农业农村部种养结合重点实验室江苏南京210014

为探明海门山羊不同组织中肌肉生长抑制素(MSTN)基因表达规律及其编码蛋白结构特点,通过克隆海门山羊MSTN基因CDS序列并分析其生物特点,运用实时荧光定量PCR技术分析MSTN基因在不同组织中的表达水平,在MSTN基因第2、3外显子上设计3个单... 详细信息

为探明海门山羊不同组织中肌肉生长抑制素(MSTN)基因表达规律及其编码蛋白结构特点,通过克隆海门山羊MSTN基因CDS序列并分析其生物特点,运用实时荧光定量PCR技术分析MSTN基因在不同组织中的表达水平,在MSTN基因第2、3外显子上设计3个单碱基编辑靶位点,将构建的sgRNA质粒分别与胞嘧啶碱基编辑器YE1-BE3-FNLS电转入培养的海门山羊胎儿成纤维细胞中,筛选48 h后提取细胞基因组DNA,对PCR扩增靶位点序列进行Sanger测序和TA克隆分析。结果:海门山羊MSTN基因的CDS序列编码375个氨基酸,具有高度保守性。海门山羊不同组织中MSTN基因表达水平存在差异,其中骨骼肌的表达量最高;3条sgRNA均可在MSTN基因外显子上进行单碱基编辑,编辑效率分别为25%、37%和29%。结论:研究结果为进一步利用单碱基基因编辑技术培育MSTN基因突变海门山羊新品系提供了新的依据。

关键词：海门山羊肌肉生长抑制素单碱基编辑

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基于CRISPR/Cas9技术进行家猫Fel d1基因编辑的研究

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农业生物技术学报 2024年第6期32卷 1353-1361页

作者：张亚鑫李玲 Farhab MUHAMMAD 吕美芸佰伍加蔡何清袁玉国扬州大学兽医学院/扬州大学动物基因工程重点实验室江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

Fel d1蛋白是家猫(Felis catus)过敏原中最主要的致敏原，可引起人不同程度的过敏反应。Fel d1蛋白由2个异源的二聚体组成，其编码基因分别为chain 1 (CH1)和chain 2 (CH2)。本研究对38只不同品种的家养宠物猫CH1和CH2基因组序列进行生... 详细信息

Fel d1蛋白是家猫(Felis catus)过敏原中最主要的致敏原，可引起人不同程度的过敏反应。Fel d1蛋白由2个异源的二聚体组成，其编码基因分别为chain 1 (CH1)和chain 2 (CH2)。本研究对38只不同品种的家养宠物猫CH1和CH2基因组序列进行生物信息学分析，进一步在CH2外显子位点设计2个单链引导RNA (single-guide RNAs, sgRNAs)，构建打靶载体分别转染猫胎儿成纤维细胞，PCR测序验证靶位点突变效率。结果表明，CH1和CH2序列上分别含有12和51个多态性位点，且这些位点大多在富含GC的内含子2上，其他个别位于外显子2，内含子3和外显子3上。在整体的进化演变中，CH1的保守性要远高于CH2。CRISPR/Cas9打靶载体转染猫胎儿成纤维细胞后突变检测表明，CH2基因编辑效率为40%,2种突变方式均能消除潜在的抗原位点，其中敲除45个碱基的1型突变占比35%，敲除44个碱基的2型突变占比5%。本研究为进一步利用该CRISPR/Cas9打靶载体获得Fel d1基因突变细胞株进行体细胞核移植或胚胎注射获得低过敏原猫提供参考。

关键词： Fel d1基因 CRISPR/Cas9 猫基因编辑

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生长抑制因子(GIF)与G蛋白Rab3a直接相互作用

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生物化学与生物物理进展 2001年第6期28卷 880-884页

作者：康巧华陈巧林任宏伟茹炳根北京大学生命科学学院蛋白质工程与植物基因工程国家重点实验室北京100871 扬州大学畜牧兽医学院扬州225009

生长抑制因子 (growthinhibitoryfactor,GIF) ,又称金属硫蛋白 3,为 6 8个氨基酸组成的脑特异性金属硫蛋白 ,具有广泛的生理功能 ;GIF可能与阿尔茨海默氏症 (Alzheimer s)病理相关 ,在Alzheimer s脑提取物存在下 ,还对神经细胞具有特异... 详细信息

生长抑制因子 (growthinhibitoryfactor,GIF) ,又称金属硫蛋白 3,为 6 8个氨基酸组成的脑特异性金属硫蛋白 ,具有广泛的生理功能 ;GIF可能与阿尔茨海默氏症 (Alzheimer s)病理相关 ,在Alzheimer s脑提取物存在下 ,还对神经细胞具有特异的生长抑制活性 .然而 ,对其发挥生长抑制作用的分子机制并不清楚 .运用酵母双杂交系统从人脑cDNA文库中筛选与GIF相互作用因子 ,从 4 1× 10 6个人脑cDNA文库转化子中 ,首次筛选到Ras家族G蛋白Rab3aC端 ,包含 87个氨基酸的片段能与GIF相互作用 ;用PCR自人胎盘总cDNA中获得包含完整Rab3a编码序列的cDNA ;通过酵母双杂交实验表明 ,全长Rab3a蛋白亦能与GIF相互作用 .免疫共沉淀和蛋白质印迹实验进一步验证了GIF与Rab3a在哺乳动物细胞中可以相互作用 ;而且 ,Rab3a是以GTP结合形式(GTP Rab3a)

关键词：生长抑制因子阿尔茨海默氏症酵母双杂交系统 Rab3a 免疫共沉淀 G蛋白相互作用 GIF

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运用CRISPR/Cas9技术构建PCSK9点突变家兔模型

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浙江大学学报（医学版） 2021年第2期50卷 229-238页

作者：严坤宁张婷查艺闻梁景岩成勇扬州大学医学院转化医学研究院江苏省中西医结合老年病防治重点实验室江苏扬州225001 扬州大学兽医学院江苏省转基因动物制药工程研究中心江苏扬州225009

目的:运用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)点突变家兔模型。方法:根据Pub Med基因蛋白数据对人和兔的PCSK9蛋白功能区进行Blast分析,发现人PCSK9基因的386S(丝氨酸)氨基酸功能区与兔PCSK9基因的485S同源。... 详细信息

目的:运用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)点突变家兔模型。方法:根据Pub Med基因蛋白数据对人和兔的PCSK9蛋白功能区进行Blast分析,发现人PCSK9基因的386S(丝氨酸)氨基酸功能区与兔PCSK9基因的485S同源。根据家兔PCSK9基因的485S对应的碱基替换位置及序列分析结果设计3条单链向导RNA和1条单链寡核苷酸供体模板。将合成的单链向导RNA、Cas9 m RNA和单链寡核苷酸供体共同注射入家兔受精卵细胞质内并将胚胎移植入待孕母兔体内。对获得的F0代兔进行PCR、TA克隆、脱靶检测以鉴定PCSK9S386A是否突变成功。利用获得的PCSK9S386A基因点突变家兔进行繁殖,扩大群体。结果:共获得15只F0代兔,其中1只为PCSK9S386A点突变纯合子,2只为PCSK9S386A点突变杂合子,且该突变可以稳定遗传。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功构建了PCSK9S386A点突变家兔模型,为探究PCSK9功能减弱的分子机制,开发可靠、有效的诊断和治疗措施提供了良好的动物模型。

关键词：前蛋白转化酶枯草溶菌素9 点突变 CRISPR/Cas9 动物模型新西兰兔

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转基因稻谷日粮对肉仔鸡血清生化指标的影响

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饲料工业 2009年第11期30卷 17-19页

作者：周联高刘巧泉王捍东章世元严桂芹俞路扬州大学动物科学与技术学院江苏省扬州市225009 扬州大学江苏省植物功能基因组学重点实验室扬州大学兽医学院

为了研究转基因稻谷日粮对肉仔鸡血液生化指标的影响,监测转基因稻谷对肉仔鸡健康状况的影响。试验将200只1日龄的肉仔鸡随机分成2组,试验组、对照组分别饲喂转基因稻谷及其亲本配制的基础日粮。21日龄、42日龄时测定试验组与对照组血... 详细信息

为了研究转基因稻谷日粮对肉仔鸡血液生化指标的影响,监测转基因稻谷对肉仔鸡健康状况的影响。试验将200只1日龄的肉仔鸡随机分成2组,试验组、对照组分别饲喂转基因稻谷及其亲本配制的基础日粮。21日龄、42日龄时测定试验组与对照组血液生化指标之间的差异。结果表明:饲喂含有转基因稻谷日粮的肉仔鸡在早期可降低碱性磷酸酶含量,降低后期血液中尿酸含量,而对其它血液生化指标无显著影响。转基因稻谷日粮作为肉仔鸡的饲料原料对肉仔鸡血液生化指标未造成负面影响。

关键词：转基因稻谷肉仔鸡血液生化指标

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不同激素和重复超排对家猫超排效果的影响

不同激素和重复超排对家猫超排效果的影响

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第八届会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：蔡何清 FARHAB MUHAMMAD 王佳琳李玲张信军袁玉国扬州大学兽医学院/扬州大学动物基因工程重点实验室

引言影响猫超排技术因素有很多,其中激素种类、剂量等是重要因素。超数排卵是猫胚胎移植、转基因、克隆等研究的重要环节之一,通过对家猫进行超排可以获得大量整齐、优质的卵母细胞或受精卵,而这又是进行猫克隆、转基因等研究的前提条... 详细信息

引言影响猫超排技术因素有很多,其中激素种类、剂量等是重要因素。超数排卵是猫胚胎移植、转基因、克隆等研究的重要环节之一,通过对家猫进行超排可以获得大量整齐、优质的卵母细胞或受精卵,而这又是进行猫克隆、转基因等研究的前提条件之一。目前,在猫上较少报道利用手术法活体冲卵的方法。本试验主要是对不同激素(FSH和PMSG)和重复超排因素进行比较分析,从激素的角度提高猫的超排效率和猫的利用率,为以后开展家猫胚胎工程相关研究奠定基础。

关键词：重复超排

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三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究

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中国家禽 2024年第4期46卷 113-119页

作者：郭婷婷赵佳马爽陈杨樊鹏程毕涛旭楚电峰郭梦娇吴艳涛张小荣扬州大学兽医学院江苏扬州225009 青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室山东青岛266114

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、... 详细信息

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示:三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示:在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。

关键词：鸡滑液囊支原体血凝抑制试验血清平板凝集试验酶联免疫吸附试验 qPCR

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仔猪BPI基因表达水平与大肠杆菌F18菌株感染的关系

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遗传 2011年第11期33卷 1225-1230页

作者：叶兰訾臣刘璐朱璟谢恺舟朱国强黄小国包文斌吴圣龙王金玉扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 扬州大学兽医学院扬州225009 江苏省现代种猪分子选育工程技术研究中心常州213149 江苏(扬州)规模猪场高效健康养殖公共技术服务中心扬州225009

文章利用已建立的苏太猪F18大肠杆菌病抗性和敏感性资源家系群体作为实验材料,分别选择8头35日龄左右生长性状基本一致的大肠杆菌F18菌株抗性和敏感性断奶仔猪,运用Real-time PCR方法检测BPI基因mRNA在断奶仔猪各个组织的分布情况,并比... 详细信息

文章利用已建立的苏太猪F18大肠杆菌病抗性和敏感性资源家系群体作为实验材料,分别选择8头35日龄左右生长性状基本一致的大肠杆菌F18菌株抗性和敏感性断奶仔猪,运用Real-time PCR方法检测BPI基因mRNA在断奶仔猪各个组织的分布情况,并比较其在大肠杆菌F18菌株抗性型和敏感型断奶仔猪个体间的差异表达水平,为探讨该基因在免疫和抗大肠杆菌F18菌株感染中的作用提供依据。结果表明,在对所有个体检测的11个组织中,BPI基因在心、肝、脾、肺、肾、胃、肌肉、胸腺、淋巴结中几乎不表达,或表达量很低,但在十二指肠和空肠中表达量很高。在十二指肠和空肠中,BPI基因在抗性组的表达量均显著高于敏感组的表达量(P<0.05)。由此表明,BPI基因对抗断奶仔猪肠道中大肠杆菌F18菌株的感染可能具有直接作用,并且个体对大肠杆菌F18菌株的抗性可能与BPI基因在肠道中表达量上调有关。

关键词：大肠杆菌F18菌株断奶仔猪 BPI基因 Real-timePCR

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合成载小分子肽羊胎素碳酸钙/磷酸钙纳米材料的方法研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2022年第2期43卷 86-91页

作者：李玲蔡何清王佳琳钟平邢益天钱晨王挺袁玉国扬州大学兽医学院/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省转基因动物制药工程研究中心/扬州大学动物基因工程重点实验室江苏扬州225009 扬州扬大联环药业基因工程有限公司江苏扬州225001

碳酸钙/磷酸钙是脊椎动物骨骼和牙齿的主要无机成分,具有良好的生物相容性,在生物医学领域具有良好的应用前景。从羊胎儿中提取的小分子肽羊胎素具有很好的生物学作用,为进一步提高小分子肽羊胎素在皮肤中的渗透性和功效,利用生物矿化... 详细信息

碳酸钙/磷酸钙是脊椎动物骨骼和牙齿的主要无机成分,具有良好的生物相容性,在生物医学领域具有良好的应用前景。从羊胎儿中提取的小分子肽羊胎素具有很好的生物学作用,为进一步提高小分子肽羊胎素在皮肤中的渗透性和功效,利用生物矿化法合成载小分子肽羊胎素碳酸钙/磷酸钙纳米材料,利用扫描电镜、傅立叶红外光谱对纳米颗粒进行表征,检测其载小分子肽能力和pH的敏感性。结果表明:利用小分子肽羊胎素溶液实现Ca^(2+)、CO_(3)^(2-)、HPO_(4)^(2-)共沉淀获得小分子肽/碳酸钙/磷酸钙复合纳米颗粒同时高效载小分子肽(1.8%),纳米颗粒具有球形结构,直径小于50 nm,且具有较好的pH响应性和蛋白质持续释放能力。在兔和猫眼上试验表明载小分子肽纳米颗粒对动物眼睛无刺激性,有较好的生物安全性。这一研究为利用天然小分子肽合成钙纳米材料提供了依据,同时为进一步开发新一代小分子肽羊胎素纳米材料应用于化妆品奠定了基础。

关键词：小分子肽羊胎素过敏碳酸钙/磷酸钙化妆品

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G蛋白Rab3a cDNA的克隆与表达

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第1期18卷 75-79页

作者：康巧华陈巧林季清洲任宏伟茹炳根北京大学生命科学学院蛋白质工程与植物基因工程国家重点实验室北京100871 扬州大学畜牧兽医学院扬州225009

利用PCR法 ,从人胎盘总cDNA中扩增得到Rab3acDNA的全编码区 .序列分析表明 ,扩增得到的Rab3acDNA有 5个核苷酸发生了变异 ,但翻译的氨基酸与发表的完全一致 .将扩增得到的Rab3acDNA克隆于原核融合表达载体pGEX 4T 1中 ,在E .coliBL2 1中... 详细信息

利用PCR法 ,从人胎盘总cDNA中扩增得到Rab3acDNA的全编码区 .序列分析表明 ,扩增得到的Rab3acDNA有 5个核苷酸发生了变异 ,但翻译的氨基酸与发表的完全一致 .将扩增得到的Rab3acDNA克隆于原核融合表达载体pGEX 4T 1中 ,在E .coliBL2 1中经IPTG诱导表达 .为了进一步鉴定表达产物 ,对纯化后的Rab3a蛋白进行了SDS PAGE、N端氨基酸测序、质谱分子量测定及氨基酸组成分析鉴定 .结果显示 ,表达蛋白的分子量约 2 5kD ,N端氨基酸序列为MASATDSR ,氨基酸组成分析表明。

关键词： G蛋白 Rab3a 克隆表达谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析

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