检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2011年第11期31卷 75-80页

作者：张妍张文俊李群辉刘晓文刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的:现有的禽流感疫苗生产的方法已经不能适应工业化大生产的需求,有必要开发全悬浮培养的细胞系来满足大生产的需求。方法:我们通过转染稳定表达Siat7e基因的真核表达载体对MDCK细胞进行改造,并经过后期的驯化,筛选适应于全悬浮培养的... 详细信息

目的:现有的禽流感疫苗生产的方法已经不能适应工业化大生产的需求,有必要开发全悬浮培养的细胞系来满足大生产的需求。方法:我们通过转染稳定表达Siat7e基因的真核表达载体对MDCK细胞进行改造,并经过后期的驯化,筛选适应于全悬浮培养的MDCK细胞。结果:成功筛选到能稳定表达Siat7e基因并能适应全悬浮生长的细胞系。结论:该细胞系具有潜在的应用价值,为MDCK细胞的培养以及工业化大生产疫苗提供参考。

关键词： MDCK Siat7e 全悬浮疫苗生产

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H9N2亚型禽流感病毒复制特性的基因分析

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畜牧兽医学报 2008年第2期39卷 189-194页

作者：石火英孙蕾陈素娟卢建红刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

利用反向遗传技术,通过基因重排方法,以A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)禽流感病毒(Avian influ-enza virus,AIV)的6个内部基因为骨架,与A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)AIV的HA和NA基因组合,产生3株H9N2亚型重排AIVs。动物试验发现A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)和A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)AIV主要在呼吸系统复制,A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株在气管和肺组织的复制能力明显强于A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)AIV株。3株H9N2亚型重排AIVs的动物试验发现HA和NA基因对H9N2亚型AIV在呼吸道的复制特性起主要作用。内部基因对H9N2亚型AIV在呼吸道的复制也有一定的作用。结果表明1994年中国首次分离到的H9N2亚型AIV经过4年的宿主适应和基因进化,加强了其在呼吸系统的复制能力,奠定了气溶胶传播的基础。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型复制特性反向遗传技术 HA基因 NA基因

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一株H11N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析

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畜牧兽医学报 2011年第2期42卷 217-223页

作者：赵坤坤张妍段志强钟蕾朱艳梅赵国刘晓文刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了解禽流感病毒在华东地区家禽体内的进化情况,作者对华东地区某活禽市场的家禽进行了禽流感病毒的流行病学监测,并分离鉴定出1株H11N2亚型禽流感病毒A/duck/Jiangxi/k0701/2009。对该株病毒全基因组的遗传进化分析表明A/duck/Jiangxi... 详细信息

为了解禽流感病毒在华东地区家禽体内的进化情况,作者对华东地区某活禽市场的家禽进行了禽流感病毒的流行病学监测,并分离鉴定出1株H11N2亚型禽流感病毒A/duck/Jiangxi/k0701/2009。对该株病毒全基因组的遗传进化分析表明A/duck/Jiangxi/k0701/2009的8个基因片段来源广泛,与亚洲及欧洲某些地区的毒株存在广泛的重组现象。其PB2基因和NS基因可能由A/mallard/Korea/GH170/2007(H7N7)提供,NA基因与高致病性禽流感病毒A/duck/Hebei/0710/2009(H5N2)的NA基因亲缘关系较近,而PB1、PA和NP基因则可能与A/Muscovy duck/Thailand/CU-LM1984/2009(H4N9)有共同来源。本研究结果提示该株病毒可能为1株多元重组病毒,且可能在高致病性禽流感病毒的进化中起了重要作用。

关键词：禽流感病毒 H11N2亚型遗传进化分析基因重组

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H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较及其表面基因序列分析

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中国兽医学报 2007年第1期27卷 26-30页

作者：石火英陈素娟高崧刘武杰刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

选择中国大陆最早分离的H9N2亚型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）A／Chicken／Guangdong／SS／94（H9N2）（缩写为SS株）和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIV A／Chicken／Shanghai／F／98（H9N2）（缩写为F株）为研究对象，对其在SPF鸡体内的复制能力和传播途径特性比较后发现，F株在4周龄SPF鸡气管中的复制能力高于SS株，F株可以经气溶腔传播途径传播。SS株不能经气溶腔传播途径传播；利用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法获取F株和SS株的HA和NA基因的cDNA，序列分析得知，F株和SS株的HA和NA基因的同源性分别是96．6％和98．1％；HA基因的裂解位点氨基酸序列都是PARSSR↓GL。但有5个氨基酸的盖异，即166位N（F）→D（SS）、198位A（F）→V（SS）、217位V（F）→I（SS）、335位G（F）→R（SS）、504位L（F）→S（SS）；2株病毒的NA基因在63～65住都存在氨基酸缺失，但在NA基因红细胞吸附位点的氨基酸序列不同，分别是IKKD—SRSG（F）和IKEDLRSG（SS）。F株和SS株的传播特性差异是否与其表面基因序列有关，有待进一步研究。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒 F株 SS株传播途径 HA和NA基因

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2株鸭源H3N2亚型流感病毒的分离鉴定和遗传进化分析

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畜牧兽医学报 2010年第10期41卷 1354-1358页

作者：赵国钟蕾赵坤坤鹿欣伦彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

2008年10月到2009年9月从扬州活禽市场采集家鸭泄殖腔拭子共1075份,并从中分离鉴定了24株H3亚型禽流感病毒,作者对其中的2株病毒进行了全基因测序和遗传演化分析,发现2株病毒均为H3N2低致病性禽流感病毒。分离病毒各基因遗传进化分析均... 详细信息

2008年10月到2009年9月从扬州活禽市场采集家鸭泄殖腔拭子共1075份,并从中分离鉴定了24株H3亚型禽流感病毒,作者对其中的2株病毒进行了全基因测序和遗传演化分析,发现2株病毒均为H3N2低致病性禽流感病毒。分离病毒各基因遗传进化分析均与猪源分离株的亲缘关系相对较近,与人源分离株的亲缘关系较远;除HA基因外,其它所有的基因均发生了不同程度基因重组,各基因与不同亚型、不同地区、不同宿主分离的不同毒株发生了基因重排。

关键词：禽流感病毒 H3N2亚型基因分析

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Clade2.3.4 H5亚型禽流感疫苗变异候选株的构建

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中国兽医科学 2014年第10期44卷 1008-1013页

作者：王萱李群辉孙中涛高照刘佳佳王晓泉刘晓文扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为应对Clade2.3.4H5亚型禽流感病毒持续发生的抗原性改变及其引发的潜在的地方性流行,需要根据流行监测的抗原分析结果制备疫苗候选株。采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV的内部基因为骨架,以Clade2.3.4H5N1亚型... 详细信息

为应对Clade2.3.4H5亚型禽流感病毒持续发生的抗原性改变及其引发的潜在的地方性流行,需要根据流行监测的抗原分析结果制备疫苗候选株。采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV的内部基因为骨架,以Clade2.3.4H5N1亚型AIV A/chicken/Hebei/2/2011(wt-HB株)的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因为供体,并删除wt-HB株HA基因中编码多碱性氨基酸的序列,成功拯救出1株重组病毒rHB/PR8。该病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖性能,对SPF鸡和鸡胚无致病性。这一研究结果为防控变异的Clade2.3.4H5亚型禽流感提供了良好的疫苗候选株。

关键词： H5亚型禽流感病毒 Clade2.3.4 反向遗传 HA基因 NA基因

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对麻鸭不同致病力H5N1亚型禽流感病毒的鉴定

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中国兽医杂志 2008年第3期44卷 12-13页

作者：唐应华吴培培彭大新张评浒龙进学刘秀梵扬州大学兽医学院农业部备禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

禽流感病毒(avain influenza virus,AIV)根据其HA和NA蛋白分为不同亚型,目前16种HA亚型和9种NA亚型均已从水禽中分离到。2002年之前的研究表明,H5N1亚型AIV对水禽不致病,在宿主体内呈相对稳定的“静止”状态进化。自2002年香港首次出现... 详细信息

禽流感病毒(avain influenza virus,AIV)根据其HA和NA蛋白分为不同亚型,目前16种HA亚型和9种NA亚型均已从水禽中分离到。2002年之前的研究表明,H5N1亚型AIV对水禽不致病,在宿主体内呈相对稳定的“静止”状态进化。自2002年香港首次出现大量野生水禽和家养水禽感染H5N1亚型AIV后,相关报道越来越多。以上均提示,高致病性H5N1亚型AIV对水禽的致病力已经明显增强。[第一段]

关键词： H5N1亚型禽流感病毒致病力野生水禽鉴定麻鸭 virus AIV 相对稳定

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H5N1亚型禽流感病毒HA糖基化位点缺失突变株的构建及生物学特性

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病毒学报 2013年第5期29卷 495-499页

作者：张晓剑李彦芳熊丽平陈素娟彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室禽类预防医学教育部重点实验室扬州225009

不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因... 详细信息

不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因序列测定和免疫印迹分析证实已成功去除了特定糖基化位点。158位糖基化位点缺失突变株rS△158在鸡胚中的EID50和MDCK细胞上TCID50比野生型rS略低,空斑直径显著减小;而单独去除169位和290位糖基化位点的rS△169和rS△290的EID50和TCID50略高于野生型rS,空斑直径相近,但空斑数要比后者高出10倍以上。所有突变株及野生型病毒在CEF上增殖速率相同,对SPF鸡均是高致病性的。因此,糖基化位点可影响病毒的体外增殖,但结果因细胞而异。

关键词： H5N1亚型禽流感 HA 糖基化位点突变

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猪伪狂犬病病毒JSZ株的分离鉴定及其病毒核酸的分布规律

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中国兽医科学 2009年第9期39卷 759-763页

作者：郭丽静赵瑜张伟崔盟吴艳涛高崧彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

用猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性引物对江苏省某猪场疑似猪伪狂犬病的病死仔猪组织病料进行了PCR鉴定,结果可扩增到特异性的条带。用该病料接种PK-15细胞,24 h即出现细胞病变,PCR和间接免疫荧光试验结果均证明所分离病毒为PRV。用该PRV分... 详细信息

用猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性引物对江苏省某猪场疑似猪伪狂犬病的病死仔猪组织病料进行了PCR鉴定,结果可扩增到特异性的条带。用该病料接种PK-15细胞,24 h即出现细胞病变,PCR和间接免疫荧光试验结果均证明所分离病毒为PRV。用该PRV分离株接种兔后出现奇痒症状并麻痹致死;接种仔猪后出现持续发热,肌肉震颤等症状。通过对自然感染PRV病死仔猪脏器进行PCR检测,发现PRV在仔猪体内广泛分布,其中以脾的检出率最高,可达100%;对人工感染猪的直肠和鼻腔棉拭样品进行PCR检测,发现病猪排毒最长可达13 d。证实,该分离株为猪伪狂犬病强毒株,脾为病毒检测的首选靶器官。

关键词：猪伪狂犬病病毒分离鉴定排毒分布

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鹅源新城疫病毒M蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

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中国兽医科学 2011年第4期41卷 331-335页

作者：段志强王郁杨朱艳梅开妍胡顺林刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为了筛选鹅源新城疫病毒(JS/5/05/Go)M蛋白与鸡胚成纤维细胞作用的靶蛋白,应用酵母双杂交技术构建M蛋白的诱饵载体pGBKT7-M。采用RT-PCR方法从鹅源新城疫病毒中扩增了M基因片段,将其克隆到pGEM-T载体中,经测序鉴定正确后,定向克隆到酵... 详细信息

为了筛选鹅源新城疫病毒(JS/5/05/Go)M蛋白与鸡胚成纤维细胞作用的靶蛋白,应用酵母双杂交技术构建M蛋白的诱饵载体pGBKT7-M。采用RT-PCR方法从鹅源新城疫病毒中扩增了M基因片段,将其克隆到pGEM-T载体中,经测序鉴定正确后,定向克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组诱饵载体转化酿酒酵母Y187,并验证其在酵母细胞中有无自激活和毒性作用。结果显示,成功构建了诱饵载体pGBKT7-M,并证明其对报告基因无自激活作用,且对酵母细胞无毒性。表明诱饵载体pGBKT7-M可用于酵母双杂交系统寻找与M蛋白相互作用的蛋白质。

关键词：新城疫病毒 M蛋白酵母双杂交诱饵载体自激活作用

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