检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛

作者：李莉莉吴艳涛张小荣扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009

随着研究的深入，禽网状内皮增生症病毒(REV)新的致病性不断被发现，如REV-JX0927 它不仅能引起网状内皮细胞增生和淋巴肉瘤，还能引起扁平细胞癌、腺癌、动脉瘤和动脉炎等。

关键词：

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鸽源新城疫病毒JS/07/04/Pi株感染性分子克隆的构建及病毒拯救

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病毒学报 2012年第1期28卷 67-72页

作者：朱艳梅胡增垒宋庆庆段志强顾敏胡顺林王晓泉刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

参照GenBank上公布的鸽源Ⅵb亚型新城疫病毒JS/07/04/Pi株基因组全序列设计9对引物,RT-PCR扩增目的片段后,依次亚克隆至TVT7/R转录载体,成功构建出含JS/07/04/Pi株基因组全长cDNA的转录载体TVT/071204。然后将其与三个辅助表达质粒pCI-N... 详细信息

参照GenBank上公布的鸽源Ⅵb亚型新城疫病毒JS/07/04/Pi株基因组全序列设计9对引物,RT-PCR扩增目的片段后,依次亚克隆至TVT7/R转录载体,成功构建出含JS/07/04/Pi株基因组全长cDNA的转录载体TVT/071204。然后将其与三个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,60h后将转染细胞及其上清接种鸡胚,收集死亡鸡胚尿囊液进行HA与HI试验。结果显示死亡鸡胚尿囊液HA呈阳性,并能被ND阳性血清所抑制,表明该病毒已成功拯救,且拯救病毒rNDV/071204在细胞上的生长增殖能力同母本病毒相似。该病毒的成功拯救为鸽源Ⅵb亚型NDV感染的宿主特异性及鸽用ND新型疫苗的研究提供了理想的生物材料。

关键词：鸽新城疫病毒共转染拯救

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动物源性沙门菌的血清型、生物被膜形成能力和耐药性分析

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畜牧兽医学报 2012年第10期43卷 1630-1638页

作者：孙化露姜逸李树纯陈素娟张华张晓平田艳娜吴艳涛焦库华彭大新扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

本研究旨在探讨动物源性沙门菌的血清型分布、生物被膜形成能力及其耐药性。从不同动物病料中分离细菌,以PCR方法鉴定沙门菌,结合玻片凝集法和16SrRNA序列测定确定沙门菌的血清型和分布,结晶紫染色定量法检测分离株的生物被膜形成能力,... 详细信息

本研究旨在探讨动物源性沙门菌的血清型分布、生物被膜形成能力及其耐药性。从不同动物病料中分离细菌,以PCR方法鉴定沙门菌,结合玻片凝集法和16SrRNA序列测定确定沙门菌的血清型和分布,结晶紫染色定量法检测分离株的生物被膜形成能力,药敏试验检测分离菌对常用药物的敏感性。结果共分离鉴定出58株沙门菌,包括鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、都柏林沙门菌和阿哥那沙门菌等7种血清型,其中鸡群以鸡白痢沙门菌感染为主,肠炎沙门菌次之;水禽以鼠伤寒沙门菌感染为主。生物被膜测定结果显示51.72%的沙门菌分离株可形成生物被膜,其中83.33%的鼠伤寒沙门菌可形成生物被膜。20种抗生素(氨基糖苷类、磺胺类、喹诺酮类、林可酰胺类、氯霉素类、青霉素类、四环素类和头孢菌素类)敏感性试验表明所有菌株对林可霉素耐药,51.72%对4种及其以上抗生素耐药,并出现了1株对所有受试抗生素均耐药的鼠伤寒沙门菌。结果表明鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌是为目前在家禽中分离的优势血清型;同时具有生物被膜形成能力和多重耐药性的沙门菌将对家禽疾病控制和公共卫生带来更大的威胁。

关键词：沙门菌血清型生物被膜耐药性

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Clade2．3．2H5N1亚型禽流感疫苗候选株的构建

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畜牧兽医学报 2012年第6期43卷 915-921页

作者：张妍张文俊李群辉刘晓文刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

近年来Clade2.3.2H5N1亚型的禽流感病毒逐渐成为我国及越南等其他一些国家流行的优势毒株,并呈现出一定变化规律的氨基酸进化趋势。本研究以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV为内部基因供体,以Clade2.3.2H5N1亚型AIV A/chicken/Yangzho... 详细信息

近年来Clade2.3.2H5N1亚型的禽流感病毒逐渐成为我国及越南等其他一些国家流行的优势毒株,并呈现出一定变化规律的氨基酸进化趋势。本研究以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV为内部基因供体,以Clade2.3.2H5N1亚型AIV A/chicken/Yangzhou/1117/2011(YZC3)为表面抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因供体,通过反向遗传操作,在符合人类疫苗生产标准的COS-1细胞中救获低致病性的疫苗毒株。结果成功拯救出1株重组病毒rYZC3,该病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖能力,对SPF鸡和鸡胚无致病性。本研究为防控当代流行的H5亚型禽流感提供了良好的疫苗候选株。

关键词： H5亚型 Clade2.3.2 禽流感病毒反向遗传

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鹅源新城疫病毒M基因的原核表达及其多克隆抗体制备

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江苏农业学报 2012年第1期28卷 125-130页

作者：段志强胡娇胡增垒王郁杨朱杰胡顺林刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

试验旨在制备原核表达鹅源新城疫病毒(NDV)JS/5/05/Go株M蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。以鹅源NDV总RNA为模板,RT-PCR扩增M基因,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET32a-M,转化*** BL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检... 详细信息

试验旨在制备原核表达鹅源新城疫病毒(NDV)JS/5/05/Go株M蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。以鹅源NDV总RNA为模板,RT-PCR扩增M基因,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET32a-M,转化*** BL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达产物;用KCl染色切胶纯化法纯化重组蛋白;采用切胶免疫小鼠的方法制备M蛋白多克隆抗体,抗体效价用间接ELISA检测,特异性用Western blot和间接免疫荧光法鉴定。结果表明,在大肠杆菌中成功表达了分子量约为55 000的重组蛋白,用切胶纯化法获得了纯度较高的重组蛋白;ELISA法检测抗体效价可达1∶102 400,Western blot和间接免疫荧光试验结果表明制备的多克隆抗体能够特异性识别纯化的M蛋白及NDV自身表达的M蛋白。

关键词：鹅源新城疫病毒 M基因原核表达多克隆抗体

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H9N2亚型禽流感病毒基因组的遗传进化分析

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病毒学报 2012年第1期28卷 7-14页

作者：李树纯李心海仲书官孙化露潘金金陈素娟彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 徐州生物工程职业技术学院徐州221006

2009～2011年从江苏省、湖北省和安徽省等地来源于鸡、鸭、鹌鹑和鸽子的样品中分离鉴定出16株H9N2亚型禽流感病毒。通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出分离株的全基因片段,并对其进行测序及遗传进化分析。序列分析显示,16株病毒HA... 详细信息

2009～2011年从江苏省、湖北省和安徽省等地来源于鸡、鸭、鹌鹑和鸽子的样品中分离鉴定出16株H9N2亚型禽流感病毒。通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出分离株的全基因片段,并对其进行测序及遗传进化分析。序列分析显示,16株病毒HA基因裂解位点氨基酸序列为P-S-R/K-S-S-R,符合低致病性禽流感的分子特征;226位均为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特性。M2基因均出现了对金刚烷胺产生耐药性的N31S突变。不同宿主来源的H9亚型AIV的主要分子特征一致。全基因遗传进化分析表明16株H9N2亚型禽流感病毒全基因发生了3配体重组,即以F98亚系AIV为骨架,HA来源于Y280亚系,PB2和M基因来源于G1亚系,形成了2种新的基因型。因此,要加强对H9N2亚型禽流感病毒的监测,密切关注它的重组趋势。

关键词： H9N2 禽流感病毒基因组遗传进化分析

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2009—2010年华东地区家禽低致病性禽流感病毒的流行病学调查与分析

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中国兽医学报 2012年第3期32卷 345-349页

作者：赵坤坤仲书官赵国阮丽莎朱艳梅张妍段志强刘晓文刘文博彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

为了解华东地区家禽中低致病性禽流感病毒(low pathogenic avian influenza viruses,LPAIVs)的分布规律,从2009年10月到2010年9月在华东地区某活禽市场采集鸡、鸭、鹅等家禽的泄殖腔拭子共1 650份,经鸡胚接种和HA、HI试验鉴定,结果从58... 详细信息

为了解华东地区家禽中低致病性禽流感病毒(low pathogenic avian influenza viruses,LPAIVs)的分布规律,从2009年10月到2010年9月在华东地区某活禽市场采集鸡、鸭、鹅等家禽的泄殖腔拭子共1 650份,经鸡胚接种和HA、HI试验鉴定,结果从58份样品中分离到了LPAIVs,总分离率为3.51%。所分离到的6种HA亚型及各HA亚型分离率从高到底依次为:H6、H3、H1、H4、H9、H11。从这些样品中鉴定出7种NA亚型,包括N1、N2、N3、N4、N5、N6、N8,二者之间有11种组合。家鸭样品中LPAIVs的分离率为7.28%,显著高于鸡源样品的分离率1.00%和鹅源样品的分离率1.02%。LPAIVs的季节性分布较为明显,3～6月份和10～12月份的分离率较高,而冬季最冷的1月份和夏季最热的7月份则没有分离到。2种或2种以上不同HA亚型混合感染的样品有6份,全部为水禽源样品,占总阳性样品数的10.34%。这些数据表明活禽市场可以作为AIV的一个重要储存库,而家养水禽可作为AIV的一个重要储存宿主,应该继续加强对活禽市场,尤其是家养水禽中AIV的监测。

关键词：低致病性禽流感流行病学家禽分离率家养水禽

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共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性研究

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 405-408页

作者：陈素娟丁彦红钱程柴茂彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室/禽类预防医学教育部重点实验室江苏扬州225009

为评价共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒(rFPV-AIH5AIL6)的遗传稳定性,本研究将其接种CEF,绘制生长曲线。结果显示,该重组病毒与亲本病毒的生长速度及蚀斑大小一致;在CEF连续培养20代,取第0代、5代、10代、20代重组病... 详细信息

为评价共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒(rFPV-AIH5AIL6)的遗传稳定性,本研究将其接种CEF,绘制生长曲线。结果显示,该重组病毒与亲本病毒的生长速度及蚀斑大小一致;在CEF连续培养20代,取第0代、5代、10代、20代重组病毒PCR扩增HA和IL-6基因进行鉴定,显示HA基因无核苷酸突变,IL-6基因在第20代时有1个氨基酸发生突变,但不影响该蛋白的功能区;间接免疫荧光试验证明所选代次病毒均能够表达HA蛋白,RT-PCR试验表明各代次病毒均可以表达鸡IL-6基因;通过蓝斑鉴定重组病毒纯度,结果显示所有蚀斑均为蓝斑。因此,该重组鸡痘病毒具有良好的遗传稳定性,符合兽医生物制品的生产要求。

关键词：禽流感病毒 HA基因鸡IL-6 重组鸡痘病毒遗传稳定性

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免疫鸽群中2株新城疫病毒的分离鉴定及遗传进化分析

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中国兽医科学 2012年第10期42卷 998-1001页

作者：朱杰赵晴晴陈广仁宋庆庆胡顺林王晓泉李群辉刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009 建湖县上冈镇畜牧兽医站江苏建湖224733

为了研究目前免疫鸽群中新城疫病毒(NDV)感染发病的原因,对2011年从江苏省和湖南省2个免疫过的发病鸽场分离到的2株鸽源NDV进行了生物学特性的测定以及遗传进化分析,并将其与疫苗株La Sota进行交叉中和试验。结果显示,NT-10株为强毒株,... 详细信息

为了研究目前免疫鸽群中新城疫病毒(NDV)感染发病的原因,对2011年从江苏省和湖南省2个免疫过的发病鸽场分离到的2株鸽源NDV进行了生物学特性的测定以及遗传进化分析,并将其与疫苗株La Sota进行交叉中和试验。结果显示,NT-10株为强毒株,HuN株为中等毒力。对其F基因的遗传进化分析表明,二者均为Ⅵb亚型NDV,均为强毒裂解位点,F蛋白上有3个区别于其他基因型的特征性氨基酸位点,即132S,259H,380N。中和试验结果表明,2个NDV分离株与La Sota的抗原性差异很大。结果表明,Ⅵb亚型仍然是鸽群中新城疫病毒的主要流行株,该亚型具有明显的宿主感染特异性;鸽源Ⅵb亚型NDV分离株与La Sota的抗原性差异较大,这可能是免疫鸽群中发生NDV感染的重要原因之一,有必要研制用于预防鸽群中Ⅵb亚型NDV感染的新型疫苗。

关键词：鸽 Ⅵb亚型新城疫 F蛋白交叉中和试验

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鸭疫里默杆菌单克隆抗体的研制及免疫胶体金检测方法的建立

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中国兽医学报 2012年第11期32卷 1651-1655页

作者：陈素娟陈冰孙化露高以明彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室禽类预防医学教育部重点实验室江苏扬州225009 南京出入境检验检疫局南京210001

为快速检测临床样品中鸭疫里默氏杆菌(RA),建立检测RA的免疫胶体金方法。以血清1型和2型RA分别免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备单克隆抗体。经ELISA筛选获得4株单克隆抗体2F7、3G9、5G7和2E6,5G7可与1、2、3、11型RA交叉反应,而其... 详细信息

为快速检测临床样品中鸭疫里默氏杆菌(RA),建立检测RA的免疫胶体金方法。以血清1型和2型RA分别免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备单克隆抗体。经ELISA筛选获得4株单克隆抗体2F7、3G9、5G7和2E6,5G7可与1、2、3、11型RA交叉反应,而其他3株与1、2、3型RA有交叉反应。选取单克隆抗体5G7进行纯化和胶体金标记,制备免疫胶体金试纸条,可检测1、2、3、11型RA,而与禽巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门菌无反应。对RA模拟样品最低检出剂量为6×103 CFU细菌,与细菌分离方法相比,免疫胶体金试纸条对临床病料中RA检测的敏感性为100%,符合率为88.9%。

关键词：鸭疫里默杆菌单克隆抗体免疫胶体金

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