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产志贺毒素大肠杆菌O18 XZ113株主要毒力基因eaeA、stx2、ehxA突变株的构建及其对小鼠的致病作用

微生物学报 2011年第12期51卷 1655-1662页

作者：薛涛陈先亮高崧刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】探讨毒力基因eaeA、stx2、ehxA与产志贺毒素大肠杆菌O18致病力的关系。【方法】利用λ-Red重组系统,构建STEC XZ113株eaeA、stx2、ehxA基因缺失突变株并进行一系列生物学特性的研究。【结果】细胞粘附试验表明突变株XZ113△eaeA... 详细信息

【目的】探讨毒力基因eaeA、stx2、ehxA与产志贺毒素大肠杆菌O18致病力的关系。【方法】利用λ-Red重组系统,构建STEC XZ113株eaeA、stx2、ehxA基因缺失突变株并进行一系列生物学特性的研究。【结果】细胞粘附试验表明突变株XZ113△eaeA对HEp-2细胞的粘附能力明显降低;Vero细胞毒素试验表明突变株XZ113△stx2失去了使Vero细胞发生病变的能力;溶血活性试验表明突变株XZ113△ehxA无法在血平板上产生溶血圈,丢失了溶血能力。回复株在以上表型方面与野生株XZ113一致;与亲本株的体外竞争试验结果表明,突变株竞争力减弱,体内竞争结果表明突变株XZ113△eaeA被中度致弱;突变株XZ113△stx2和突变株XZ113△ehxA被高度致弱。【结论】stx2、ehxA基因在STEC O18 XZ113株的致病过程中发挥着更为重要的作用。

关键词：产志贺毒素大肠杆菌 O18 eaeA、stx2、ehxA基因突变株致病性

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稳定表达人Siat7e基因的MDCK细胞系的建立和全悬浮细胞的驯化

引用

中国生物工程杂志 2011年第11期31卷 75-80页

作者：张妍张文俊李群辉刘晓文刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的:现有的禽流感疫苗生产的方法已经不能适应工业化大生产的需求,有必要开发全悬浮培养的细胞系来满足大生产的需求。方法:我们通过转染稳定表达Siat7e基因的真核表达载体对MDCK细胞进行改造,并经过后期的驯化,筛选适应于全悬浮培养的... 详细信息

目的:现有的禽流感疫苗生产的方法已经不能适应工业化大生产的需求,有必要开发全悬浮培养的细胞系来满足大生产的需求。方法:我们通过转染稳定表达Siat7e基因的真核表达载体对MDCK细胞进行改造,并经过后期的驯化,筛选适应于全悬浮培养的MDCK细胞。结果:成功筛选到能稳定表达Siat7e基因并能适应全悬浮生长的细胞系。结论:该细胞系具有潜在的应用价值,为MDCK细胞的培养以及工业化大生产疫苗提供参考。

关键词： MDCK Siat7e 全悬浮疫苗生产

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一株H11N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析

引用

畜牧兽医学报 2011年第2期42卷 217-223页

作者：赵坤坤张妍段志强钟蕾朱艳梅赵国刘晓文刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了解禽流感病毒在华东地区家禽体内的进化情况,作者对华东地区某活禽市场的家禽进行了禽流感病毒的流行病学监测,并分离鉴定出1株H11N2亚型禽流感病毒A/duck/Jiangxi/k0701/2009。对该株病毒全基因组的遗传进化分析表明A/duck/Jiangxi... 详细信息

为了解禽流感病毒在华东地区家禽体内的进化情况,作者对华东地区某活禽市场的家禽进行了禽流感病毒的流行病学监测,并分离鉴定出1株H11N2亚型禽流感病毒A/duck/Jiangxi/k0701/2009。对该株病毒全基因组的遗传进化分析表明A/duck/Jiangxi/k0701/2009的8个基因片段来源广泛,与亚洲及欧洲某些地区的毒株存在广泛的重组现象。其PB2基因和NS基因可能由A/mallard/Korea/GH170/2007(H7N7)提供,NA基因与高致病性禽流感病毒A/duck/Hebei/0710/2009(H5N2)的NA基因亲缘关系较近,而PB1、PA和NP基因则可能与A/Muscovy duck/Thailand/CU-LM1984/2009(H4N9)有共同来源。本研究结果提示该株病毒可能为1株多元重组病毒,且可能在高致病性禽流感病毒的进化中起了重要作用。

关键词：禽流感病毒 H11N2亚型遗传进化分析基因重组

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2002—2009年中国华东地区家禽低致病性禽流感的病原学检测与分析

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中国农业科学 2011年第1期44卷 153-159页

作者：赵国刘晓文钱忠明薛峰彭宜彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院/农业部畜禽传染病学重点开放实验室

【目的】为确定中国华东地区家禽中禽低致病性禽流感(Low pathogenic avian influenza,LPAI)的流行和分布状况。【方法】2002年7月至2009年9月在江苏省扬州市活禽市场(live poultry markets,LPMs)采集来自不同省份的家禽泄殖腔拭子11 64... 详细信息

【目的】为确定中国华东地区家禽中禽低致病性禽流感(Low pathogenic avian influenza,LPAI)的流行和分布状况。【方法】2002年7月至2009年9月在江苏省扬州市活禽市场(live poultry markets,LPMs)采集来自不同省份的家禽泄殖腔拭子11 645个,用鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒,进行了长达8年的LPAI的病毒学监测。【结果】禽流感阳性样品1 158个,总分离率9.94%。所分离到的亚型及各亚型分离率从高到低依次为H3、H6、H11、H1、H4、H9、H10、H8。【结论】禽流感的分布季节性非常明显,以冬、春为高,各亚型又有其不同分布特点。到目前为止,已经从家鸭中分离到8种HA亚型,依次为H1、H3、H4、H6、H8、H9、H10、H11;7种NA亚型,包括N1、N2、N3、N4、N5、N6、N8,两者之间有17种组合,与野鸭的带毒情况十分相似。家鸭还很容易发生混合感染,2007年以来以H6亚型为主,H3、H11、H4、H9等很多亚型都可与其混合感染,这为禽流感病毒(avian influenza viruses,AIVs)基因重组产生新的亚型及毒力的变异提供了很好的载体。

关键词：低致病性禽流感流行病学家禽

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鸡胚成纤维细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2011年第2期32卷 1-5页

作者：段志强王郁杨朱艳梅开妍胡顺林王晓泉刘秀梵扬州大学兽医学院/农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装... 详细信息

选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装配和出芽的影响。结果表明：提取的细胞总RNA的D260 nm/D280 nm为1.96,甲醛变性琼脂糖凝胶显示RNA未发生降解,质量良好。获得的文库容量为3×106cfu,插入的双链cDNA片段大小为0.3~3 kb,平均长度为1.3 kb左右,文库重组率为100%。该文库的构建为发现和研究与NDV M蛋白相互作用的宿主细胞蛋白提供有效工具。

关键词：新城疫病毒鸡胚成纤维细胞酵母双杂交 cDNA文库 SMART技术

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鹅源新城疫病毒M蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

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中国兽医科学 2011年第4期41卷 331-335页

作者：段志强王郁杨朱艳梅开妍胡顺林刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为了筛选鹅源新城疫病毒(JS/5/05/Go)M蛋白与鸡胚成纤维细胞作用的靶蛋白,应用酵母双杂交技术构建M蛋白的诱饵载体pGBKT7-M。采用RT-PCR方法从鹅源新城疫病毒中扩增了M基因片段,将其克隆到pGEM-T载体中,经测序鉴定正确后,定向克隆到酵... 详细信息

为了筛选鹅源新城疫病毒(JS/5/05/Go)M蛋白与鸡胚成纤维细胞作用的靶蛋白,应用酵母双杂交技术构建M蛋白的诱饵载体pGBKT7-M。采用RT-PCR方法从鹅源新城疫病毒中扩增了M基因片段,将其克隆到pGEM-T载体中,经测序鉴定正确后,定向克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组诱饵载体转化酿酒酵母Y187,并验证其在酵母细胞中有无自激活和毒性作用。结果显示,成功构建了诱饵载体pGBKT7-M,并证明其对报告基因无自激活作用,且对酵母细胞无毒性。表明诱饵载体pGBKT7-M可用于酵母双杂交系统寻找与M蛋白相互作用的蛋白质。

关键词：新城疫病毒 M蛋白酵母双杂交诱饵载体自激活作用

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细胞悬浮培养技术生产疫苗的研究进展

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中国家禽 2011年第13期33卷 45-47页

作者：张妍张文俊赵坤坤李群辉刘晓文刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

传统的疫苗生产方法受很多因素的限制,为了适应扩大化工业生产的需要,细胞悬浮培养技术已经在工业生产上日益成熟,本文就此项技术中关于悬浮培养的细胞性能、细胞悬浮培养驯化的方法、悬浮培养细胞培养基的优化、生物反应器种类等要素... 详细信息

传统的疫苗生产方法受很多因素的限制,为了适应扩大化工业生产的需要,细胞悬浮培养技术已经在工业生产上日益成熟,本文就此项技术中关于悬浮培养的细胞性能、细胞悬浮培养驯化的方法、悬浮培养细胞培养基的优化、生物反应器种类等要素进行概述,并对此技术在疫苗生产中的应用作了展望。

关键词：细胞悬浮培养疫苗生产

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不同禽类在H5N1亚型高致病性禽流感流行中的作用

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中国家禽 2011年第10期33卷 38-41页

作者：赵国刘金彪刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

H5亚型高致病性禽流感在野生水禽中进化很慢,传给陆禽后其进化速度大大加快,当一些病毒在陆禽适应且毒力增强后又会反传给野生水禽。虽然野生水禽在感染高致病性禽流感后不能长久维持和储存病毒,但可以促进高致病性禽流感病毒远距离传... 详细信息

H5亚型高致病性禽流感在野生水禽中进化很慢,传给陆禽后其进化速度大大加快,当一些病毒在陆禽适应且毒力增强后又会反传给野生水禽。虽然野生水禽在感染高致病性禽流感后不能长久维持和储存病毒,但可以促进高致病性禽流感病毒远距离传播。与此同时,家养水禽在陆禽与野生水禽之间的流感病毒传播上起着非常重要的媒介和放大器作用,它们既可以携带多种亚型的低致病性禽流感病毒,又能长期储存陆禽来源的高致病性禽流感病毒,尤其是家鸭,无论是否免疫,抗体水平高低,都能带毒排毒,将高致病性禽流感病毒在野生水禽与陆禽间的传播放大。

关键词：高致病性禽流感水禽陆禽

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7种鸭源细菌的分离与16S rDNA测序鉴定

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中国兽医杂志 2011年第10期47卷 13-16页

作者：孙化露陈冰李树纯陈素娟彭大新扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

从病死鸭的脏器中无菌分离细菌。根据培养特性、菌落形态、革兰染色和生化特性,鉴定出7种细菌分离株。以分离株的基因组DNA为模板,用16S rDNA试剂盒扩增其DNA片段,测序后NCBI网站进行BLAST搜索比对,鉴定出细菌种类,分别为鼠伤寒沙门菌... 详细信息

从病死鸭的脏器中无菌分离细菌。根据培养特性、菌落形态、革兰染色和生化特性,鉴定出7种细菌分离株。以分离株的基因组DNA为模板,用16S rDNA试剂盒扩增其DNA片段,测序后NCBI网站进行BLAST搜索比对,鉴定出细菌种类,分别为鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、铜绿假单胞杆菌、施氏假单胞菌、浅绿气球菌和麦氏棒杆菌。前3种为鸭的常见分离菌,其余的较为少见。因此在鸭病控制过程中应注意可能存在一些不常见细菌的混合感染。

关键词：鸭细菌致病 16S rDNA

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高致病性蓝耳病的防治体会

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中国兽医杂志 2011年第3期47卷 81-82页

作者：赵国鹿欣伦潘金金刘金彪扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009

从2009年10月到2010年3月我们共收治来自江苏、安徽、上海等南方地区的高致病性蓝耳病48例,经采取了有效的防治措施,疫情得到了较好控制,防治情况报告如下。

关键词：高致病性蓝耳病防治南方地区疫情

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