检索结果-内蒙古大学图书馆

利用8质粒系统拯救A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株禽流感病毒

微生物学报 2005年第3期45卷 373-376页

作者：石火英卢建红陈素娟孙蕾刘秀梵刘玉良扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用反向遗传技术将含有1998年中国大陆分离株H9N2亚型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的8个基因片段的质粒共转染COS_1细胞,产生了与野生病毒生物学特性相同的H9N2亚型AIV。将A Chicken Shanghai F 98(CK SH F 98)株H9N2亚型AIV的... 详细信息

应用反向遗传技术将含有1998年中国大陆分离株H9N2亚型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的8个基因片段的质粒共转染COS_1细胞,产生了与野生病毒生物学特性相同的H9N2亚型AIV。将A Chicken Shanghai F 98(CK SH F 98)株H9N2亚型AIV的8个基因组cDNA分别克隆到polⅠ_polⅡ转录表达载体pHW2 0 0 0中,构建成8个转录表达载体重组质粒。将这8个质粒共转染COS_1细胞,2 4h后收获细胞及上清接种SPF鸡胚,4 8h后收取鸡胚尿囊液继续进行鸡胚传代,产生能致死鸡胚的病毒。经血凝、血凝抑制试验、序列分析和电镜观察,证实产生了CK SH F 98(H9N2 )株AIV。

关键词：反向遗传技术 H9N2亚型AIV 质粒转染

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H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株的全基因克隆及序列分析

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微生物学报 2005年第5期45卷 690-696页

作者：龙进学王曲直卢建红刘玉良刘秀梵扬州大学畜牧兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用流感病毒通用引物[4]和H5N1亚型禽流感(Avian influenza virus,AIV)的型特异性引物,成功的扩增出H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株(简称A/D/SD/04)的全基因序列(包括5′和3′端的非编码区序列).A/D/SD/04的基因组核苷酸全序列与18株网上公布的禽流感基因序列进行比较和分析,结果与4株鸭源H5N1的5～7个基因具99%以上的同源性;与14株H5N1有至少一个以上内部基因同源性在95%以上.与H9亚型AIV代表株A/Quail/Hongkong/G1/97(简称G1株)和A/Chicken/Beijing/1/94(简称BJ94)比较,除了非结构基因(Nonstructural gene,NS)与G1株的同源性为95.3%外,其余基因均在36.6%～92.1%之间.说明A/D/SD/04没有H9N2基因的直接整合,是H5N1毒株在自然界的重组株.推导的HA氨基酸序列分析,A/D/SD/04 的血凝素(Heamgglutinin,HA)裂解位点与比较的16株AIV的序列一致,是高致病性禽流感的分子特征(PQRERRRKKR/G),第226位氨基酸是对禽类和哺乳细胞均具有亲嗜性的蛋氨酸(Met).神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)在第48位氨基酸(颈部)后有20个氨基酸的缺失,但非结构蛋白(NS)没有在79～84氨基酸发生缺失.碱性聚合酶2(PB2)的627位氨基酸是亲禽类细胞的谷氨酸(Glu,E).结合生物学特性和分子特征,A/D/SD/04对小鼠的致病力是由多种因素决定,其可能是一株对鸡高度致病,并逐渐获得对哺乳动物致病能力的中间重组病毒.

关键词： H5N1亚型禽流感病毒通用引物全基因组序列序列分析

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反向遗传操作技术产生全禽源致弱的H5N1亚型禽流感病毒的免疫保护性试验

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中国家禽 2005年第17期27卷 11-13页

作者：石火英张小荣孙学辉刘慧谋刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

利用反向遗传操作技术产生致弱的8基因全禽源的H5N1亚型禽流感病毒rgF-H5△N1,经甲醛灭活制成油苗免疫SPF鸡和有母源抗体的商品鸡。比较拯救的重配病毒rgF-H5△N1和野毒H5N1亚型禽流感病毒油苗免疫后的抗体应答水平、攻毒后发病率和死... 详细信息

利用反向遗传操作技术产生致弱的8基因全禽源的H5N1亚型禽流感病毒rgF-H5△N1,经甲醛灭活制成油苗免疫SPF鸡和有母源抗体的商品鸡。比较拯救的重配病毒rgF-H5△N1和野毒H5N1亚型禽流感病毒油苗免疫后的抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标,评价其免疫和交叉免疫保护作用。结果表明:反向遗传操作技术为构建新型的流感疫苗株提供了更好的方法。

关键词：反向遗传操作技术禽流感病毒疫苗免疫保护作用 H5N1亚型操作技术反向遗传保护性试验致弱禽源

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免疫程序与母源抗体对H5禽流感疫苗免疫鸭和鹅HI抗体水平的影响

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中国兽医科技 2005年第8期35卷 638-642页

作者：张评浒任涛唐应华薛峰仇旭升曹永忠刘晓文辛朝安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 华南农业大学兽医学院广东广州510642

对不同日龄与母源抗体水平的鸭和鹅,用H5亚型禽流感疫苗免疫后,其HI抗体消长情况进行了比较和观察,结果,初生水禽3日龄首免即可对禽流感疫苗(H5亚型)产生良好的免疫应答;雏鹅母源抗体几乎以每4d下降1个HI抗体效价单位的速度消退;母源抗... 详细信息

对不同日龄与母源抗体水平的鸭和鹅,用H5亚型禽流感疫苗免疫后,其HI抗体消长情况进行了比较和观察,结果,初生水禽3日龄首免即可对禽流感疫苗(H5亚型)产生良好的免疫应答;雏鹅母源抗体几乎以每4d下降1个HI抗体效价单位的速度消退;母源抗体对H5禽流感疫苗免疫后的HI抗体水平存在一定的干扰作用;加强免疫鸭和鹅所产生的H5 HI抗体水平及其维持时间与仅免疫一次的鸭和鹅所产生的抗体水平之间存在显著差异;鸭和鹅免疫H5禽流感疫苗后第25～30d H5 HI抗体水平达到高峰.

关键词：禽流感 H5亚型灭活疫苗免疫母源抗体

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朊蛋白基因结构与功能研究进展

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中国人兽共患病杂志 2005年第9期21卷 809-811,834页

作者：陶利明王志亮农业部动物检疫所国家外来动物疫病诊断中心国家疯牛病参考实验室扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学熏点开放实验室

朊蛋白存在两种结构形式。一种为正常细胞膜相关蛋白（PrP^c），另一种为朊病毒颗粒相关蛋白（PrP^ac）。两者一级结构完全相同．但高级结构具有较大差异：在PrP^c中α-螺旋结构含量较高．在PrP^ac中β-折叠结构含量较高。两者高级结构... 详细信息

朊蛋白存在两种结构形式。一种为正常细胞膜相关蛋白（PrP^c），另一种为朊病毒颗粒相关蛋白（PrP^ac）。两者一级结构完全相同．但高级结构具有较大差异：在PrP^c中α-螺旋结构含量较高．在PrP^ac中β-折叠结构含量较高。两者高级结构的不同使得它们在物理、化学性质以及生物学特性上产生很大差异。目前能区分这两种不同结构的蛋白方法之一是根据它们对蛋白酶K抗性的差异：PrP^ac能够抵抗该酶的消化．而PrP^c则不能。根据该蛋白因构象的转变而造成蛋白功能的改变，Prusiner提出了朊病毒假说和蛋白质构象病的观点，并因此获得了1997年诺贝尔生理学奖。

关键词：基因结构朊蛋白功能研究进展蛋白质构象病诺贝尔生理学奖 PrP^c 朊病毒假说颗粒相关蛋白膜相关蛋白

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动物疫苗现状和研究展望

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中国禽业导刊 2005年第19期22卷 10-11页

作者：刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225000

我国畜禽疫苗的研究应着重抓好两个方面的工作,一是常规疫苗的研究,用新的常规疫苗补充丰富或替代现有的常规疫苗;二是加大新型疫苗如基因缺失疫苗、DNA疫苗和反向疫苗等的研究开发的力度,研制出能用于畜禽传染病控制和消灭计划的高效... 详细信息

我国畜禽疫苗的研究应着重抓好两个方面的工作,一是常规疫苗的研究,用新的常规疫苗补充丰富或替代现有的常规疫苗;二是加大新型疫苗如基因缺失疫苗、DNA疫苗和反向疫苗等的研究开发的力度,研制出能用于畜禽传染病控制和消灭计划的高效疫苗。著名动物疫病防控专家刘秀梵教授对常规疫苗的生产研究现状和新型疫苗的研究展望作了比较权威的阐述,科学客观,观点鲜明,论述充分,对业界具有较强的指导作用。

关键词：动物疫苗传染病控制畜禽传染病传播途径疫苗免疫畜禽疫病疫苗控制技术人员

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H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较和其表面基因序列的测定和分析

H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较和其表面基因序列的测定和...

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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：石火英陈素娟高崧刘武杰刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

选择中国大陆最早分离的H9N2业型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)(缩写为SS株)和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIVA/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)(缩写为F株)为研究对象,对其在SPF鸡体内的复制能力和传播途径特性作了系统的比较,发现F株在4周龄SPF鸡气管中的复制能力高于SS株,F株可以经气溶胶传播途径传播,SS株不能经气溶胶传播途径传播;利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获取SS株的HA和NA基因的cDNA,序列分析得知:SS株HA基因的裂解位点氨基酸序列是PARSSR↓GL;F株和SS株的HA和NA-基因的同源性都很高;SS株与F株的NA基因红细胞吸附位点的氨基酸序列不同;SS株和F株的NA基因在63-65位存在氨基酸缺失。

关键词： H9N2亚型AIV F株 SS株传播途径 HA和NA基因序列

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H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较和其表面基因序列的测定和分析

H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较和其表面基因序列的测定和...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

作者：石火英陈素娟高崧刘武杰刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

选择中国大陆最早分离的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)(缩写为SS株)和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIVA/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)(缩写为F株)为研究对象,对其在SPF鸡体内的复制能力和传播途径特性作了系统的比较,发现F株在4周龄SPF鸡气管中的复制能力高于SS株,F株可以经气溶胶传播途径传播,SS株不能经气溶胶传播途径传播;利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获取SS株的HA和NA基因的cDNA,序列分析得知:SS株HA基因的裂解位点氨基酸序列是PARSSR↓GL;F株和SS株的HA和NA基因的同源性都很高;SS株与F株的NA基因红细胞吸附位点的氨基酸序列不同;SS株和F株的NA基因在63-65位存在氨基酸缺失。

关键词： H9N2亚型AIV F株 SS株传播途径 HA和NA基因序列

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H7亚型禽流感病毒血凝素基因的真核表达载体的构建及鉴定

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中国家禽 2004年第z1期26卷 31-34页

作者：杨旭芹梁光军张小荣文其乙刘秀梵扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州225009

参考已发表的H7亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列设计引物,以pUCH7为模板,经PCR扩增出一条1.7kb的HA全基因片段,将该片段定向克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(一)中,转化大肠埃希氏菌DH5α,小量制备重组质粒pcDNA-HA,酶切鉴定正确... 详细信息

参考已发表的H7亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列设计引物,以pUCH7为模板,经PCR扩增出一条1.7kb的HA全基因片段,将该片段定向克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(一)中,转化大肠埃希氏菌DH5α,小量制备重组质粒pcDNA-HA,酶切鉴定正确后,转染COS-1细胞,经免疫荧光鉴定其体外表达情况。结果表明H7亚型AIV HA在COS-1细胞中获得了成功表达。用该重组质粒pcDNA-HA免疫BALB／C小鼠,制备免疫血清,经免疫印迹实验证实该H7亚型AIV HA在小鼠体内也得到了良好的表达。

关键词： H7亚型禽流感病毒血凝素基因真核表达质粒载体表达

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应用多重PCR方法鉴定粪样和食品中产气荚膜梭菌

应用多重PCR方法鉴定粪样和食品中产气荚膜梭菌

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家畜传染病学会第六次人畜共患病学术交流会

作者：梁光军赵李祥杨旭芹贾红张小荣文其乙刘秀梵扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室

按国标方法从346份粪便样品分离出了69株产气荚膜梭菌,从275份食品样品分离到97株产气荚膜梭菌。经过生化试验鉴定和多重PCR方法鉴定,证实均为A型产气荚膜梭菌,携带β2毒素的产气荚膜梭菌共为53株,另从检出了2株肠毒素阳性A型产气荚膜... 详细信息

按国标方法从346份粪便样品分离出了69株产气荚膜梭菌,从275份食品样品分离到97株产气荚膜梭菌。经过生化试验鉴定和多重PCR方法鉴定,证实均为A型产气荚膜梭菌,携带β2毒素的产气荚膜梭菌共为53株,另从检出了2株肠毒素阳性A型产气荚膜梭菌。本实验初步摸清了我国的粪便中和食品中的产气荚膜梭菌的动态分布。并在食品中发现了导致人食物中毒的肠毒素阳性A型产气荚膜梭菌,为分子流行病学研究提供了重要理论依据。

关键词：产气荚膜梭菌多重PCR 肠毒素基因分型

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