检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2025年第3期57卷 66-73页

作者：徐超谢泉武佳妍王胜男万志敏邵红霞秦爱建叶建强李拓凡扬州大学兽医学院/禽类预防医学教育部重点实验室/江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

旨在为解决国内禽白血病净化周期长以及净化鸡群J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染频发等问题提供新型抗ALV-J策略。本研究利用前期构建好的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与血清4型禽腺病毒(FAdV-4)纤突蛋白Fiber-2融合的重组FAdV-4为载体,并使... 详细信息

旨在为解决国内禽白血病净化周期长以及净化鸡群J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染频发等问题提供新型抗ALV-J策略。本研究利用前期构建好的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与血清4型禽腺病毒(FAdV-4)纤突蛋白Fiber-2融合的重组FAdV-4为载体,并使用CRISPR/Cas9和Cre-LoxP技术构建表达ALV-J囊膜蛋白(Env)的重组FAdV-4,通过间接免疫荧光试验和Western blot验证重组病毒表达的Env蛋白,测定重组病毒在鸡肝癌细胞系(LMH)细胞中的增殖特性。结果:成功拯救了能表达ALV-J Env蛋白的重组病毒FAdV-4-ALV-J-env,该重组病毒在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。本研究构建的重组病毒FAdV-4-ALV-J-env为ALV-J和FAdV-4感染的联防联控提供了二联候选疫苗株。

关键词： J亚群禽白血病病毒 Env蛋白血清4型禽腺病毒重组病毒

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羊种布鲁氏菌链霉素耐受基因筛选及鉴定

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微生物学通报 2025年第2期52卷 690-702页

作者：周师众袁雅琴宁文晴薛天骐杨晓雯丁家波中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(北方)北京100193 扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 山东农业大学动物医学院山东泰安271018

【背景】布鲁氏菌(Brucella spp.)是一种兼性胞内寄生菌,能够引起世界范围内的人兽共患流行病——布鲁氏菌病(以下简称布病)。链霉素是治疗布病的推荐药物,但我国已有链霉素耐受分离株(根据CLSI推荐的耐药折点)。【目的】筛选并鉴定羊... 详细信息

【背景】布鲁氏菌(Brucella spp.)是一种兼性胞内寄生菌,能够引起世界范围内的人兽共患流行病——布鲁氏菌病(以下简称布病)。链霉素是治疗布病的推荐药物,但我国已有链霉素耐受分离株(根据CLSI推荐的耐药折点)。【目的】筛选并鉴定羊种布鲁氏菌(Brucella melitensis)链霉素耐受的新基因。【方法】利用转录组筛选羊种布鲁氏菌链霉素耐受新基因,并利用同源重组、分子对接等技术预测并鉴定相关基因的功能。【结果】羊种布鲁氏菌(M5疫苗株)在含2×MIC浓度链霉素培养基上,12 h后通过耐受恢复增殖能力。转录组分析表明,细胞膜组成成分在低浓度链霉素耐受中发挥重要作用,核糖体通路相关基因表达量显著性增加[|log2FC|≥2.0,P<0.05],群体感应通路、Ⅳ型分泌系统相关基因表达量显著性降低(|log2FC|≥2.0,P<0.05)。利用同源重组技术缺失组成Ⅳ型分泌系统的元件,发现缺失virB3和virB5基因后,M5疫苗株链霉素MIC值增高,回补后与亲本株差异不显著。分子对接预测发现,VirB3和VirB5能够通过氢键与链霉素结合。【结论】链霉素主要影响羊种布鲁氏菌细胞膜组分涉及的相关通路。羊种布鲁氏菌通过降低Ⅳ型分泌系统组成元件virB3和virB5基因的表达耐受链霉素。本研究为布鲁氏菌耐药株研究提供了新思路,为布鲁氏菌新药研发提供了候选靶点。

关键词：羊种布鲁氏菌链霉素 Ⅳ型分泌系统 VirB操纵子

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一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株荧光定量PCR检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2025年第3期56卷 1465-1472页

作者：杨晓雯宁文晴周师众袁雅琴侯雪新丁家波中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(北方) 北京100193 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室北京102206 山东农业大学动物医学院泰安271001 扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室扬州225009

近年来,世界范围内已分离获得布鲁氏菌复方新诺明耐药株,快速检测样品中是否含有耐药株有助于指导临床用药。目前国内外尚无布鲁氏菌复方新诺明耐药株的快速检测方法。本研究旨在建立一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐受株的快速检测方法。... 详细信息

近年来,世界范围内已分离获得布鲁氏菌复方新诺明耐药株,快速检测样品中是否含有耐药株有助于指导临床用药。目前国内外尚无布鲁氏菌复方新诺明耐药株的快速检测方法。本研究旨在建立一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐受株的快速检测方法。基于前期的研究筛选最小抑菌浓度较高的我国羊种布鲁氏菌分离株,利用基因组测序分析全基因组SNPs并筛选SNPs位点,利用MGB探针建立荧光定量检测羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株。研究发现,羊种布鲁氏菌2型标准株可作为耐药株分析的参考株,且64个SNPs和InDels为耐药株特有;12个突变位点可用于建立耐药株快速检测方法;利用染色体1中2014308位点的A/G多态性建立荧光定量检测方法特异性良好,最低能检测2×10^(1)CFU菌量,可用于临床样品是否含有复方新诺明耐药株的检测。本研究建立了一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株的荧光定量检测方法,为我国布病耐药株的防控提供科学依据,同时也为临床用药提供参考。

关键词：羊种布鲁氏菌复方新诺明全基因组SNPs MGB探针

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猪Toll样受体7基因人工miRNA表达质粒的构建与筛选

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第1期29卷 18-21,26页

作者：宋红芹姜翠翠孙怀昌扬州大学兽医学院禽类预防医学省部共建教育部重点实验室江苏扬州225009

目的构建猪Toll样受体7(TLR7)基因的人工miRNA(amiRNA)特异性表达载体,筛选有效amiRNA。方法 RT-PCR扩增猪TLR7基因的1984～2648 bp序列,构建融合表达载体pTLR7-EGFP。设计针对猪TLR7的5对amiRNA,构建重组干扰质粒pcDNA5-miRTLR7。将pcDNA5-miRTLR7和pTLR7-EGFP共转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR检测amiTLR7的表达,以荧光显微镜观察和流式细胞术分析干扰效率。结果 5个amiTLR7都成功表达,且均能沉默NIH-3T3细胞中TLR7基因的表达,抑制效率为36.99%到97.28%,其中amiTLR7-3效果最佳。结论成功构建了针对猪TLR7基因的amiRNA表达质粒,筛选出了沉默猪TLR7基因的最佳干扰序列。

关键词： Toll样受体7基因人工miRNA RNA干扰筛选

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我国2002-2016年间鸡传染性支气管炎病毒基因组序列重组分析

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微生物学通报 2017年第12期44卷 2942-2950页

作者：周海生张美红田雪武奇邵红霞钱琨叶建强秦爱建禽类预防医学省部共建教育部重点实验室扬州大学兽医学院江苏扬州225009

【目的】传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)主要引起鸡群呼吸道与肾脏疾病,是影响养禽业重要的病毒性病原之一。了解我国IBV的流行及基因重组情况。【方法】收集Gen Bank中我国2002-2016年间分离的92株IBV S1基因及5... 详细信息

【目的】传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)主要引起鸡群呼吸道与肾脏疾病,是影响养禽业重要的病毒性病原之一。了解我国IBV的流行及基因重组情况。【方法】收集Gen Bank中我国2002-2016年间分离的92株IBV S1基因及55株IBV基因组序列,并对这些序列进行比对分析。【结果】IBV S1基因序列分析结果表明,2002-2016年间我国流行的92株IBV可以分为13个基因型,包括QX、4/91、Mass、tl/CH/LDT3/03、CK/CH/LSC/99I、TW-I、TW-II、TC07-2、Ck/CH/LDL/97I、N1/62-associated、Arkansas、New-I及一个新鉴定的基因分支New-II。值得注意的是,属于美国相关基因分支的ck/CH/LSD/110712已在我国出现。RDP4方法进行重组分析显示,新出现的基因分支New-II病毒S1基因来源于tl/CH/LDT3/03型与QX型毒株重组,我国2002-2016年间流行的55株IBV中有52株IBV基因组存在重组事件,其中25个IBV分离株基因组中发现有疫苗型(Mass,tl/CH/LDT3/03及4/91型等)病毒基因组片段的重组,这一结果在Sim Plot分析中进一步得到确认。【结论】根据生物信息学分析结果,证明流行于我国的IBV基因型众多,疫苗毒株基因频繁参与了IBV基因重组,导致IBV新的基因型或变异株出现,提示在防控IB时要注意合理使用IBV疫苗。

关键词：传染性支气管炎病毒基因型基因组重组疫苗

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家禽活疫苗中鸡传染性贫血病毒PCR检测方法的建立

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中国家禽 2012年第21期34卷 28-30页

作者：邵红霞王平平武敏金文杰钱琨秦爱建扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009

为建立不依赖于病毒分离的快速,特异的禽活疫苗中鸡传染性贫血病毒(CAV)监测方法,本研究建立了CAV的PCR检测方法。试验表明:该PCR不仅具有良好的CAV特异性,且检测灵敏度达3.98个TCID50/反应。用该方法监测9份随机抽取的商品禽用活疫苗发... 详细信息

为建立不依赖于病毒分离的快速,特异的禽活疫苗中鸡传染性贫血病毒(CAV)监测方法,本研究建立了CAV的PCR检测方法。试验表明:该PCR不仅具有良好的CAV特异性,且检测灵敏度达3.98个TCID50/反应。用该方法监测9份随机抽取的商品禽用活疫苗发现,其中2份活疫苗呈PCR强阳性。以上结果表明,本研究建立的鸡传染性贫血病毒PCR检测方法具有特异、敏感等特点,能用于禽用活疫苗中CAV污染的快速监测。

关键词：鸡传染性贫血病毒 PCR 疫苗监测

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致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌的分离与16SrDNA的鉴定

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中国家禽 2011年第14期33卷 29-31,35页

作者：钱琨张永志金文杰邵红霞秦爱建扬州大学兽医学院江苏省动物预防医学重点实验室禽类预防医学省部共建教育部重点实验室江苏扬州225009

从鹅卵黄性腹膜炎临床病例中采集样品,分离病原进行一系列生化鉴定,共分离得到7株致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌,编号为E0238、E0239、E0240、E0453、E0454、E0241、E0245。O血清型鉴定分属于O2、O21、O37、O1、O24、O24、O148。利用16SrDN... 详细信息

从鹅卵黄性腹膜炎临床病例中采集样品,分离病原进行一系列生化鉴定,共分离得到7株致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌,编号为E0238、E0239、E0240、E0453、E0454、E0241、E0245。O血清型鉴定分属于O2、O21、O37、O1、O24、O24、O148。利用16SrDNA扩增试剂盒对随机选取的3株细菌进行PCR扩增,并将PCR产物序列与GenBank中的***16SrDNA进行序列比对,结果显示分离细菌与大肠杆菌的同源性达99%以上。

关键词：鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌 16SrDNA 分离鉴定

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巨噬细胞特异性真核表达载体的构建与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第10期28卷 1067-1069页

作者：宋红芹尹莉姜翠翠张鑫宇夏晓莉孙怀昌扬州大学兽医学院禽类预防医学省部共建教育部重点实验室江苏扬州225009

目的:克隆人清道夫受体A(SR-A)启动子,构建巨噬细胞特异性的真核表达载体。方法:从人外周血中提取基因组DNA,采用PCR技术分别扩增人SR-A的启动子及第一内含子和增强子序列,并插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pcDNA-GFP中,... 详细信息

目的:克隆人清道夫受体A(SR-A)启动子,构建巨噬细胞特异性的真核表达载体。方法:从人外周血中提取基因组DNA,采用PCR技术分别扩增人SR-A的启动子及第一内含子和增强子序列,并插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pcDNA-GFP中,构建巨噬细胞特异性表达载体pSRA-GFP。将pSRA-GFP转染巨噬细胞和非巨噬细胞,通过荧光显微镜观察和流式细胞术比较GFP在不同细胞中的表达水平。结果:成功克隆SR-A启动子,其在巨噬细胞RAW264.7中的表达活性显著高于NRK、LLC、Hepa1-6等非巨噬细胞株(P<0.05)。结论:构建的表达载体pSRA-GFP具有良好的组织细胞特异性,可用于巨噬细胞特异性miRNA表达载体的构建。

关键词：人SR-A启动子巨噬细胞特异性表达载体构建

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2013年苏皖地区鹅细小病毒的分离鉴定及其VP3基因序列分析

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中国兽医学报 2014年第12期34卷 1916-1921页

作者：邵红霞吕亚楠叶建强金文杰钱琨秦爱建扬州大学兽医学院/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心/江苏省动物预防医学重点实验室/禽类预防医学教育部重点实验室江苏扬州225009

鹅细小病毒(GPV)主要引起雏鹅和雏番鸭的高死亡率。本研究对2013年采集的苏皖地区疑似GPV感染的病鹅组织,通过鹅胚病毒分离以及PCR扩增,共分离鉴定出11株GPV病毒。这11株GPV病毒的鹅胚致死时间为43~159h。与NCBI中检索到的21个VP3进行... 详细信息

鹅细小病毒(GPV)主要引起雏鹅和雏番鸭的高死亡率。本研究对2013年采集的苏皖地区疑似GPV感染的病鹅组织,通过鹅胚病毒分离以及PCR扩增,共分离鉴定出11株GPV病毒。这11株GPV病毒的鹅胚致死时间为43~159h。与NCBI中检索到的21个VP3进行的序列分析发现,这些GPV的VP3氨基酸同源性为97.2%~100%。进化树分析表明,新分离的GPV VP3与分离于1982年的台湾GPV毒株82-0308最接近。与其他分离株VP3比较,这11株中有3株VP3中存在N35D、V261L、Y293H共突变现象。这些苏皖地区GPV毒株的分离、鉴定以及序列特征,对进一步探究苏皖地区GPV病毒的分子演化特征以及流行病学提供了材料。

关键词：鹅细小病毒分离与鉴定 PCR VP3 序列分析

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新型环形病毒AGV2的VP3基因的克隆表达及多抗制备

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中国兽医科学 2016年第10期46卷 1264-1269页

作者：施洋洋田晓彦马靖雯韦芊含邵红霞秦爱建叶建强禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

新型环形病毒AGV2最早于2011年报道。为建立AGV2血清学诊断方法,并探究其VP 3基因功能,本研究对AGV2的VP3基因进行了克隆、表达及多抗制备。通过将AGV2 VP3基因克隆进pGEX-6p-1原核表达载体,获得了可溶性GST-VP3融合表达产物,并利用纯化... 详细信息

新型环形病毒AGV2最早于2011年报道。为建立AGV2血清学诊断方法,并探究其VP 3基因功能,本研究对AGV2的VP3基因进行了克隆、表达及多抗制备。通过将AGV2 VP3基因克隆进pGEX-6p-1原核表达载体,获得了可溶性GST-VP3融合表达产物,并利用纯化的GST-VP3蛋白制备了小鼠抗GST-VP3多克隆抗体。同时构建获得了pcDNA3.1-VP3以及EGFP-VP3两个AGV2 VP 3基因真核表达载体。间接免疫荧光试验以及EGFP观察发现,AGV2的VP3蛋白及其EGFP融合蛋白EGFP-VP3在HCT116肿瘤细胞中的表达集中于细胞核,且呈散在点状分布,类似凋亡小体。这些AGV2 VP3表达载体的构建,表达产物、小鼠多克隆抗体的获得及其在肿瘤细胞中的表达分布,为进一步研制AGV2血清学诊断方法提供了材料,为深入探究AGV2 VP3的生物学功能打下了基础。

关键词： AGV2 VP3基因表达多克隆抗体

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