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饲料研究 2024年第14期47卷 128-133页

作者：张寒蒋永嘉刘为王志强肖霞扬州大学兽医学院兽医药理毒理教研室江苏扬州225009

试验为建立猪小肠内容物中苯甲酸及其代谢物马尿酸的高效液相色谱(HPLC)测定方法,采用乙酸乙酯为提取剂,亚铁氰化钾-乙酸锌为蛋白沉淀剂,提取样品中的苯甲酸,流动相为甲醇∶0.02%磷酸水;水、亚铁氰化钾-乙酸锌共同提取样品中的马尿酸,... 详细信息

试验为建立猪小肠内容物中苯甲酸及其代谢物马尿酸的高效液相色谱(HPLC)测定方法,采用乙酸乙酯为提取剂,亚铁氰化钾-乙酸锌为蛋白沉淀剂,提取样品中的苯甲酸,流动相为甲醇∶0.02%磷酸水;水、亚铁氰化钾-乙酸锌共同提取样品中的马尿酸,流动相为甲醇∶20 mmol/L乙酸铵溶液,紫外检测波长230 nm。结果显示:在猪小肠内容物中苯甲酸添加浓度为0.10~10.00μg/g内线性关系良好(R^(2)=0.9994);检测限为0.05μg/g,定量限为0.10μg/g;添加浓度在0.10、0.50、1.00、5.00、10.00μg/g时,回收率为(101.62±4.49)%,批内和批间变异系数分别低于4.80%和9.96%。猪小肠内容物中马尿酸添加浓度在0.30~10.00μg/g内线性关系良好(R^(2)=1.0000);检测限和定量限分别为0.10μg/g和0.30μg/g;马尿酸添加浓度在0.50、1.00、5.00、20.00μg/g时,回收率为(90.3±4.00)%,批内和批间变异系数分别低于5.93%和5.26%。研究表明,此方法苯甲酸及马尿酸预处理方法简单省时,无须固相萃取及使用有毒有害溶剂,节约成本,为猪小肠内容物中苯甲酸及马尿酸的检测提供参考。

关键词：猪苯甲酸马尿酸 HPLC 小肠内容物

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马度米星铵对成肌细胞转录组和超微结构的影响

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中国兽药杂志 2024年第6期58卷 40-46页

作者：陈新刘畅张雨梅扬州大学兽医学院兽医药理与毒理学实验室江苏扬州225009

探究马度米星铵对成肌细胞基因表达和超微结构的影响。马度米星铵处理C2C12细胞后,于细胞实时分析仪中记录细胞生长情况;利用Illumina HiSeq平台进行转录组测序,筛选差异表达基因并进行基因本体富集分析;显微镜下观察细胞空泡情况并拍照... 详细信息

探究马度米星铵对成肌细胞基因表达和超微结构的影响。马度米星铵处理C2C12细胞后,于细胞实时分析仪中记录细胞生长情况;利用Illumina HiSeq平台进行转录组测序,筛选差异表达基因并进行基因本体富集分析;显微镜下观察细胞空泡情况并拍照;透射电镜下观察拍照细胞超微结构。结果表明,马度米星铵抑制C2C12细胞生长,呈浓度和时间相关性;1μM马度米星铵处理细胞8 h后,差异表达基因共2450个,其中下调基因为1411个,上调基因1039个;基因本体分析发现,差异表达基因显著富集到空泡、DNA修复、转移酶活性正调控等;细胞内空泡显著增加;1μM马度米星铵处理细胞24 h后,细胞器明显肿胀、线粒体嵴结构髓样变、粗面内质网表面附着核糖体脱颗粒。由此可知,马度米星铵体外可诱导C2C12细胞空泡化,破坏细胞器结构,抑制细胞生长,从而导致其骨骼肌成肌细胞毒性作用,干预细胞空泡化是预防和治疗马度米星铵中毒的重要途径。

关键词：马度米星铵转录组空泡超微结构成肌细胞

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动物园大肠杆菌中mcr-1和blaNDM基因的流行特征及传播机制

动物园大肠杆菌中mcr-1和blaNDM基因的流行特征及传播机制

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：高艳云李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

目的耐药基因mcr-1、bla可介导粘菌素和碳青霉烯耐药,本研究主要分析了扬州某动物园大肠杆菌中mcr-1和bla耐药基因的流行情况及传播机制。材料与方法本研究于2022年9月从江苏省扬州市某动物园采集188份样品,其中包括动物（虎、豹、狼等...

目的耐药基因mcr-1、bla可介导粘菌素和碳青霉烯耐药,本研究主要分析了扬州某动物园大肠杆菌中mcr-1和bla耐药基因的流行情况及传播机制。材料与方法本研究于2022年9月从江苏省扬州市某动物园采集188份样品,其中包括动物（虎、豹、狼等）粪便及动物园环境样品,分别用含1μg/mL粘菌素的LB培养基和含2μg/mL美罗培南的麦康凯培养基筛选耐药菌;耐药菌分离纯化后通过MALDI-TOF MS鉴定细菌种属,并采用PCR技术检测mcr-1和bla基因

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鸭疫里默氏杆菌诱导突变株中tet(X)拷贝数异质性及调控替加环素耐药机制研究

鸭疫里默氏杆菌诱导突变株中tet(X)拷贝数异质性及调控替加环素耐...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：王巧俊蒋永嘉桑雯菁王志强李瑞超扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

引言/目的动物源黄杆菌科中的鸭疫里默氏杆菌是替加环素耐药基因tet(X)的天然储库和潜在来源,并且其染色体上可携带多个拷贝的tet(X)。但携带tet(X)的鸭疫里默氏杆菌对替加环素的耐药表型较为复杂多样,部分菌株表现为敏感或低水平耐药...

引言/目的动物源黄杆菌科中的鸭疫里默氏杆菌是替加环素耐药基因tet(X)的天然储库和潜在来源,并且其染色体上可携带多个拷贝的tet(X)。但携带tet(X)的鸭疫里默氏杆菌对替加环素的耐药表型较为复杂多样,部分菌株表现为敏感或低水平耐药。因此,本研究通过体外诱导鸭疫里默氏杆菌替加环素耐药株的形成,并构建鸭疫里默氏杆菌tet(X)基因的缺失株与回复株,探究tet(X)对鸭疫里默氏杆菌替加环素耐药性的调控作用。

关键词：

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同时携带mcr-8、blaNDM-1以及tmexCD1-toprJ1的肺炎克雷伯菌株特征分析

同时携带mcr-8、blaNDM-1以及tmexCD1-toprJ1的肺炎克雷伯菌株特...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：杨彭斌高艳云李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

目的肺炎克雷伯菌,是一种革兰氏阴性杆菌,是重要的人畜共患病原。肺炎克雷伯菌的耐药机制主要包括产生耐药酶、形成生物被膜、外膜孔蛋白突变、外排泵等,耐药基因的水平传播是多重耐药菌株临床加剧的重要原因。本研究拟对禽养殖环境中...

目的肺炎克雷伯菌,是一种革兰氏阴性杆菌,是重要的人畜共患病原。肺炎克雷伯菌的耐药机制主要包括产生耐药酶、形成生物被膜、外膜孔蛋白突变、外排泵等,耐药基因的水平传播是多重耐药菌株临床加剧的重要原因。本研究拟对禽养殖环境中的耐药肺炎克雷伯菌流行以及基因组特征进行分析。

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粪肥中耐药基因在生食果蔬生产环境中的流行特点与风险评估

粪肥中耐药基因在生食果蔬生产环境中的流行特点与风险评估

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：孙新然彭凯李岩李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

目的基于宏基因组学技术研究生食果蔬生产链中微生物群落、耐药基因及核心和辅助基因的组成,从而更加全面真实地反映畜禽养殖产生的粪肥中耐药基因对生食果蔬生产链的影响。材料与方法本研究于2022年10月在青岛、武汉和西安的果蔬生产...

目的基于宏基因组学技术研究生食果蔬生产链中微生物群落、耐药基因及核心和辅助基因的组成,从而更加全面真实地反映畜禽养殖产生的粪肥中耐药基因对生食果蔬生产链的影响。材料与方法本研究于2022年10月在青岛、武汉和西安的果蔬生产基地采集了283份样品,包括土壤、有机肥、果蔬和灌溉水样品。通过在含有替加环素(2μg/mL)、美罗培南(0.5μg/mL)和多粘菌素(1μg/mL)的培养基上进行耐药菌株筛选,并进行菌属鉴定。

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人类、动物和环境中tet(X)阳性大肠杆菌的全球分布和基因组特征

人类、动物和环境中tet(X)阳性大肠杆菌的全球分布和基因组特征

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：李岩李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

目的替加环素被认为是治疗多重耐药革兰氏阴性菌引起感染的最后一道防线。最近,在肠杆菌和不动杆菌中发现了质粒介导的替加环素耐药基因tet（X3）和tet（X4）,给人类健康和食品安全带来严重威胁。然而,关于tet（X）阳性大肠杆菌全球分...

目的替加环素被认为是治疗多重耐药革兰氏阴性菌引起感染的最后一道防线。最近,在肠杆菌和不动杆菌中发现了质粒介导的替加环素耐药基因tet（X3）和tet（X4）,给人类健康和食品安全带来严重威胁。然而,关于tet（X）阳性大肠杆菌全球分布的系统研究仍然很少。材料与方法于2023年2月8日使用搜索条件"AMRenotypes:tet（X）"和"species_taxid:562"从国家生物技术信息中心（NCBI）的公共信息库中检索大肠杆菌。利用生物信息学软件分析tet（X）阳性大肠杆菌分离株中的耐药基因、毒力基因、插入序列以及质粒复制子。

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抗蠕虫药物碘醚柳胺逆转肺炎克雷伯菌中染色体介导的黏菌素耐药

抗蠕虫药物碘醚柳胺逆转肺炎克雷伯菌中染色体介导的黏菌素耐药

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：韩荣嘉邢家宝孙华润郭泽宇易开放胡功政翟亚军 Tony Velkov 吴华河南农业大学动物医学院药理毒理学实验室华南农业大学兽医学院广东省人畜共患病防治重点实验室河南科技学院动物科学与兽医学院华南农业大学兽医学院兽药残留国家参考实验室莫纳什大学生物医学发现研究所微生物学系

引言耐多药（MDR）肺炎克雷伯菌,包括耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）在医院和社区中的加速出现和传播,促进了黏菌素（多黏菌素E）的重新使用。碘醚柳胺是一种抗蠕虫兽药,属于水杨酰苯胺家族,通常用于对抗反刍动物的吸虫感染。两份初...

引言耐多药（MDR）肺炎克雷伯菌,包括耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）在医院和社区中的加速出现和传播,促进了黏菌素（多黏菌素E）的重新使用。碘醚柳胺是一种抗蠕虫兽药,属于水杨酰苯胺家族,通常用于对抗反刍动物的吸虫感染。两份初步报告强调了碘醚柳胺和黏菌素联合治疗肺炎克雷伯菌的协同作用。在本研究中,我们采用转录组学方法,试图了解碘醚柳胺与黏菌素联合的潜在协同机制,以及针对从人和猪源分离的非质粒介导的黏菌素耐药肺炎克雷伯菌菌株的黏菌素抗性挽救分子机制。

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多耐药P1-like噬菌体质粒的遗传特征及转导blaCTX-M-55传播的形成机制

多耐药P1-like噬菌体质粒的遗传特征及转导blaCTX-M-55传播的形成...

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中国毒理学会第九次全国青年科技大会暨第二届生物技术药物毒理与安全评价委员会学术会议

作者：王勉之蒋黎张俊炫王志强孙永学扬州大学兽医学院、江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心华南农业大学兽医学院、兽药安全性评价(环境评价)国家实验室

目的 P1-like噬菌体质粒（phage-plasmids,PPs）作为一种分子生物学工具已被广泛应用,但其作为一种耐药性传播载体的作用尚不完全清楚。P1噬菌体是一种温和噬菌体,通常以低拷贝数质粒的形式存在并以独立于感染复数的溶原方式自主复制,... 详细信息

目的 P1-like噬菌体质粒（phage-plasmids,PPs）作为一种分子生物学工具已被广泛应用,但其作为一种耐药性传播载体的作用尚不完全清楚。P1噬菌体是一种温和噬菌体,通常以低拷贝数质粒的形式存在并以独立于感染复数的溶原方式自主复制,确保了即使在低浓度的P1噬菌体下也具有稳定的溶原能力,并可能有助于促进耐药基因的传播。同时,有研究显示P1-like PPs在所有PPs具有较高的流行性,且转导耐药性水平传播。材料与方法本研究聚焦P1-like PPs,首先通过比较基因组学方法,从NCBI中下载所有潜在P1-like PPs并分析其遗传组成和上下游基因环境,明确该类PPs携带耐药基因的结构遗传特征;随后进行细菌分离、药物敏感性检测、转导试验、滴斑试验、透射电镜验证,完成对目标菌株的鉴定和表征,分析其裂解能力和溶源转导能力。结果结果显示,P1-like PPs序列相似且保守,但存在八个高度可变的区域,均为外源基因整合区,包活耐药基因;进一步对复制子进行验证发现IncY和p0111仅在P1-like PP群落中出现且变异度极低,可成为未来筛选P1-like PPs的重要补充,进一步对P1-like PPs通过比较基因组研究结果显示,该类元件可以携带多样化的耐药基因,包括替加环素耐药基因tet（X4）、黏菌素耐药基因mcr-1、超广谱β-内酰胺酶耐药基因ESBLs及由传统I型整合子介导的多样化耐药基因,更重要的是,P1-like PPs可以通过IS26元件和其他不同复制子型的质粒通过共整合进行接合传播,暗示该类元件的临床威胁性。进一步,我们成功分离到一株鸭源大肠杆菌且携带ESBLs基因bla阳性P1-like PP,命名为JL22。JL22和P1-like PPs类元件极其相似且保守,同样拥有八个高度可变的区域,对JL22的鉴定和表征,Wa由插入序列IS1380介导。作为P1-like PPs家族一员,为了明确载有bla的JL22能否通过裂解-溶原途径进行水平传播,我们从三个方面进行验证,（ⅰ）是否能够诱导JL22噬菌体组装,（ⅱ） JL22噬菌体是否具有裂解能力,和（ⅲ）是否能够转移bla,结果显示,丝裂霉素可以诱导JL22组装且透射电镜可以观察到完整的P1结构,但是由于目前没有筛选到受体菌,能否水平转导传播需要进一步确认。结论结果表明,P1-like PPs作为一类重要的可移动基因元件,其能够携带多样化的耐药基因并促进其水平传播,更重要的是,该类元件可以通过裂解-转导方式进一步提高其水平传播的能力,这种独特模式可能表明其对耐药性的稳定贡献,应提高重视。

关键词：耐药性噬菌体样质粒 ESBLs 噬菌体

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猪食欲肽受体2激动剂细胞筛选模型的建立及对天然中药提取物受体激动剂的筛选

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中国畜牧兽医 2020年第2期47卷 407-415页

作者：崔子鹤张海洁蔺帅姜军娜肖霞刘源王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室扬州225009 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

本研究旨在构建猪食欲肽受体2(pOX2R)的真核表达载体,探究其对天然中药提取物的药理学活性。将成功构建的pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R和报告质粒PGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]分别瞬时转染HEK293T细胞,利用萤火虫荧光素酶报告基因检测法测定阳性... 详细信息

本研究旨在构建猪食欲肽受体2(pOX2R)的真核表达载体,探究其对天然中药提取物的药理学活性。将成功构建的pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R和报告质粒PGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]分别瞬时转染HEK293T细胞,利用萤火虫荧光素酶报告基因检测法测定阳性细胞株在不同浓度激动剂Orexin A和Orexin B以及颉颃剂TCS作用下胞内cAMP水平。将目的质粒与报告质粒稳定共转染CHO-K1细胞,利用G418和潮霉素B进行抗性筛选,获得6株阳性细胞株和5株阴性细胞株。对具有促进食欲作用的18种天然中药材的36种提取物进行筛选,并用瞬时共转染了pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R和PGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]的HEK293T细胞作为研究对象,对阳性提取物进行剂量效应分析。结果显示,Orexin A与Orexin B单独作用细胞时,可以使萤火虫荧光素酶的活性提高,呈明显的剂量效应关系,当与颉颃剂TCS联合作用时,TCS可以颉颃激动剂对受体的激活作用。通过优化药物刺激时间和二甲亚砜(DMSO)用量后,建立了以pOX2R为靶点的稳定、可靠的激动剂细胞筛选模型。经过初筛和复筛,得到了甘草水提物、白莲子和山药醇提物3种可以使阳性细胞荧光素酶表达量升高的提取物。提取物在一定浓度范围内可以刺激胞内荧光素酶的表达,呈剂量效应关系。以上结果为筛选出可以提高猪生产效率的先导化合物及相关药物研究提供参考依据。

关键词：猪食欲肽受体2(pOX2R) 萤火虫荧光素酶天然中药材筛选

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