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中国动物传染病学报 2020年第3期28卷 73-79页

作者：蒋永嘉肖霞蓝玮璇江礼捷谢恺舟卜仕金王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理教研室扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 扬州大学动物科学与技术学院扬州225009

为建立鸡可食性组织(皮脂、肌肉、肝脏、肾脏)中尼卡巴嗪的高效液相色谱(HPLC)检测方法,本研究采用乙腈提取组织样品中尼卡巴嗪,正己烷除脂;流动相为乙腈:超纯水(55:45,v/v);紫外检测波长347 nm.结果显示:各组织中尼卡巴嗪浓度在50~1000... 详细信息

为建立鸡可食性组织(皮脂、肌肉、肝脏、肾脏)中尼卡巴嗪的高效液相色谱(HPLC)检测方法,本研究采用乙腈提取组织样品中尼卡巴嗪,正己烷除脂;流动相为乙腈:超纯水(55:45,v/v);紫外检测波长347 nm.结果显示:各组织中尼卡巴嗪浓度在50~1000μg/kg范围内呈良好线性关系(R^2≥0.9992);各组织中检测限和定量限均分别为10μg/kg和50μg/kg;组织中尼卡巴嗪添加浓度为50、200、400μg/kg时,皮脂中药物平均回收率为(87.18±3.85)%,肌肉中药物平均回收率为(93.33±3.76)%,肝脏中药物平均回收率为(80.77±3.63)%,肾脏中药物平均回收率为(85.27±6.58)%;日内和日间变异系数分别小于4.20%和4.30%.该方法前处理简单省时,无需使用固相萃取,节约了试验成本与时间,为尼卡巴嗪的检测提供了方法学基础.

关键词：鸡尼卡巴嗪 HPLC 可食性组织

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氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌在鸭中的体内药动药效同步模型研究

氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌在鸭中的体内药动药效同步模型研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：蒋永嘉肖霞江礼捷李聪聪卞玲张惠茹王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

[目的]本研究旨在建立氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌在鸭中的体内药动药效（PK/PD）同步模型,确定最佳PK/PD参数值,为临床合理使用氟苯尼考,提高疗效,减缓耐药性的产生或富集提供理论支持。[方法]测定氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌临床分离株r-... 详细信息

[目的]本研究旨在建立氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌在鸭中的体内药动药效（PK/PD）同步模型,确定最佳PK/PD参数值,为临床合理使用氟苯尼考,提高疗效,减缓耐药性的产生或富集提供理论支持。[方法]测定氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌临床分离株r-3株的最小抑菌浓度（MIC）,最小杀菌浓度（MBC）,预防突变浓度（MPC）。以7日龄雏鸭为对象,建立鸭疫里默氏杆菌感染模型。对感染鸭口服不同剂量氟苯尼考（10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg）,高效液相色谱（HPLC）法测定雏鸭血清中的氟苯尼考浓度,研究氟苯尼考在感染鸭中的药动学特征。60只感染雏鸭,随机选取6只测定血液、肺脏和肝脏中的载菌量。其余54只随机分为9组,分别口服60、50、40、35、30、20、15、10、0mg/kg氟苯尼考,一天给药2次,连续3天。最后一次给药12h后处死雏鸭,测定血液、肺脏和肝脏中的载菌量。利用Inhibitory Effect Imax模型拟合PK/PD参数与抗菌效果之间的相关性。[结果]氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌r-3株的MIC、MBC、MPC值分别为0.5μg/mL、1μg/mL、1.6μg/mL。通过腹腔注射10～8cfu/mL的菌液感染雏鸭血液、肝脏和肝脏载菌量分别稳定在105cfu/mL、10～7cfu/g和10～7cfu/g,死亡率为20%。药动学结果显示,在10～60mg/kg范围内,氟苯尼考的C,AUC与给药剂量有良好的线性关系,相关系数分别大于0.9884和0.9988。将PK/PD参数AUC/MIC分别与血液、脏器中细菌减少量用Inhibitory Effect Imax模型进行拟合,拟合相关系数良好,R为0.9483、0.9327、0.9341 （血、肝、肺）,说明AUC/MIC是最佳PK/PD相关参数。体内药效学研究中,氟苯尼考给药后,细菌减少的log值随着药物浓度的增加而呈现梯度的变化。以不同的器官作为靶组织,氟苯尼考PK/PD参数AUC/MIC与体内药物抗菌效应拟合良好（R分别为0.9483、0.9327、0.9341）。在血液中,当AUC/MIC的值分别为14.00、34.29和53.75时,氟苯尼考在体内呈现抑菌、杀菌和清除作用,即鸭疫里默氏杆菌载菌量分别下降0、3和4 Logcfu/mL;在肝脏中,当AUC/MIC的值分别为10.54、35.07和49.76时,氟苯尼考在体内呈现抑菌、杀菌和清除作用;在肺脏中,当AUC/MIC的值分别为7.64、26.09和37.67时,氟苯尼考在体内呈现抑菌、杀菌和清除作用。[结论]氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌在鸭中的体内药动药效（PK/PD）同步模型的最佳PK/PD参数值为AUC/MIC,当药物作用于血液和肝脏时,达到抑菌、杀菌和清除作用的PK/PD参数仅较小差异,而药物作用于肝脏时,则差异显著,这可能与靶器官的特异性有关。

关键词：氟苯尼考鸭疫里默氏杆菌体内药动药效同步模型雏鸭

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鹅源产NDM-5大肠杆菌的检测与分子特征研究

鹅源产NDM-5大肠杆菌的检测与分子特征研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：刘子奕李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

[目的]本研究2018年从扬州市某鹅场的种鹅场和育雏场共采集样品117份,包括鹅肛拭子、鹅场地表粪便、鹅场饲料、鹅场水样以及周边土壤样品,从中分离耐碳青霉烯的大肠杆菌并进一步对其菌株特征以及耐药分子特征进行研究。[方法]将采集的... 详细信息

[目的]本研究2018年从扬州市某鹅场的种鹅场和育雏场共采集样品117份,包括鹅肛拭子、鹅场地表粪便、鹅场饲料、鹅场水样以及周边土壤样品,从中分离耐碳青霉烯的大肠杆菌并进一步对其菌株特征以及耐药分子特征进行研究。[方法]将采集的样品经过前增菌处理后,用含2mg/L美罗培南的麦康凯平板分离耐碳青霉烯的肠杆菌。随后,采用16s rDNA以及测序进一步鉴定菌属,并同时用PCR检测bla基因,采用微量肉汤稀释法测定菌株对9种抗菌药物的最小抑菌浓度,通过接合试验和S1-PFGE分析携带bla基因质粒的可转移性以及质粒分子大小。最后,采用Illumina测序技术对所有bla阳性大肠杆菌进行全基因测序,并根据二代测序结果挑取不同克隆群的菌株进一步进行Oxford Nanopore MinION三代测序,从而对菌株的遗传特征进行深入探究。[结果]117份样品中,成功分离得到12株bla阳性大肠杆菌,其中种鹅场分离得到11株,育雏场分离获得1株。MIC结果显示,12株菌对美罗培南、链霉素、氨曲南、阿莫西林、头孢喹肟、氟苯尼考以及多西环素表现为耐药,但大多数菌对恩诺沙星以及多黏菌素仍表现为敏感。通过接合转移试验成功得到12株菌对应的接合子,S1-PFGE结果表明12株菌中～46kb大小的质粒可以成功从供体菌转移到受体菌内。最后,全基因测序结果揭示了在种鹅场分离到的11株bla阳性大肠杆菌中有10株属于ST48型,SNP分析发现它们具有高度的亲缘性,说明种鹅场存在bla阳性大肠杆菌的克隆传播,同时在该场中还分离到一株属于ST8809的新ST型bla阳性大肠杆菌。此外,育雏场中分离的bla阳性大肠杆菌属于ST3076型,表明育雏场与种鹅场并不存在bla阳性大肠杆菌的克隆传播。进一步分析发现这些菌中bla的基因环境为典型的ISAba125-IS5-bla-ble-trpF-dsbC-IS26结构,而且均定位在IncX3型可接合质粒上,这与国际上流行的bla的基因环境一致。[结论]本研究首次从鹅源分离到bla阳性大肠杆菌。研究发现bla定位在可接合转移的IncX3型质粒上,表明该种类型的质粒具有在鹅场内引起bla水平传播的潜力,同时还发现在种鹅场内存在以ST48型bla阳性大肠杆菌为优势株的克隆传播现象,提示应该加强对水禽系统的耐药性监测从而遏制多重耐药菌的传播。

关键词：鹅源 blaNDM-5 大肠杆菌 MinION测序

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无药物压力下细菌中mcr基因的进化研究

无药物压力下细菌中mcr基因的进化研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：李岩彭凯李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

[目的]粘菌素耐药基因mcr-1及其各种变体的广泛流行,威胁着公共卫生健康。尽管我国目前已禁止该类药物用作饲料添加剂,但是mcr基因在无药物压力下的进化趋势还有待进一步研究。本研究旨在通过在不含粘菌素药物的条件下对同时携带mcr-1和... 详细信息

[目的]粘菌素耐药基因mcr-1及其各种变体的广泛流行,威胁着公共卫生健康。尽管我国目前已禁止该类药物用作饲料添加剂,但是mcr基因在无药物压力下的进化趋势还有待进一步研究。本研究旨在通过在不含粘菌素药物的条件下对同时携带mcr-1和mcr-3.5的菌株CP55进行传代培养,并通过S1-PFGE和三代纳米孔测序技术对其遗传稳定性进行研究,揭示mcr基因的进化与丢失机制,为减少和阻止因在动物和人类中过度使用抗生素造成mcr基因的广泛传播提供了新的思路。[方法]选取一个有代表性的养猪场,该养猪场常用多种抗生素作为预防和治疗疾病的抗生素。PCR筛选mcr基因阳性分离株,16s测序鉴定阳性菌株的物种信息,Illumia和MinION测序获得全基因组序列。对阳性菌株CP55用不含药的肉汤传28代(12小时为一代),并对第7代、第14代、第21代和第28代的菌株进行单菌分离、保种,PCR分析mcr基因丢失情况,S1-PFGE分析质粒图谱,运用三代纳米孔测序技术进行全质粒测序,并结合生物信息学方法分析mcr基因结构的变异情况。[结果]菌株CP55为弗格森埃希氏菌,并且同时携带有mcr-1和mcr-3.19基因。S1-PFGE结果显示传代过程中发生了mcr基因丢失,其后代都丢失了同一个质粒。生物信息学分析发现CP55属于ST971型,编码一条染色体和四条大于10kb的质粒。基因mcr-1位于含有mcr-1-pap2的典型的IncX4型质粒pCP55-IncX4中,两端无ISApl1插入序列,基因mcr-3.5位于含有IS4321R-TnAs2-mcr-3.5-dgkA-IS15的IncFⅡ型质粒pCP55-IncFⅡ中,而传代过程中丢失的质粒为携带mcr-3.5基因的IncFⅡ型质粒,mcr-1基因没有发现丢失。[结论]在无药物压力下,部分mcr基因可以通过质粒丢失发生缺失,具体的机制有待进一步的深入研究。减少人类和动物中粘菌素的过度使用,对消除mcr基因提供了可行的思路,其中涉及的进化机制值得我们进一步研究。

关键词：猪场 mcr基因稳定性纳米孔测序

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利用三代纳米孔测序技术对江苏某鹅厂粪便中耐药基因丰度及流行情况的研究

利用三代纳米孔测序技术对江苏某鹅厂粪便中耐药基因丰度及流行情...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：彭凯李岩李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

[目的]结合第三代牛津纳米孔测序技术与宏基因组技术,探究鹅厂环境中耐药基因的整体分布及流行情况。[方法]2019年4月从江苏省某商品化鹅厂采集粪样3份、肛拭子10份,分别用肉汤富集增菌培养,增菌后的菌液在含有复方新诺明（1ug/ml）、... 详细信息

[目的]结合第三代牛津纳米孔测序技术与宏基因组技术,探究鹅厂环境中耐药基因的整体分布及流行情况。[方法]2019年4月从江苏省某商品化鹅厂采集粪样3份、肛拭子10份,分别用肉汤富集增菌培养,增菌后的菌液在含有复方新诺明（1ug/ml）、头孢噻呋钠（8ug/ml）的LB药板筛选耐药菌,粪便样品中的平板耐药菌直接用含药肉汤富集培养,肛拭子样品中耐药菌进行单菌分离并分别增菌,增菌后混合菌液,两类样品分别进行质粒中提;对提取的质粒进行三代MinION单分子测序,利用生物信息学方法分析质粒序列中耐药基因和可移动元件的流行分布情况。[结果]对粪便和肛拭子样品进行耐药质粒测序,分别获得了198MB和523MB的原始reads,reads数目分别为69462条和132425条,0.62%和6.75%的reads含有至少一个耐药基因;根据耐药基因序列的测序深度,其中粪便样品中丰度较高的耐药基因有aadA、tet（A）、aph6-Ⅰ、dfrA12、aac（3）-Ⅱ、aph（3"）-Ⅰ、sul2、sul1、cmlA、rmtB、bla,肛拭子样品中丰度较高的耐药基因有bla、bla、aph（3"）-Ⅱa、floR、tet（A）、tetR;粪便样品中耐药基因主要介导氨基糖苷类、磺胺类、氯霉素类以及四环素类药物耐药,肛拭子样品中耐药基因主要介导β-内酰胺类、氯霉素类以及氨基糖苷类药物耐药。粪便样品中,含有转座酶、重组酶、整合酶基因的reads占总reads的2.64%,在肛拭子样品中,这个比例达到42.43%。[结论]该鹅厂粪便样品与肛拭子样品中耐药基因的分布存在明显差异性,且肛拭子样品中耐药基因检出率大于5%,其中粪便样品中丰度最高的为氨基糖苷类药物耐药基因,肛拭子样品中的为β-内酰胺类药物耐药基因,且在两个样品中都检出了丰富的可介导基因转移的遗传元件,这些介导基因转移的遗传元件与耐药基因共存,极大的增加了耐药基因的传播风险,并有可能给人类健康安全带来巨大威胁。

关键词：耐药基因 MinION测序宏基因组丰度

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人雌、雄激素受体基因酵母表达载体的构建及其在性激素类药物残留检测中的应用

人雌、雄激素受体基因酵母表达载体的构建及其在性激素类药物残留...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：张海洁崔子鹤肖霞李瑞超刘源王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

[目的]:本研究旨在利用配体受体结合活性构建一种可以用于多种具有雌、雄激素样活性物质残留的检测方法。[方法]:以同源重组的方式将人雌激素或雄激素受体基因序列和在受体响应元件调解下的半乳糖苷酶(LacZ)基因整合到同一载体质粒(ER-5... 详细信息

[目的]:本研究旨在利用配体受体结合活性构建一种可以用于多种具有雌、雄激素样活性物质残留的检测方法。[方法]:以同源重组的方式将人雌激素或雄激素受体基因序列和在受体响应元件调解下的半乳糖苷酶(LacZ)基因整合到同一载体质粒(ER-5ERE、AR-5HRE)中,利用醋酸锂转化法将该质粒转入W303-1A酵母细胞,分别构建雌激素或雄激素受体酵母表达系统;将11种不同浓度的雌激素或8种雄激素分别与重组酵母细胞共同作用,30℃培养12 h后,加入酵母细胞裂解液和底物ONPG,以验证构建成功的雌激素或雄激素受体酵母表达系统是否对各种激素具有反应活性;为了验证尿样前处理方法,将2 mL加标牛尿样品过夜酶解使结合型激素转化为游离型激素后,过经甲醇活化和超纯水平衡的C18固相萃取柱,甲醇水淋洗后用甲醇洗脱,氮吹至干,2mL甲醇复溶,以HPLC-MS检测方法进行方法学验证。[结果]:雌激素受体酵母表达系统对不同浓度的雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚、己烷雌酚、炔雌醇、马烯雌酮、马萘雌酮、双烯雌酚、戊酸雌二醇和苯甲酸雌二醇等11种雌激素类物质具有良好剂量效应关系,半数有效浓度分别为2.33μg/L、0.58μg/L、58.60μg/L、0.62μg/L、0.33μg/L、0.33μg/L、0.44μg/L、5.96μg/L、0.73μg/L、273μg/L、147μg/L;雄激素受体酵母表达系统对不同浓度的双氢睾酮、睾酮、甲基睾酮、诺龙、雄烯二酮、美雄酮、宝丹酮、康力龙等8种雄激素具有良好剂量效应关系,半数有效浓度分别为7.17μg/L、58.76μg/L、20.64μg/L、15.66μg/L、407.53μg/L、194.20μg/L、271.73μg/L、153.54μg/L。加标浓度为1μg/L、10μg/L、50μg/L的尿样回收率范围分别在78%～117%、78%～107%和70%～101%,变异系数分别为13.04%、8.11%和8.05%。[结论]:本实验分别成功构建了雌激素与雄激素受体酵母表达系统,并验证了该表达系统对性激素具有良好的药理学活性。HPLC-MS方法检测加标尿样中含性激素的浓度并计算回收率,回收率范围和变异系数良好,说明尿样样品前处理方法可行,为后续重组人雌、雄激素受体基因酵母细胞在性激素类药物残留检测中的应用奠定了基础。

关键词：雌激素受体雄激素受体酵母残留检测

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江苏省麋鹿源大肠杆菌中多粘菌素耐药基因mcr-1的流行特征和传播机制

江苏省麋鹿源大肠杆菌中多粘菌素耐药基因mcr-1的流行特征和传播...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：卢晓宇李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

[目的]对江苏省麋鹿源大肠杆菌中mcr基因的流行特征和传播机制进行研究,为临床控制其传播扩散提供理论依据。[方法]2018年9月收集来自江苏大丰麋鹿国家级自然保护区的麋鹿粪便样品94份,分离纯化后采用PCR技术和Sanger测序筛选mcr基因阳... 详细信息

[目的]对江苏省麋鹿源大肠杆菌中mcr基因的流行特征和传播机制进行研究,为临床控制其传播扩散提供理论依据。[方法]2018年9月收集来自江苏大丰麋鹿国家级自然保护区的麋鹿粪便样品94份,分离纯化后采用PCR技术和Sanger测序筛选mcr基因阳性菌,然后通过16S rRNA鉴定细菌种属;微量肉汤稀释法测定mcr阳性菌对9种抗菌药物的敏感性;为了了解所有mcr阳性菌的亲缘关系,进行了XbaI-PFGE;接下来通过接合试验和S1-PFGE对mcr基因的定位和可转移性进行分析,再以基于PCR的复制子分型方法鉴定复制子类型。[结果]在55份样品中鉴定出67株mcr-1阳性菌。MIC结果表明,67株mcr-1阳性菌对阿莫西林、头孢噻呋和氨曲南三种β-内酰胺类抗生素的耐药率高达85.07%、65.67%和58.20%,因此又对ESBLs基因进行鉴定,结果表明ESBLs基因携带率高达94.03%。XbaI-PFGE结果表明67株mcr-1阳性菌仅存在部分克隆传播现象。可转移性分析及复制子分型结果表明,65株菌中的mcr-1基因是由可转移性质粒介导,其中44株为IncI2型质粒,13株为IncHI2型质粒,8株为IncX4型质粒。S1-PFGE结果表明,菌株LD26-1和LD91-1在携带mcr-1基因的IncHI2型质粒转移过程中,与IncFIB型质粒发生了质粒重组,形成一个大质粒转移到受体菌中,其中LD91-1有三种大小不同的重组质粒类型。[结论]粘菌素耐药基因mcr-1在源于江苏麋鹿的大肠杆菌中广泛流行,IncI2型质粒是介导mcr-1流行的主要质粒;LD26-1和LD91-1在mcr-1基因转移过程中形成重组质粒,使得更多的耐药基因水平传播,从而引起更严重的耐药。结合三代单分子测序技术,影响重组质粒形成的因素及重组质粒形成的机制有待近一步的研究。

关键词：麋鹿大肠杆菌 mcr-1 IncI2型质粒重组质粒

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猪食欲肽2受体突变体真核表达载体的构建及其对cAMP信号通路的影响

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中国畜牧兽医 2018年第7期45卷 1768-1774页

作者：刘敏闵天奇张海洁谢华杰崔子鹤王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理教研室扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

试验旨在构建猪食欲肽2受体(porcine orexin 2receptor,pOX2R)突变体的真核表达载体,探究其野生型与突变体的基础药理学活性差异。以pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R野生型质粒为模板,设计特异性引物单点突变构建4种突变体:pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R... 详细信息

试验旨在构建猪食欲肽2受体(porcine orexin 2receptor,pOX2R)突变体的真核表达载体,探究其野生型与突变体的基础药理学活性差异。以pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R野生型质粒为模板,设计特异性引物单点突变构建4种突变体:pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R-P10S、pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R-P11T、pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R-V308I和pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R-T401I,将pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R野生型和4种突变体分别瞬时转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测法测定pOX2R野生型及突变体的基础活性,并检测不同浓度激动剂作用下细胞内cAMP水平,随后用内源性激动剂食欲肽A(OXA)及食欲肽B(OXB)分别对野生型及突变体进行刺激。结果显示,4个突变体构建成功,pOX2R的第10、11、308和401位氨基酸分别突变为丝氨酸、苏氨酸、异亮氨酸和缬氨酸。将pOX2R的野生型及4个突变体瞬时转染HEK293T细胞后,野生型与突变体的基础活性值无显著差异(P>0.05),表明这4个位点的氨基酸突变对其受体的基础表达信号无显著影响。与野生型受体相比,突变型受体对激动剂OXB的响应无显著差异(P>0.05),而突变体P10S、P11T和T401I对激动剂OXA的响应EC50显著降低(P<0.05),其Rmax无显著差异(P>0.05)。推测第10、11和401位点的氨基酸突变可能影响了激动剂OXA与受体的结合,降低了激动剂的激动效应。本研究结果为进一步体外研究pOX2R的功能奠定了基础。

关键词：猪食欲肽2受体(OX2R)基因突变体 cAMP

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全球食品和饲料链中生物毒素早期预警、监测和毒性评估的挑战和解决方案

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粮油食品科技 2021年第6期29卷 1-15页

作者： Rudolf Krska Eskola Mari Berthiller Franz Nielen Michel Oswald Isabelle Elliott Chris McNerney Oonagh BotanaLuis Miguel MalachováAlexandra 维也纳自然资源与生命科学大学生物分析与农业代谢组学研究所农业生物技术系奥地利图尔恩3430 贝尔法斯特女王大学生物科学学院全球食品安全研究所英国北爱尔兰贝尔法斯特BT95DL Medfiles临床实验有限公司芬兰万塔01640 瓦赫宁根大学有机化学实验室荷兰瓦赫宁根6708 PB 图卢兹大学食品毒理学研究中心法国图卢兹塞地斯F-31027 IRIS数字工程公司西班牙巴塞罗那08940 圣地亚哥德孔波斯特拉大学兽医学院药理学系西班牙卢戈27002 奥地利饲料和食品质量、安全和创新能力中心奥地利图尔恩3430

确保世界人口不断增长下的食品供应安全和保障是巨大和紧迫的需求。然而,全球农业和食品行业仍易受植物、藻类,尤其是真菌产生的生物毒素污染问题的挑战;随着全球变暖和极端天气事件频发,这些有毒代谢产物的发生愈发难以预测。为了提升... 详细信息

确保世界人口不断增长下的食品供应安全和保障是巨大和紧迫的需求。然而,全球农业和食品行业仍易受植物、藻类,尤其是真菌产生的生物毒素污染问题的挑战;随着全球变暖和极端天气事件频发,这些有毒代谢产物的发生愈发难以预测。为了提升食品和饲料链中生物毒素的预警、监测和毒性评估方法,总结在各个科学领域和方法中创新所需的多学科、多部门互补能力,具体包括使用卫星和无人机成像的大数据方法、便携式监测设备以及使用蛋白质组学和转录组学对(新兴)生物毒素进行(联合)毒性测试。

关键词：食品和饲料安全预测早期预警藻毒素真菌毒素植物毒素

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鸡黑素皮质素受体3真核表达载体及突变型的构建和表达

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中国家禽 2018年第5期40卷 24-28页

作者：谢华杰张海洁江礼捷连俊伟刘敏闵天奇王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

试验旨在构建鸡黑素皮质素受体3(c MC3R)基因的真核表达载体,并在人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察目的基因的表达情况。从新鲜鸡血液提取全基因组DNA,并以其为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因编码区。凝胶纯化回收目的基因,用限制性... 详细信息

试验旨在构建鸡黑素皮质素受体3(c MC3R)基因的真核表达载体,并在人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察目的基因的表达情况。从新鲜鸡血液提取全基因组DNA,并以其为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因编码区。凝胶纯化回收目的基因,用限制性内切酶Eco RⅠ和XbaⅠ目的基因和真核表达载体pc DNA3.1(+),并将双酶切后的目的基因定向插入表达载体中。经酶切和测序正确后加入c-myc标签。单点突变构建pc DNA3.1(+)-myc/MC3R突变型,用脂质体法将重组质粒pc DNA3.1(+)-myc/MC3R分别瞬时转染入HEK293T细胞中,流式细胞仪检测野生型和突变型的细胞表面表达和胞内总表达。结果表明,成功构建了鸡MC3R基因野生型和四个突变型(M54L、G104S、L151R和S183S)的真核表达载体,突变型与野生型在HEK293T细胞中的表面表达和胞内总表达没有显著性差异,研究结果为进一步研究c MC3R功能奠定基础。

关键词：鸡黑素皮质素受体(MC3R) 真核表达细胞表面表达

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