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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：陈新张雨梅江善祥黄世乐兽医药理与毒理实验室扬州大学兽医学院江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心兽医药理与毒理实验室南京农业大学动物医学院生物化学与分子生物学系路易斯安那州立大学健康科学中心 Feist-Weiller癌症中心路易斯安那州立大学健康科学中心

[目的]马度米星是一种兽用聚醚类离子载体抗球虫药物,但对动物和人有很强的心肌和骨骼肌毒性。本研究旨在探讨马度米星诱导骨骼肌细胞凋亡的分子机理,为防治马度米星骨骼肌毒性提供新思路和理论依据。[方法]0.05～1μg/mL马度米星处理C2... 详细信息

[目的]马度米星是一种兽用聚醚类离子载体抗球虫药物,但对动物和人有很强的心肌和骨骼肌毒性。本研究旨在探讨马度米星诱导骨骼肌细胞凋亡的分子机理,为防治马度米星骨骼肌毒性提供新思路和理论依据。[方法]0.05～1μg/mL马度米星处理C2C12和L6骨骼肌成肌细胞24或48h、或者3.5mg/kg b.w.马度米星灌胃雄性ICR小鼠7天,利用CM-HDCFDA荧光探针测定细胞内和骨骼肌组织中ROS水平,Western blot检测细胞内和组织中PP5、JNK、p-JNK、c-Jun和p-c-Jun蛋白表达,MTS法和台盼蓝染色检测细胞活性,DAPI染色检测细胞凋亡;C2C12细胞经NAC （抗氧化剂和ROS清除剂）或SP600125（JNK抑制剂）预处理1h、或者经腺病毒感染过表达PP5或表达显性失活c-Jun,0.5和1μg/mL马度米星处理24或48h,显微镜下拍照细胞,胰酶消化细胞进行计数,MTS法检测活性,DAPI染色检测凋亡,Western blot检测PP5、JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun和/或cleaved caspase 3表达量。[结果]马度米星提高细胞和组织中ROS水平,降低PP5蛋白水平,升高p-JNK和p-c-Jun蛋白水平,抑制细胞活性并诱导细胞凋亡;在C2C12细胞中,NAC和SP600125预处理、过表达PP5和表达显性失活c-Jun均可削弱马度米星诱导的细胞凋亡。[结论]马度米星诱导骨骼肌细胞产生过量的ROS,抑制PP5蛋白表达,导致JNK和c-Jun磷酸化,最终引起细胞凋亡,ROS-PP5-JNK途径介导马度米星所致骨骼肌细胞凋亡。

关键词：马度米星 ROS PP5 JNK 细胞凋亡骨骼肌

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猪β2肾上腺素能受体基因真核表达载体及突变体的构建及表达

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中国畜牧兽医 2017年第11期44卷 3130-3136页

作者：张海洁谢华杰江礼捷连俊伟刘敏闵天奇王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

试验旨在构建猪β_2肾上腺素能受体(β_2adrenergic receptor,β_2AR)基因及其突变体真核表达载体,并鉴定其在HEK293T细胞中的表达。通过猪基因组DNA克隆猪β_2AR基因,利用同源重组技术将其连接至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达... 详细信息

试验旨在构建猪β_2肾上腺素能受体(β_2adrenergic receptor,β_2AR)基因及其突变体真核表达载体,并鉴定其在HEK293T细胞中的表达。通过猪基因组DNA克隆猪β_2AR基因,利用同源重组技术将其连接至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-β_2AR,加入c-myc标签后命名为myc-pcDNA3.1(+)-β_2AR。以真核表达载体为模板构建突变体myc-pcDNA3.1(+)-β_2AR-D130N、myc-pcDNA3.1(+)-β_2AR-C285S和mycpcDNA3.1(+)-β_2AR-D130N/C285S,并将构建的真核表达载体和突变体转染HEK293T细胞,利用Western blotting技术验证其表达。结果显示,猪β_2AR基因已正确重组入pcDNA3.1(+)载体中;经测序鉴定,猪β_2AR的第130位天冬氨酸成功突变为天冬酰胺,第285位半胱氨酸成功突变为丝氨酸。Western blotting检测结果证明所构建的表达载体均可在HEK293T细胞中表达。本研究成功构建了猪β_2AR野生型的真核表达载体及2个单点突变和1个双点突变的突变体,并验证其在HEK293T细胞中正常表达,为进一步研究猪β_2AR蛋白表达及其药理学活性奠定基础。

关键词：猪 β2AR基因真核表达载体突变体 Western blotting

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姜黄素、甘草次酸和香菇多糖联合对CCl 4诱导的建鲤肝损伤的保护作用

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江苏农业学报 2018年第5期34卷 1100-1106页

作者：曹丽萍杜金梁贾睿殷国俊 Galina Jeney 丁炜东高崧扬州大学兽医学院江苏扬州225009 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部鱼类免疫药理学国际联合实验室江苏无锡214081 Research Institute for Fisheries Aquaculture and IrrigationAnn light 8Szarvas H-4440Hungary

以四氯化碳(CCl4)构建建鲤体内急性肝损伤模型,对姜黄素、甘草次酸和香菇多糖联合护肝作用进行研究。分别采用含有姜黄素、甘草次酸、香菇多糖和低、中、高剂量姜黄素+甘草次酸+香菇多糖联合中草药的饲料投喂60 d后,各组建鲤腹腔注射30%... 详细信息

以四氯化碳(CCl4)构建建鲤体内急性肝损伤模型,对姜黄素、甘草次酸和香菇多糖联合护肝作用进行研究。分别采用含有姜黄素、甘草次酸、香菇多糖和低、中、高剂量姜黄素+甘草次酸+香菇多糖联合中草药的饲料投喂60 d后,各组建鲤腹腔注射30%CCl4,注射剂量为每1 g鱼体注射0. 005 ml,禁食72 h,以诱导建鲤急性肝损伤。通过测定各组建鲤生长指标、血清和肝脏生化指标及肝组织炎性细胞因子m RNA的表达情况,观察姜黄素、甘草次酸和香菇多糖联合用药的保肝效果。结果显示:甘草次酸单味用药及中、高剂量姜黄素+甘草次酸+香菇多糖联合用药能显著提高建鲤的相对增重率和特定生长率,显著降低饵料系数;与模型组相比,各用药组能显著抑制CCl4导致的血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的升高,显著恢复肝组织中谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,抑制丙二醛(MDA)生成,能显著抑制C-Rel、i NOS、IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-8表达量的升高;与姜黄素、甘草次酸或香菇多糖单味用药相比较,姜黄素+甘草次酸+香菇多糖联合用药的保肝效果更明显,随着联合用药剂量的升高,作用愈加显著。说明姜黄素、甘草次酸和香菇多糖联合用药,对CCl4诱导的建鲤肝损伤具有协同保护作用。

关键词：建鲤四氯化碳肝损伤中草药

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氟苯尼考对多杀性巴氏杆菌的药效学研究

氟苯尼考对多杀性巴氏杆菌的药效学研究

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中国毒理学会兽医毒理学委员会与中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会联合学术研讨会暨中国毒理学会兽医毒理学委员会第5次全国会员代表大会

作者：蓝玮璇江礼捷肖霞王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

【目的】研究氟苯尼考对多杀性巴氏杆菌感染鸭的体外和体内抗菌活性。【方法】测定氟苯尼考对12株禽源多杀性巴氏杆菌的最小抑菌浓度（MIC）,最小杀菌浓度（MBC）;测定氟苯尼考对C、0825Y、0901J1的体外静态杀菌曲线。从细菌学层面研究... 详细信息

【目的】研究氟苯尼考对多杀性巴氏杆菌感染鸭的体外和体内抗菌活性。【方法】测定氟苯尼考对12株禽源多杀性巴氏杆菌的最小抑菌浓度（MIC）,最小杀菌浓度（MBC）;测定氟苯尼考对C、0825Y、0901J1的体外静态杀菌曲线。从细菌学层面研究肉鸭中氟苯尼考对多杀性巴氏杆菌的体内药效学作用。选用50只六周龄健康高邮肉鸭,每只体重约0.5kg,通过气管灌注02CFU/mL的禽源多杀性巴氏杆菌0825Y1,建立禽源多杀性巴氏杆菌肺炎感染模型,肉鸭感染多杀性巴氏杆菌12h后,出现精神沉郁、体温升高、畏冷扎堆、张口呼吸、咳嗽等临床症状,解剖后可见肺脏充血水肿、心冠脂肪有点状出血、肝脏有针尖状白色坏死灶,肺脏载菌量稳定在0～6CFU/lung。随机选取45只感染肉鸭,12h后随机分成9组,分别灌服生理盐水、1、2、5、8、10、15、20、30mg/kg bw的氟苯尼考,一天两次,连续三天,在最后一次给药12h后处死鸭子,无菌采取肺脏,测定肺脏载菌量。【结果】氟苯尼考对12株禽源多杀性巴氏杆菌的MIC范围为0.25-32μg/mL,MBC为2MIC;体外杀菌曲线表明细菌减少的log值随着药物浓度的增加而呈现梯度的变化,细菌暴露于大于等于4MIC药物浓度24h后,能够达到清除细菌的效果;体内药效中,经过72h治疗后,给药剂量为5mg/kg bw、15mg/kg bw、30mg/kg bw分别可达到抑菌作用、杀菌作用和清除作用。【结论】临床推荐的给药剂量20-30mg/kg bw治疗敏感菌株所致的鸭多杀性巴氏杆菌病可达到良好的治疗效果。

关键词：氟苯尼考禽源多杀性巴氏杆菌体外抗菌活性体内药效

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恩诺沙星对大肠杆菌在鸡中的体内药动药效同步模型研究

恩诺沙星对大肠杆菌在鸡中的体内药动药效同步模型研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十四次学术讨论会

作者：江礼捷谢华杰张海洁连俊伟蓝玮璇蒋永嘉王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室江苏扬州225000

[目的]本研究旨在建立恩诺沙星对大肠杆菌在鸡中的体内药动药效(PK/PD)同步模型，确定最佳PK/PD参数值，为临床合理使用恩诺沙星，提高作用效果，减少耐药性的产生或富集提供理论支持。[方法]测定恩诺沙星对犬肠杆菌O78株的最小抑菌浓度... 详细信息

[目的]本研究旨在建立恩诺沙星对大肠杆菌在鸡中的体内药动药效(PK/PD)同步模型，确定最佳PK/PD参数值，为临床合理使用恩诺沙星，提高作用效果，减少耐药性的产生或富集提供理论支持。[方法]测定恩诺沙星对犬肠杆菌O78株的最小抑菌浓度(MIC)，最小杀菌浓度(MBC)，防突变浓度(MPC)。

关键词：恩诺沙星大肠杆菌药动药效同步模型

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猪β2肾上腺素能受体基因真核表达载体及突变体的构建及表达

猪β2肾上腺素能受体基因真核表达载体及突变体的构建及表达

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十四次学术讨论会

作者：谢华杰张海洁江礼捷连俊伟刘敏闵天奇王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室江苏扬州225000

[目的]本研究旨在构建猪β2肾上腺素能受体(β2AR)基因及其突变体的真核表达载体,并鉴定其在HEK293T细胞中的表达.[方法]本研究从猪基因组DNA克隆猪β2AR基因,利用同源重组技术将其连接至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-β2A... 详细信息

[目的]本研究旨在构建猪β2肾上腺素能受体(β2AR)基因及其突变体的真核表达载体,并鉴定其在HEK293T细胞中的表达.[方法]本研究从猪基因组DNA克隆猪β2AR基因,利用同源重组技术将其连接至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-β2AR真核表达载体,加入myc 标签后命名为myc-pcDNA3.1(+)-β2AR.以真核表达载体为模板构建突变体myc-pcDNA3.1(+)-β2AR-D130N、myc-pcDNA3.1(+)-β2AR-C285S 和myc-pcDNA3.1(+)-β2AR-D130N/C285S,并将构建的真核表达载体和突变体转染入HEK293T细胞,利用Western blot技术验证其表达.

关键词：猪 β2AR 基因真核表达载体突变体 Western blot

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鸡黑素皮质素受体3(cMC3R)基因及其突变体真核表达载体的构建及药理学特性初探

鸡黑素皮质素受体3(cMC3R)基因及其突变体真核表达载体的构建及药...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十四次学术讨论会

作者：张海洁谢华杰江礼捷连俊伟王志强陶亚雄扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室江苏扬州225000 Auburn University College of Veterinary MedicineDepartment of Anatom 扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室江苏扬州225000 Auburn University College of Veterinary MedicineDepartment of AnatomyPhysiology and PharmacologyU

[目的]本实验在构建鸡黑素皮质素受体3(cMC3R)基因及其突变体真核表达载体的基础上,初步研究了野生型及突变型cMC3R 的药理学特性。[方法]从鸡全基因组中扩增目的基因,构建cMC3R真核表达载体;点突变试剂盒构建4个单点突变体(M54L,G104S,... 详细信息

[目的]本实验在构建鸡黑素皮质素受体3(cMC3R)基因及其突变体真核表达载体的基础上,初步研究了野生型及突变型cMC3R 的药理学特性。[方法]从鸡全基因组中扩增目的基因,构建cMC3R真核表达载体;点突变试剂盒构建4个单点突变体(M54L,G104S,L151R,S183S);流式细胞仪检测野生型与突变型的细胞表面表达和总表达水平;放射性标定配体结合分析法检测野生型与突变型对6种配体([Nle4,D-Phe7]-□-melanocyte stimulating hormone(NDP-MSH),□-MSH,□-MSH,□-MSH,D-Trp8-□-MSH,agouti related protein(AgRP))的结合能力;双报告基因法研究野生型与突变型PKA 通路的活性;通过免疫蛋白印迹(western blot)检测野生型与突变型磷酸化ERK1/2的活性进而获得MAPK信号通路的生理活性。

关键词：鸡 MC3R基因真核表达载体放射性标定配体结合分析双报告基因检测蛋白免疫印迹

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负载顺铂的泊洛沙姆温敏凝胶用于小鼠宫颈癌的局部化疗

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应用化学 2017年第10期34卷 1127-1133页

作者：王通柳时张秀英东北农业大学兽医学院兽医药理学与毒理学实验室哈尔滨150030 辽宁大成农牧实业有限公司沈阳110000 中国科学院长春应用化学研究所高分子物理和化学国家重点实验室长春1300223

为了探讨载有顺铂的温敏凝胶对小鼠宫颈癌的局部化疗作用,制备了载有顺铂的泊洛沙姆温敏凝胶,并通过流变学、体外溶蚀、体外释放等技术手段表征其结构和性能,采用鼠源宫颈癌U14细胞制备了原位宫颈/阴道癌模型,将载药凝胶灌注入荷瘤鼠阴... 详细信息

为了探讨载有顺铂的温敏凝胶对小鼠宫颈癌的局部化疗作用,制备了载有顺铂的泊洛沙姆温敏凝胶,并通过流变学、体外溶蚀、体外释放等技术手段表征其结构和性能,采用鼠源宫颈癌U14细胞制备了原位宫颈/阴道癌模型,将载药凝胶灌注入荷瘤鼠阴道,评价载药凝胶对小鼠宫颈/阴道癌的抑制作用。结果表明,载有顺铂的泊洛沙姆温敏凝胶经阴道给药后对小鼠宫颈/阴道癌的抑瘤率可达到63.1%,可有效抑制小鼠宫颈癌的生长,而系统安全性则远远高于静脉注射顺铂。因此,载有顺铂的温敏凝胶有可能成为一种新型的宫颈癌治疗剂型。

关键词：顺铂温敏凝胶宫颈癌泊洛沙姆

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纳米银颗粒对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性

纳米银颗粒对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性

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2017中国生物材料大会

作者：汤旭娜刘婷郭大伟顾宁胡勤刚南京大学医学院附属口腔医院南京市口腔医院江苏南京 210008 兽医药理学与毒理学实验室兽医学院南京农业大学江苏南京 210095 生物电子学国家重点实验室江苏省生物材料与设备重点实验室生物科学与医学工程学院东南大学江苏、南京、210096

纳米银作为一种新型的抗菌纳米药物,具有特定的性能,如小尺寸效应、量子效应和大的比表面积,并具有优良的抗菌性能.纳米银在有效抗菌浓度下，对HPLFs细胞相对安全，但当纳米银浓度升高，会对HPLFs细胞的增殖及细胞周期产生影响，诱导细... 详细信息

纳米银作为一种新型的抗菌纳米药物,具有特定的性能,如小尺寸效应、量子效应和大的比表面积,并具有优良的抗菌性能.纳米银在有效抗菌浓度下，对HPLFs细胞相对安全，但当纳米银浓度升高，会对HPLFs细胞的增殖及细胞周期产生影响，诱导细胞凋亡。提示临床中使用纳米银作为根管内抗菌药使用时，需要注意控制纳米银使用浓度。

关键词：纳米银颗粒人牙周膜成纤维细胞毒性作用药物浓度

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微管依赖性自噬在镉引起的神经细胞线粒体损伤中的作用

微管依赖性自噬在镉引起的神经细胞线粒体损伤中的作用

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：王涛王棋文宋瑞龙杨金龙袁燕卞建春刘学忠朱家桥刘宗平扬州大学兽医学院临床内科实验室

【目的】研究自噬(autophagy)通过微管(microtubules)依赖性途径在镉致大鼠大脑皮质神经细胞线粒体损伤中的保护作用。【材料和方法】处死怀孕18天的SD大鼠,取18日龄的SD大鼠胎鼠的大脑皮质神经细胞,经neubasal培养基培养6天后,通过20μ... 详细信息

【目的】研究自噬(autophagy)通过微管(microtubules)依赖性途径在镉致大鼠大脑皮质神经细胞线粒体损伤中的保护作用。【材料和方法】处死怀孕18天的SD大鼠,取18日龄的SD大鼠胎鼠的大脑皮质神经细胞,经neubasal培养基培养6天后,通过20μmol/L镉处理0,2,4,6,8,12,24小时,通过Westernblo检测自噬标志性蛋白LC3,p62的表达,镉单独或与紫杉醇联合处理神经细胞12小时检测微管聚合蛋白ace-mbuline,tau磷酸化水平以及自噬表达相关蛋白LC3,Atg5的表达,用免疫荧光技术检测LC3与微管的表达与分布。在此基础上,通过添加自噬的抑制剂3-MA,利用荧光定量技术检测自噬中关键调节蛋白基因Becline1的表达及用流式细胞仪细胞线粒体膜电位,用试剂盒检测ATP含量的变化,最后通过电镜观察细胞中线粒体的形态学变化。【结果】镉诱导神经细胞自噬在6小时达到最高水平,在12小时有明显下降,镉与紫杉醇联合处理12小时与镉单独处理组相比,自噬水平有明显上升(P<0.01),线粒体膜电位上调,ATP含量增加。添加3-MA后能够显著降低自噬水平,同时进一步降低线粒体膜电位以及ATP的含量。【结论】镉能够诱导大鼠大脑皮质神经细胞自噬,镉引起的细胞微管损伤能够影响自噬水平进而导致线粒体损伤,通过添加紫杉醇促进微管聚合,能够进一步提高自噬水平,从而减轻镉所导致的细胞氧化损伤,提示微管依赖性的自噬在镉引起的大鼠大脑皮质神经细胞线粒体损伤中具有一定的保护作用。

关键词：自噬镉神经细胞毒性微管线粒体

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