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中国畜牧兽医学会2017年学术年会

作者：刘东张竹君顾敏刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225000

引言2013年3月中国华东地区报道了第一例人感染H7N9亚型流感病毒病例,据WHO报道,截至2017年7月25日,实验室共确诊1557例人感染H7N9的病例,其中包括605例死亡病例.早期研究表明,H7N9亚型禽流感病毒在HA裂解位点处缺少连续的碱性氨基酸,...

引言2013年3月中国华东地区报道了第一例人感染H7N9亚型流感病毒病例,据WHO报道,截至2017年7月25日,实验室共确诊1557例人感染H7N9的病例,其中包括605例死亡病例.早期研究表明,H7N9亚型禽流感病毒在HA裂解位点处缺少连续的碱性氨基酸,因此对鸡呈低致病性.本研究通过对3株H7N9亚型禽流感病毒的分离鉴定和致病力指标测定发现了对鸡呈高致病性的H7N9禽流感病毒并初步探索了其生物学特性.

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表达广谱H5亚型禽流感病毒Mosaic HA蛋白重组火鸡疱疹病毒的构建

表达广谱H5亚型禽流感病毒Mosaic HA蛋白重组火鸡疱疹病毒的构建

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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议

作者：李佳昕孙文强何东昌王晓泉刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

禽流感是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类烈性传染病.根据其在6周龄雏鸡静脉内致病指数的不同,又可将其分为高致病性(HPAIV)和低致病性(LPAIV)两种,其中H5N1亚型禽流感属于高致病性禽流感,对家禽的致死率可达100％.除感染... 详细信息

禽流感是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类烈性传染病.根据其在6周龄雏鸡静脉内致病指数的不同,又可将其分为高致病性(HPAIV)和低致病性(LPAIV)两种,其中H5N1亚型禽流感属于高致病性禽流感,对家禽的致死率可达100％.除感染禽外,还可感染人和哺乳动物,引起人类死亡,具有重要的公共卫生学意义.近年,国内应用的H5亚型禽流感疫苗主要包括全病毒灭活疫苗和重组活载体疫苗.灭活疫苗一般选取与H5N1亚型接近的弱毒株或应用反向遗传技术构建减毒株,是目前我国主要免疫的疫苗种类,这种疫苗的缺点是产生的免疫效果维持时间短,生产成本较高,多次接种后应激反应大等;禽流感重组载体疫苗主要有重组鸡痘病毒疫苗和重组新城疫病毒疫苗,这两种疫苗受母源抗体的影响较大,实际大规模应用较难.火鸡疱疹病毒(HVT)为血清三型的马立克氏病毒(MDV).从二十世纪七十年初以来最早被广泛地用作防制马立克氏病的疫苗。它对鸡及其它动物均无致病性;基因组较大且含有病毒复制的非必需片段，可容纳较大外源基因片段的插入;在鸡体内可持续存在，有利于外源基因的持续表达;可刺激机体产生强烈细胞免疫反应和较高的抗体水平，免疫出现早，持续时间长;制备的疫苗可冻干保存，易于保存和运输;此外，还可以克服母源抗体干扰，显示出HVT作为疫苗载体良好的应用前景。

关键词：禽流感病毒免疫疫苗火鸡疱疹病毒抗体水平

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华东地区H5亚型禽流感病毒分子流行病学调查

华东地区H5亚型禽流感病毒分子流行病学调查

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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议

作者：孙文强李佳昕刘开拓刘东胡娇刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

1996年从广东地区发病鹅群中首次分离到以A/Goose/Guangdong/1/96(GD/96)株为代表的H5N1高致病性禽流感病毒(Highly Pathogenic Avian Influenza Virus,HPAIV).此后,GD/96-like病毒在我国传播开来,蔓延到亚洲,继而传到欧洲、北美的多个国家和地区,给养禽业造成了巨大的经济损失,对公共卫生安全构成了严重的威胁.根据最新WHO对2003-2017年期间的H5N1感染人类案例统计结果显示,现已有858例感染,死亡453例,死亡率达到了52.8％.根据最近几年的文章报道新出现了多种能感染人的亚型,例如H7N9(2013年)、H10N8(2013年)、H5N6(2013年).另外H6N1、H7N2、H7N3、H7N7、H9N2和H10N7也有发生人感染的案例.因此对禽流感病毒的持续的流行病学调研具有重大的经济学和公共卫生学意义.自2016年1月至今，在华东地区(江苏、浙江、江西、安徽、山东等地)的活禽市场采集泄殖腔、口咽试子共1189份。先通过荧光定量PCR检测流感阳性样品，然后将阳性样品通过尿囊腔接种SPF鸡胚分离病毒，血凝及血凝抑制试验初步鉴定病毒的HA亚型。根据文献报道的引物，利用RT-PCR方法扩增病毒的全基因片段，应用DNAStar和MEGA7等软件进行测定序列的拼接、比对，并对病毒的全基因组进行遗传进化分析。

关键词：禽流感病毒病毒感染流行病学

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表达APECⅠ型菌毛的减毒鸡伤寒沙门氏菌重组疫苗的构建及免疫保护研究

表达APECⅠ型菌毛的减毒鸡伤寒沙门氏菌重组疫苗的构建及免疫保护...

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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议

作者：李丹王小舟朱国强扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

本研究基于染色体-质粒平衡致死系统平台,利用PCR技术扩增出表达APECⅠ型菌毛的fim操纵子基因并将其插入至含asd基因的组成型表达载体pYA3342,构建重组表达载体pYA3342-fim,将重组质粒电转化至缺失编码天冬氨酸半醛脱氢酶的asd基因的减... 详细信息

本研究基于染色体-质粒平衡致死系统平台,利用PCR技术扩增出表达APECⅠ型菌毛的fim操纵子基因并将其插入至含asd基因的组成型表达载体pYA3342,构建重组表达载体pYA3342-fim,将重组质粒电转化至缺失编码天冬氨酸半醛脱氢酶的asd基因的减毒鸡伤寒沙门氏菌SG9RΔasd突变株,构建重组减毒鸡伤寒沙门氏菌活疫苗SG9RΔasd(pYA3342-fim).采用MSHA与MHRA试验、酵母细胞凝集试验及玻板凝集试验验证了重组菌Ⅰ型菌毛的表达.同时,对重组菌的生长特性、遗传稳定性及口服安全性等生物学特性进行了评定.通过口服免疫接种重组菌SG9RΔasd(pYA3342-fim)、空载体对照组SG9RΔasd(pYA3342)以及PBS空白对照组,利用APEC强毒株QD2、鸡沙门氏菌50336对免疫鸡群进行免疫效果测定试验.结果统计显示,APEC QD2毒力株攻毒的免疫组、空载体对照组及空白对照组的死亡率分别为40.0％、80.0％、60.0％,并且空载体对照组和PBS空白对照组鸡的心包,肝脏,脾脏,气囊等实质器官的散在的充血出血等炎症反应比免疫组更加严重;沙门氏菌菌株50336攻毒的免疫组、空载体对照组及空白对照组的死亡率分别为40.0％、60.0％、60.0％,载体对照组和PBS空白对照组鸡的心包,肠道及其粘膜充血出血等炎症反应比免疫组更加严重.本研究表明重组减毒鸡伤寒沙门氏菌SG9RΔasd(pYA3342-fim)对大肠杆菌病以及沙门氏菌病对于鸡群的感染均起到一定的免疫保护效果.

关键词：鸡大肠杆菌病沙门氏菌病减毒伤寒沙门氏菌重组疫苗免疫保护作用

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2011—2013年7株鸽源新城疫病毒的生物学特性鉴定及遗传进化分析

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中国兽医学报 2016年第11期36卷 1853-1857页

作者：赵振振朱杰许海旭胡顺林刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009

为了解目前鸽群中新城疫病毒（NDV）的流行情况，本研究对2011-2013年分离到的7株鸽源NDV进行了部分生物学特性的测定和遗传进化分析。结果显示，7株NDV的F蛋白裂解位点均为^122RRQKRF^117，呈典型强毒特征，但7株病毒的MDT值范围较大，... 详细信息

为了解目前鸽群中新城疫病毒（NDV）的流行情况，本研究对2011-2013年分离到的7株鸽源NDV进行了部分生物学特性的测定和遗传进化分析。结果显示，7株NDV的F蛋白裂解位点均为^122RRQKRF^117，呈典型强毒特征，但7株病毒的MDT值范围较大，从50～114h不等；ICPI从0．98～1．51不等。遗传进化分析结果表明，分离到的7株鸽源NDV分离株之间的同源性较高，且均属于VIb亚型，但与目前广泛使用的疫苗株Lasota的遗传距离较远，因此有必要研制针对鸽源VIb亚型NDV的新型疫苗。

关键词：鸽 ND F蛋白 VIb亚型

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2012年—2015年安徽部分地区发病家禽H9N2亚型禽流感流行情况分析

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动物医学进展 2016年第3期37卷 127-130页

作者：胡晓苗戴银沈学怀赵瑞宏张丹俊胡顺林刘东刘秀梵安徽农业科学院畜牧兽医研究所安徽合肥230031 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为了解安徽地区发病家禽中H9N2亚型禽流感(H9N2subtype AI)的流行状况,从2012年12月到2015年9月在安徽省农业科学院兽医临床诊断中心和部分发病鸡场,采集发生呼吸道疾病的鸡、鸭、鹅等家禽的泄殖腔拭子和器官组织共368份,经鸡胚接种和HA... 详细信息

为了解安徽地区发病家禽中H9N2亚型禽流感(H9N2subtype AI)的流行状况,从2012年12月到2015年9月在安徽省农业科学院兽医临床诊断中心和部分发病鸡场,采集发生呼吸道疾病的鸡、鸭、鹅等家禽的泄殖腔拭子和器官组织共368份,经鸡胚接种和HA、HI试验鉴定,从25份样品中分离到H9N2亚型AIV,分离率为6.79%。鸡源样品分离率为10.68%,高于鹅源样品的分离率(2.13%)和鸭源样品的分离率(1.47%)。H9N2AIV的季节性分布较为明显,冬季12月份至次年2月份的分离率最高,而夏季最热的8月份则没有分离到病毒。这些数据表明H9N2亚型AIV可以作为鸡群呼吸道疾病的一个发病因素,应该继续加强对其监测。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒流行病学家禽

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一株鸭源H4N8亚型禽流感病毒的全基因测序及遗传进化分析

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中国农业科学 2015年第15期48卷 3040-3049页

作者：赵晴晴李群辉朱杰钟蕾刘晶晶顾敏王晓泉刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院/农业部畜禽传染病学重点开放实验室

【目的】禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)根据其表面糖蛋白血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸(neuraminidase,NA)的不同,可分为16种HA和9种NA亚型。根据其致病力的差异可分为高致病性禽流感病毒(highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV)和低致病性禽流感病毒(low pathogenic avian influenza virus,LPAIV)。虽然H4亚型禽流感病毒为低致病性AIV,感染家禽表现为无症状感染,但其对禽类甚至是哺乳动物是一个潜在的威胁,因此必须要加强对H4亚型禽流感病毒的调查监控。【方法】为了探讨H4亚型禽流感病毒的分子特征及遗传演化规律,对2010年在中国华东地区某活禽市场进行流行病学监测时分离到的一株H4N8亚型禽流感病毒A/duck/Nanjing/1102/2010(简称DK/NJ/1102)进行了全基因组序列测定及遗传进化分析。通过常规的血清学试验确定其HA亚型,提取病毒总RNA,并通过RT-PCR方法分别扩增出其各基因片段,连接p GEM-Teasy载体上后进行序列测定。利用Gen Bank中的BLAST工具进行核苷酸序列的同源性分析,并与Gene Bank中的H4亚型流感病毒及其它相关序列进行遗传进化分析。【结果】DK/NJ/1102的HA基因与Mongolia分离株A/duck/Mongolia/274/2007(H4N3)的核苷酸同源性最高,为98.9%。推导的氨基酸剪切位点序列为"P-E-K-A-S-R-G",符合典型的低致病性禽流感病毒特征;NA基因与华东地区分离的鸭源毒株A/Duck/Eastern China/n91/2009(H3N8)核苷酸同源性最高,达99.4%;PB1、PA和NP基因均与H1亚型禽流感病毒亲缘关系最近;M基因与A/wild duck/Korea/CSM4-12/2009(H5N1)核苷酸同源性最高,高达99.9%;NS基因与韩国2009年分离的H7N7亚型流感病毒遗传距离最近。NS1蛋白的80-84处氨基酸没有发生氨基酸缺失。【结论】该H4N8亚型禽流感病毒基因组构成比较复杂,可能是一株多基因重组病毒。

关键词：禽流感病毒 H4N8亚型遗传进化分析重组

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流感病毒气源性传播研究进展

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中国家禽 2015年第13期37卷 43-49页

作者：江恺骏钟蕾王晓泉刘晓文刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

流感病毒是现今世界流行最为广泛、传播最为迅速的人兽共患病毒之一,而气源性传播是流感病毒最有效的传播方式。流感病毒的相关基因,尤其是相关基因的关键氨基酸位点对其自身是否具有气源性传播能力具有决定性的作用。外界环境的改变会... 详细信息

流感病毒是现今世界流行最为广泛、传播最为迅速的人兽共患病毒之一,而气源性传播是流感病毒最有效的传播方式。流感病毒的相关基因,尤其是相关基因的关键氨基酸位点对其自身是否具有气源性传播能力具有决定性的作用。外界环境的改变会直接影响病毒气溶胶颗粒形成的数量和大小,进而影响传播效率。目前,经过长期的筛选和比较,将豚鼠和雪貂作为研究流感气源性传播的模式动物,根据不同目的或者单独使用或者协同实验。文章通过对病毒本身的生物学特性以及外界环境对气源性传播产生的影响进行了初步总结,对进行气源性传播的实验动物给出了综合评价,一方面为研究者提供较为全面的总结,另一方面为防治流感提供依据。

关键词：流感病毒气源性传播生物学特性动物模型环境因素

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采用反向遗传学技术构建clade7..2 H5N2亚型禽流感病毒高产疫苗株

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中国家禽 2015年第3期37卷 13-17页

作者：孙中涛王萱李群辉高照王晓泉刘秀梵刘晓文扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为构建H5N2亚型禽流感病毒(AIV)高产疫苗株,研究采用反向遗传操作技术删除Clade 7.2 H5N2亚型AIV A/chicken/Shanxi/Q6/2013(wt-Q6株)血凝素(HA)基因多碱性氨基酸序列,以wt-Q6株HA和神经氨酸酶基因为供体,结合A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV的6个内部片段骨架,构建针对此种变异的H5亚型AIV疫苗株,成功拯救出一株重组病毒r Q6/PR8。该病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖滴度,对SPF鸡胚和鸡无致病性,具有低毒高产的特性,符合疫苗候选株的标准。

关键词： H5 clade 7.2 禽流感病毒反向遗传学

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2011～2014年安徽省发病鸡群H9亚型禽流感病毒HA基因的遗传进化分析

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中国动物传染病学报 2015年第5期23卷 21-26页

作者：胡晓苗胡顺林陈鸿志刘东戴银沈学怀刘秀梵张丹俊扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 安徽农业科学院畜牧兽医研究所合肥230031

为了解安徽省发病鸡群H9N2亚型禽流感病毒（Avian infl uenza virus,AIV）的变异情况,本研究对2011～2014年安徽省发病鸡群的368份组织样品进行AIV的鸡胚分离和RT-PCR检测,分离鉴定到17株H9N2 AIV。对这17株进行HA基因测序及系统进化分... 详细信息

为了解安徽省发病鸡群H9N2亚型禽流感病毒（Avian infl uenza virus,AIV）的变异情况,本研究对2011～2014年安徽省发病鸡群的368份组织样品进行AIV的鸡胚分离和RT-PCR检测,分离鉴定到17株H9N2 AIV。对这17株进行HA基因测序及系统进化分析,结果表明：17株HA基因核苷酸序列的相似性为88.5%～99.6%,属于A/Duck/Hong Kong/Y280/1997病毒亚系。氨基酸比对分析显示,裂解位点326～329位氨基酸为典型的低致病性AIV特征性序列。与A/Chicken/Shanghai/F/98疫苗株相比,17株HA蛋白受体结合位点的226位均为亮氨酸（L）,呈现了人流感受体结合特性;5株200位的点突变（T→I）,导致了200位潜在糖基化位点的缺失。可见安徽省分离的H9N2 AIV大部分毒株基因序列已发生变异,目前使用的疫苗能否为禽群提供足够的保护力还需要作进一步的研究。

关键词：禽流感 H9N2亚型 HA基因遗传进化鸡

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