检索结果-内蒙古大学图书馆

嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护

中国兽医学报 2009年第9期29卷 1097-1102页

作者：程旭宋益盛瑜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及真核表达质粒pcDNA3．1／V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0．07～0．60不等的商品猪，9头猪随机分为4组，1组（3头）肌肉注射免疫10^3.5 TCID50的PCV1-2／头，2组（2头... 详细信息

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及真核表达质粒pcDNA3．1／V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0．07～0．60不等的商品猪，9头猪随机分为4组，1组（3头）肌肉注射免疫10^3.5 TCID50的PCV1-2／头，2组（2头）肌肉注射真核表达质粒200μg／头，3组（2头）肌肉注射空载体（pcDNA3．1）200μg／头，4组（2头）不免疫作为攻毒对照组。于免疫后42d，PCV1—2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体。免疫后42d所有组攻毒PCV2和PRRSV，剂量分别为2×10^4.5 TCID50／头和10^6 TCID50／头。攻毒后21d，攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大，免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒栽量低于对照组，攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组。这些结果表明，嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后，对PCV2感染能产生保护性免疫应答，有可能成为候选疫苗。

关键词：嵌合型猪圆环病毒(PCV1—2) 真核表达质粒免疫保护

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用8质粒病毒拯救系统产生H9N2/WSN重组A型流行性感冒病毒

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病毒学报 2005年第1期21卷 48-53页

作者：卢建红邵卫星刘玉良贾立军韦栋平石火英刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

把禽流行性感冒(流感)病毒A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因cDNA克隆至polⅠpolⅡ双向转录和表达载体pHW2000,用这两种质粒与8质粒病毒拯救系统中流感病毒A/WSN/33(H1N1)6个内部基因cDNA的质粒组合(6+2重... 详细信息

把禽流行性感冒(流感)病毒A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因cDNA克隆至polⅠpolⅡ双向转录和表达载体pHW2000,用这两种质粒与8质粒病毒拯救系统中流感病毒A/WSN/33(H1N1)6个内部基因cDNA的质粒组合(6+2重排),共转染COS 1细胞,产生了能在鸡胚中高滴度增殖的H9N2/WSN重组病毒。用A/WSN/33的8个基因cDNA质粒作对照,也产生了转染子病毒。经过EID50测定和MDCK感染实验,新基因型H9N2/WSN病毒感染鸡胚的能力强(EID50为10-11/0.2ml),而且对鸡胚的毒力弱,在不加胰酶的情况下不使MDCK细胞产生病变。经电镜观察,两个转染子病毒的形态与野生型流感病毒相似。反向遗传操作技术的建立,为对禽流感病毒基因功能和疫苗构建等方面的研究提供了新的手段。

关键词： A型流行性感冒病毒 H9N2亚型禽流感病毒共转染 8质粒系统反向遗传操作技术血凝素神经氨酸酶

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新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科技 2004年第4期34卷 3-8页

作者：韦栋平徐忠林张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法。通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(lnET)的线性回归分析,获得了回归方程lnET=0.201×P/N+... 详细信息

用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法。通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(lnET)的线性回归分析,获得了回归方程lnET=0.201×P/N+4.632。应用该ELISA方法对表达NDVF基因的重组鸡痘病毒免疫鸡群进行了血清抗体检测,结果表明,血清的ELISA抗体效价与相应血清中和试验的抗体效价高度相关。攻毒保护试验的结果显示,ELISA抗体效价与机体的保护力表现一定程度的相关性。

关键词：新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA 抗体效价鸡痘病毒栽体基因工程疫苗

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大肠杆菌猪水肿毒素B亚单位基因的克隆与鉴定

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农业生物技术学报 2000年第1期8卷 76-78页

作者：倪振亚焦新安高崧彭大新张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点实验室!扬州225009

根据已知大肠杆菌志贺氏菌样毒素Ⅱ型变异体Ｂ亚单位(ＳＬＴ－ⅡｖＢ)基因序列，设计并合成３条２对引物，以大肠杆菌Ｏ３８基因组为模板，通过聚合酶链式反应(ＰＣＲ)分别扩增出２０４ｂｐ的基因序列及包含一段信号肽的２６１ｂ... 详细信息

根据已知大肠杆菌志贺氏菌样毒素Ⅱ型变异体Ｂ亚单位(ＳＬＴ－ⅡｖＢ)基因序列，设计并合成３条２对引物，以大肠杆菌Ｏ３８基因组为模板，通过聚合酶链式反应(ＰＣＲ)分别扩增出２０４ｂｐ的基因序列及包含一段信号肽的２６１ｂｐ基因序列。将这两段ＤＮＡ分别克隆进表达性载体质粒ＰＹＡ３３３４的ＥｃｏＲⅠ和ＢａｍＨⅠ位点之间，经地高辛标记探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和酶切分析鉴定，并对两条扩增片段进行序列测定。结果表明，扩增产物的大小与设计相符，扩增与克隆的片段为ＳＬＴ－ⅡｖＢ基因的特异性片段。

关键词：大肠杆菌 SLT-ⅡvB基因克隆序列测定

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鸭源H10亚型禽流感病毒血凝素基因的序列分析及其致病特性

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中国兽医科技 2005年第9期35卷 684-688页

作者：张评浒唐应华薛峰刘晓文钱忠明郝贵杰刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用血清学试验和RT-PCR方法从华东地区家养水禽中分离鉴定出多株H10亚型禽流感病毒,对其中1株A/Duck/Yangzhou/502/2003(简称Dk/YZ/502/03)的血凝素(HA)基因进行了序列测定,并与GenBank中登录的其他序列进行了比较。结果显示,Dk/YZ/502... 详细信息

采用血清学试验和RT-PCR方法从华东地区家养水禽中分离鉴定出多株H10亚型禽流感病毒,对其中1株A/Duck/Yangzhou/502/2003(简称Dk/YZ/502/03)的血凝素(HA)基因进行了序列测定,并与GenBank中登录的其他序列进行了比较。结果显示,Dk/YZ/502/03株血凝素基因与哺乳动物水貂分离株A/Mink/Sweden/84(H10N4)的同源性最高;其推导的氨基酸剪切位点序列为P-E-I-M-Q-G-R,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,这与该毒株对SPF鸡和BALB/c小鼠的低致病特性相吻合。

关键词：禽流感病毒测序 H10亚型血凝素致病性剪切位点

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禽病原性大肠杆菌iro和tsh基因缺失株的构建

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生物工程学报 2008年第3期24卷 401-408页

作者：陈祥刘静高崧潘志明焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

通过SSH和SCOTS研究,铁系统(Iro)和温度敏感性血凝素(Tsh)在禽病原性大肠杆菌(APEC)的感染中可能发挥重要作用。基因检测发现,在243个禽源大肠杆菌分离株中,有205株为iro+菌株,其中高、中度和低致病株分别为89.8%(184/205)、8.8%(18/205... 详细信息

通过SSH和SCOTS研究,铁系统(Iro)和温度敏感性血凝素(Tsh)在禽病原性大肠杆菌(APEC)的感染中可能发挥重要作用。基因检测发现,在243个禽源大肠杆菌分离株中,有205株为iro+菌株,其中高、中度和低致病株分别为89.8%(184/205)、8.8%(18/205)和1.5%(3/205);有167株为tsh+菌株,高、中度、低致病株分别为87.4%(146/167)、12.6%(21/167)和0%(0/167),结果显示iro+或tsh+株大多数为高致病株。为了确定iro和tsh基因在APEC致病力中的作用,以APECE037株为基础,通过自杀性载体分别构建了iro和tsh基因缺失突变株E037(Δiro)、E037(Δtsh)和E037(ΔiroΔtsh)。动物感染性试验表明,突变株在鸡体内的繁殖能力和致病性均明显下降,但两个基因的协同致病作用不显著。进一步证实Iro和Tsh为APEC重要的致病因子。

关键词：禽病原性大肠杆菌铁系统温度敏感性血凝素缺失突变株

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HA基因322位和329位氨基酸对H5N1亚型禽流感病毒毒力的影响

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病毒学报 2008年第5期24卷 340-344页

作者：唐应华吴培培孙庆彭大新张文俊李彦芳汪文斌龙进学张评浒刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

A/mallard/Huadong/S/2005(S,IVPI=2.65)和A/mallard/Huadong/Y/2003(Y,IVPI=0),是对麻鸭具有不同致病力的病毒。两病毒的HA裂解位点区有2个氨基酸差异,S病毒在HA裂解位点区322是Leu(L322),329位缺失(-329),而Y病毒322位是Gln(Q322),329位是Lys(K329)。根据这两个位点的差异,利用反向遗传系统,以S和Y病毒各自为骨架,拯救HA基因突变病毒,检测获救的突变病毒对麻鸭的毒力。可以得知,以S病毒为骨架,将S病毒HA基因322位Leu替换为Gln和(或)在329位添加Lys,以及用Y病毒的HA(Q322L,K329-)替换S病毒HA,获救的重组病毒对麻鸭亦完全无致病力;但以Y病毒为骨架,将Y病毒HA基因322位Gln替换为Leu和(或)在329位缺失Lys后,Y重组病毒对麻鸭的毒力上升。结果提示,S和Y病毒HA基因裂解位点区322和329氨基酸残基突变或缺失均影响病毒对麻鸭的致病力,且HA基因与其它基因的匹配性显著影响病毒对麻鸭的致病力。

关键词： H5N1 HA基因麻鸭反向遗传致病力

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PRRSV间接免疫荧光检测法的建立和应用

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中国兽医科技 2005年第4期35卷 256-260页

作者：彭长凌高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ATCC VR 2332 株人工单独感染3 头3 周龄仔猪,并用PRRSV ATCC VR 2332株和猪圆环病毒2型(PCV2)联合感染2 头3 周龄仔猪,每日检查试验猪体温、采食情况及临床表现,并用HerdChek IDEXX 试剂盒测其血清抗... 详细信息

以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ATCC VR 2332 株人工单独感染3 头3 周龄仔猪,并用PRRSV ATCC VR 2332株和猪圆环病毒2型(PCV2)联合感染2 头3 周龄仔猪,每日检查试验猪体温、采食情况及临床表现,并用HerdChek IDEXX 试剂盒测其血清抗体。PRRSV+PCV2联合感染猪分别在感染后1、3周剖杀,PRRSV单独感染猪和健康对照猪分别在感染后1、2和3周剖杀,对全部试验猪的肺组织进行灌洗处理以获得肺泡巨噬细胞(PAM),用PAM进行抹片,同时用肺组织直接进行触片做间接免疫荧光(IIF)检测。结果表明,用所获得的3 株单克隆抗体均检测到人工感染猪肺组织中的PRRSV抗原。另外,用IIF检测7 头临床疑似PRRS病猪的PAM抹片,其中沭阳县的2头猪呈现阳性反应;对这2头猪的肺组织进行病毒分离,在盲传到第4代时Marc 145细胞上产生明显的细胞病变,进一步证实用所获得的3株单克隆抗体检测临床样品的结果准确而可靠,且获得的3株单克隆抗体均可通过IIF用于检测猪肺组织中的PRRSV抗原。

关键词： PRRSV 荧光检测法猪生殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型单克隆抗体应用肺泡巨噬细胞间接免疫荧光联合感染肺组织 ATCC 检查试验临床表现采食情况血清抗体人工感染阳性反应病毒分离细胞病变临床样品抗体检测

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致断奶仔猪腹泻、水肿病大肠杆菌F18菌毛a因子单克隆抗体的研制及其初步应用

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中国兽医学报 2004年第6期24卷 541-544页

作者：郭玉广高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

以表达 F18ac菌毛参考菌株 2 134(O15 7∶ H19)为研究对象 ,摸索出了 F18ac菌毛表达的最佳条件 ,采用热洗脱法获得了较纯的 F18ac菌毛 ,并以之免疫小鼠 ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,用直接玻板凝集法筛选出 1株杂交瘤细胞株 19B4 ,能稳定... 详细信息

以表达 F18ac菌毛参考菌株 2 134(O15 7∶ H19)为研究对象 ,摸索出了 F18ac菌毛表达的最佳条件 ,采用热洗脱法获得了较纯的 F18ac菌毛 ,并以之免疫小鼠 ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,用直接玻板凝集法筛选出 1株杂交瘤细胞株 19B4 ,能稳定分泌针对 F18ac菌毛和 F18ab菌毛共同抗原表位 a因子的单克隆抗体。细胞培养上清对 F18ac菌毛参考菌株 2 134和 F18ab菌毛参考菌株 10 7/ 86的直接凝集价均可达 1∶ 8,腹水单抗直接凝集效价可达 1∶ 10 2 4 ,而与猪源产 F4、F5、F6和 F4 1粘附素大肠杆菌菌株、鸡源产型菌毛大肠杆菌菌株及沙门氏菌不发生凝集反应。免疫印迹试验结果显示 ,腹水单抗可同时特异识别 F18ac菌毛 170 0 0和 F18ab菌毛 15 0 0 0左右的主要亚单位多肽。应用所研制的单抗对 2 15株断奶仔猪腹泻大肠杆菌分离株进行了检测 ,结果上述分离株 TSB培养物的 F18菌毛的检出率为13.4 % ,TSA培养物的检出率为 8.4 %。F18菌毛阳性分离株的 O血清型除了常见血清型 O139、O14 1外 ,还有非常见血清型 O10 7、O131和 O9等。TSB培养物的 F18菌毛检出率明显高于 TSA培养物的检出率 ,表明 F18菌毛在 TSB培养基中比在 TSA培养基上更容易表达 ,TSB培养基是适合 F18菌毛检测。

关键词：断奶仔猪腹泻水肿病大肠杆菌 F18菌毛 a因子单克隆抗体研制技术

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华东地区部分猪源大肠杆菌K 88黏附素的生物学特性

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中国兽医学报 2005年第5期25卷 474-477页

作者：陈祥高崧王雷李文杰曹传闺焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

近年来,从华东地区患腹泻仔猪中分离到一些表达K 88菌毛的大肠杆菌,这些菌株只与K 88 a因子单抗反应,而不与b、c、d因子单抗反应。通过K 88常规血清交叉吸收试验、SDS-PAGE、W estern印迹,表明这些菌株不仅与K 88ac参考菌株C 83907制备... 详细信息

近年来,从华东地区患腹泻仔猪中分离到一些表达K 88菌毛的大肠杆菌,这些菌株只与K 88 a因子单抗反应,而不与b、c、d因子单抗反应。通过K 88常规血清交叉吸收试验、SDS-PAGE、W estern印迹,表明这些菌株不仅与K 88ac参考菌株C 83907制备的c因子血清反应,而且与以分离株SEC 586制备且经K 88ab、K 88ac、K 88ad参考菌株吸收后的血清也反应。对分离株SEC 586、SEC 464的K 88主要亚单位结构基因faeG的克隆、测序,发现该基因由846对核苷酸组成,编码菌毛主要亚单位的262个氨基酸及21个氨基酸的信号肽,比国外报道的K 88ac F aeG亚单位(263个氨基酸)少了1个氨基酸,比K 88ab、K 88ad(265个氨基酸)少了3个氨基酸。SEC 586、SEC 464菌株的F aeG亚单位氨基酸序列的同源性为97.7%,它们与K 88ac的同源性为94.7%和96.2%;与K 88ab的同源性为90.1%和91.2%;与K 88ad的同源性为87.0%和88.6%。结果表明,新分离的K 88ac大肠杆菌黏附素主要亚单位已发生了部分变异。

关键词：大肠杆菌 K88黏附素单克隆抗体 faeG

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