检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2011年第11期31卷 75-80页

作者：张妍张文俊李群辉刘晓文刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的:现有的禽流感疫苗生产的方法已经不能适应工业化大生产的需求,有必要开发全悬浮培养的细胞系来满足大生产的需求。方法:我们通过转染稳定表达Siat7e基因的真核表达载体对MDCK细胞进行改造,并经过后期的驯化,筛选适应于全悬浮培养的... 详细信息

目的:现有的禽流感疫苗生产的方法已经不能适应工业化大生产的需求,有必要开发全悬浮培养的细胞系来满足大生产的需求。方法:我们通过转染稳定表达Siat7e基因的真核表达载体对MDCK细胞进行改造,并经过后期的驯化,筛选适应于全悬浮培养的MDCK细胞。结果:成功筛选到能稳定表达Siat7e基因并能适应全悬浮生长的细胞系。结论:该细胞系具有潜在的应用价值,为MDCK细胞的培养以及工业化大生产疫苗提供参考。

关键词： MDCK Siat7e 全悬浮疫苗生产

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两种消毒剂对禽流感病毒的杀灭效果比较

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中国家禽 2002年第24期24卷 18-19页

作者：卢建红邵卫星刘玉良韦栋平吴艳涛张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

我们受湖南省畜牧兽医总站和浏阳市消毒剂厂的委托,对两种消毒剂产品(消毒威和流感灭)进行了杀灭禽流感病毒(AIV)的试验,现报告如下.

关键词：消毒剂禽流感病毒杀灭效果比较

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H9N2亚型禽流感病毒复制特性的基因分析

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畜牧兽医学报 2008年第2期39卷 189-194页

作者：石火英孙蕾陈素娟卢建红刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

利用反向遗传技术,通过基因重排方法,以A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)禽流感病毒(Avian influ-enza virus,AIV)的6个内部基因为骨架,与A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)AIV的HA和NA基因组合,产生3株H9N2亚型重排AIVs。动物试验发现A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)和A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)AIV主要在呼吸系统复制,A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株在气管和肺组织的复制能力明显强于A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)AIV株。3株H9N2亚型重排AIVs的动物试验发现HA和NA基因对H9N2亚型AIV在呼吸道的复制特性起主要作用。内部基因对H9N2亚型AIV在呼吸道的复制也有一定的作用。结果表明1994年中国首次分离到的H9N2亚型AIV经过4年的宿主适应和基因进化,加强了其在呼吸系统的复制能力,奠定了气溶胶传播的基础。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型复制特性反向遗传技术 HA基因 NA基因

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一株H11N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析

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畜牧兽医学报 2011年第2期42卷 217-223页

作者：赵坤坤张妍段志强钟蕾朱艳梅赵国刘晓文刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了解禽流感病毒在华东地区家禽体内的进化情况,作者对华东地区某活禽市场的家禽进行了禽流感病毒的流行病学监测,并分离鉴定出1株H11N2亚型禽流感病毒A/duck/Jiangxi/k0701/2009。对该株病毒全基因组的遗传进化分析表明A/duck/Jiangxi... 详细信息

为了解禽流感病毒在华东地区家禽体内的进化情况,作者对华东地区某活禽市场的家禽进行了禽流感病毒的流行病学监测,并分离鉴定出1株H11N2亚型禽流感病毒A/duck/Jiangxi/k0701/2009。对该株病毒全基因组的遗传进化分析表明A/duck/Jiangxi/k0701/2009的8个基因片段来源广泛,与亚洲及欧洲某些地区的毒株存在广泛的重组现象。其PB2基因和NS基因可能由A/mallard/Korea/GH170/2007(H7N7)提供,NA基因与高致病性禽流感病毒A/duck/Hebei/0710/2009(H5N2)的NA基因亲缘关系较近,而PB1、PA和NP基因则可能与A/Muscovy duck/Thailand/CU-LM1984/2009(H4N9)有共同来源。本研究结果提示该株病毒可能为1株多元重组病毒,且可能在高致病性禽流感病毒的进化中起了重要作用。

关键词：禽流感病毒 H11N2亚型遗传进化分析基因重组

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NDV和H_9亚型AIV在血凝抑制及混合病毒在鸡胚增殖中的相互干扰

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中国家禽 2003年第z1期25卷 57-59页

作者：刘文博丁炜东孔晶王海燕胡顺林何海蓉张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

先测定NDV强、弱毒毒株和H9AIV毒株的血凝(HA)效价,并用血清分别作血凝抑制(HI)试验。将测定好的病毒液按不同比例混合,测定HA效价及血清对其抑制效价后接种SPF鸡胚。收获死胚尿囊液后测定HA、HI效价。结果显示,H9AIV和NDV之间存在比较... 详细信息

先测定NDV强、弱毒毒株和H9AIV毒株的血凝(HA)效价,并用血清分别作血凝抑制(HI)试验。将测定好的病毒液按不同比例混合,测定HA效价及血清对其抑制效价后接种SPF鸡胚。收获死胚尿囊液后测定HA、HI效价。结果显示,H9AIV和NDV之间存在比较严重的干扰现象。

关键词：鸡新城疫 H9亚型禽流行性感冒血凝抑制试验病毒干扰

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H5N1亚型禽流感病毒HA糖基化位点缺失突变株的构建及生物学特性

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病毒学报 2013年第5期29卷 495-499页

作者：张晓剑李彦芳熊丽平陈素娟彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室禽类预防医学教育部重点实验室扬州225009

不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因... 详细信息

不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因序列测定和免疫印迹分析证实已成功去除了特定糖基化位点。158位糖基化位点缺失突变株rS△158在鸡胚中的EID50和MDCK细胞上TCID50比野生型rS略低,空斑直径显著减小;而单独去除169位和290位糖基化位点的rS△169和rS△290的EID50和TCID50略高于野生型rS,空斑直径相近,但空斑数要比后者高出10倍以上。所有突变株及野生型病毒在CEF上增殖速率相同,对SPF鸡均是高致病性的。因此,糖基化位点可影响病毒的体外增殖,但结果因细胞而异。

关键词： H5N1亚型禽流感 HA 糖基化位点突变

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携带新城疫病毒DNA疫苗的鼠伤寒沙门氏菌及其安全性与免疫效力

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微生物学报 2005年第6期45卷 937-941页

作者：潘志明焦新安黄金林殷月兰唐丽华张辉张晓明张小荣刘秀梵扬州大学生物科学与技术学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RTPCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株JS5F基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1F。将pVAX1F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,... 详细信息

根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RTPCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株JS5F基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1F。将pVAX1F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1F)。重组菌以不同剂量口服免疫1日龄雏鸡,结果表明,细菌对雏鸡具有良好的安全性,且不影响鸡的增重。将SL7207(pVAX1F)分别以108CFU和109CFU的剂量3次口服免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡,抗体检测结果显示,在三免后1周,SL7207(pVAX1F)109CFU剂量组的血清抗体效价与空载体组之间存在显著性差异(p<0.05)。重组菌两个剂量组在首免后2周开始出现粘膜抗体,并于二免后2周和3周达到较高水平。免疫保护试验结果显示,SL7207(pVAX1F)109CFU剂量组的保护率为77.27%,与空载体组之间存在显著性差异(p<0.05)。

关键词：减毒沙门氏菌 DNA疫苗新城疫病毒安全性免疫效力

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直接酶联免疫吸附法和聚合酶链反应联合检测沙门菌的应用

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中华预防医学杂志 2004年第5期38卷 331-334页

作者：黄金林焦新安潘志明文其乙孙林刘秀梵扬州大学生物科学与技术学院 225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

目的　通过比较试验 ,得到准确、快速的沙门菌检测方法。方法　 2 2 8株沙门菌经过前增菌、选择性增菌后 ,采用在聚合酶链反应 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 ,并将 2种快速检测方法进行比较研究。结果　PCR法的敏感性优于直接... 详细信息

目的　通过比较试验 ,得到准确、快速的沙门菌检测方法。方法　 2 2 8株沙门菌经过前增菌、选择性增菌后 ,采用在聚合酶链反应 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 ,并将 2种快速检测方法进行比较研究。结果　PCR法的敏感性优于直接ELISA法 ,2种方法的检测符合率达 99%以上。直接ELISA结合PCR法对饮食行业工作人员健康检查的 15 4 6份人粪便样品进行检测 ,同时以国家标准方法为参照 ,直接ELISA法的敏感性和特异性达 10 0 %和 97 14 % ,PCR法的敏感性和特异性均为 10 0 %。结论　优化的沙门菌检测程序是对大量样品采用直接ELISA筛检 ,除去大量阴性样品 ,阳性样品用PCR法作进一步鉴定 ;血清型的确定用国家标准方法。

关键词：沙门菌 PCR法酶联免疫吸附法 ELISA法联合检测聚合酶链反应敏感性人粪比较试验样品

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表达H9亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性

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中国兽医学报 2003年第4期23卷 347-349页

作者：冀德君彭大新刘红旗陈素娟吴艳涛高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点实验室江苏扬州225009

将表达 H9亚型禽流感病毒 HA基因重组鸡痘病毒疫苗连续传代至 30代 ,取第 10、2 0、30代重组病毒作为受检代次 ,进行外源基因片段的克隆与测序 ,以间接免疫荧光试验检验各代次的表达 ,并以第 10、2 0、30代重组鸡痘病毒疫苗进行免疫保... 详细信息

将表达 H9亚型禽流感病毒 HA基因重组鸡痘病毒疫苗连续传代至 30代 ,取第 10、2 0、30代重组病毒作为受检代次 ,进行外源基因片段的克隆与测序 ,以间接免疫荧光试验检验各代次的表达 ,并以第 10、2 0、30代重组鸡痘病毒疫苗进行免疫保护效力试验。对各代次模板进行 PCR反应 ,分别扩增出特异的 1.7kb外源基因片段 ,酶切位点与原始代次相同 ;各代次外源基因序列与原始序列相比 ,仅有 1个碱基发生变化 ,不涉及氨基酸的变化 ;免疫荧光试验显示各代次均有显著表达 ;各免疫组在免疫后第 7、10、14、2 0天的 HI抗体效价 (log2 )逐渐上升 ;攻毒后第 5天各免疫组排毒率与对照组相比差异显著 ,各免疫组之间无显著差异。结果表明 :此重组载体疫苗具有较好的遗传稳定性 ,经过 30代的传代后外源插入基因及其表达未见变化 ,免疫保护效力亦与原代一致。

关键词：禽流感 H9亚型禽流感病毒 HA基因重组鸡痘病毒疫苗遗传稳定性基因表达

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H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较及其表面基因序列分析

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中国兽医学报 2007年第1期27卷 26-30页

作者：石火英陈素娟高崧刘武杰刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

选择中国大陆最早分离的H9N2亚型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）A／Chicken／Guangdong／SS／94（H9N2）（缩写为SS株）和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIV A／Chicken／Shanghai／F／98（H9N2）（缩写为F株）为研究对象，对其在SPF鸡体内的复制能力和传播途径特性比较后发现，F株在4周龄SPF鸡气管中的复制能力高于SS株，F株可以经气溶腔传播途径传播。SS株不能经气溶腔传播途径传播；利用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法获取F株和SS株的HA和NA基因的cDNA，序列分析得知，F株和SS株的HA和NA基因的同源性分别是96．6％和98．1％；HA基因的裂解位点氨基酸序列都是PARSSR↓GL。但有5个氨基酸的盖异，即166位N（F）→D（SS）、198位A（F）→V（SS）、217位V（F）→I（SS）、335位G（F）→R（SS）、504位L（F）→S（SS）；2株病毒的NA基因在63～65住都存在氨基酸缺失，但在NA基因红细胞吸附位点的氨基酸序列不同，分别是IKKD—SRSG（F）和IKEDLRSG（SS）。F株和SS株的传播特性差异是否与其表面基因序列有关，有待进一步研究。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒 F株 SS株传播途径 HA和NA基因

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