检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 605-609页

作者：云水丽杨勇王小波卢焱炜高崧吴艳涛高以明彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 南通金太阳科技饲料有限公司江苏南通4314448 南京出入境检验检疫局江苏南京210001

从江苏某免疫鸭场的病死鸭中分离出1株细菌,经形态特性、生化试验、PCR扩增和血清型鉴定,证明该菌为血清11型的鸭疫里默氏杆菌(RA)。人工感染试验显示,106CFU/mL RA经肌肉注射后可导致鸭发病死亡,病死鸭的多个脏器组织均可分离到细菌,... 详细信息

从江苏某免疫鸭场的病死鸭中分离出1株细菌,经形态特性、生化试验、PCR扩增和血清型鉴定,证明该菌为血清11型的鸭疫里默氏杆菌(RA)。人工感染试验显示,106CFU/mL RA经肌肉注射后可导致鸭发病死亡,病死鸭的多个脏器组织均可分离到细菌,而滴鼻接种引起症状所需的细菌剂量为108CFU/mL;对106CFU/mL细菌肌肉注射致死鸭的脏器进行细菌计数,以法氏囊的含菌量最高;病理学变化涉及心、肝、脾、肺、胰、脑、肠粘膜和法氏囊。结果表明,江苏地区存在新的RA血清型,法氏囊是该细菌感染的一个重要靶器官。

关键词：鸭疫里默氏杆菌血清型法氏囊

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不同动物源新城疫病毒感染不同种属细胞的病变观察

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中国家禽 2009年第23期31卷 18-21页

作者：高以明张敬友王水明柯家法李超美朱雪良张扬严继宁黄立业任晓进吴艳涛刘文博南京农业大学动物医学院江苏南京210095 南京出入境检验检疫局江苏南京210001 江苏出入境检验检疫局江苏南京210001 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

用10株不同动物源的新城疫病毒F48E8,LaSota、LaSota-GFP、ZJ1、ZJ1-GFP、JS-4-05-Go、GX-1-05-Ch、JS-1-07-Os、JS-1-07-Du、JS-1-07-Pi等毒株分别感染鸡胚、鹅胚、鸭胚成纤维细胞、PK-15、Dulac、FK81、MDCK、Vero、Hela多种不同动物来源的传代细胞系,通过对病毒感染细胞后病变的观察、ZJ1-GFP及LaSota-GFP两个病毒感染细胞后细胞中绿色荧光蛋白指示的病变,了解不同的毒株对不同细胞感染性的差别。结果表明,不同毒力、不同动物源的新城疫病毒致不同种属细胞病变的作用不同,产生病变的时间有差异,强毒F48E8等毒株感染细胞后48～72h可以引起几种禽源成纤维细胞全部裂解,而哺乳动物来源的细胞在60～120h细胞发生病变,且病变也不如禽源成纤维细胞严重,出现了细胞的圆缩。弱毒株在胰酶处理后感染细胞,72h以后出现明显细胞病变,引起的哺乳动物细胞病变不明显。受试毒株的动物种属来源与细胞的致病性没有明显相关性。

关键词：新城疫病毒成纤维细胞传代细胞系绿色荧光蛋白致病性感染性

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应用DNA芯片技术研究体外表达禽致病性大肠杆菌可能致病基因

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微生物学报 2008年第1期48卷 103-111页

作者：宦海霞周琼赵李祥高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

应用DNA芯片研究禽致病性大肠杆菌可能致病基因的表达。构建禽致病性大肠杆菌毒力基因、潜在毒力基因的DNA芯片,应用基因芯片技术对同属O2血清型的禽高致病性大肠杆菌E058株和低致病性大肠杆菌E526株在体外LB培养基和鸡血清培养状态下... 详细信息

应用DNA芯片研究禽致病性大肠杆菌可能致病基因的表达。构建禽致病性大肠杆菌毒力基因、潜在毒力基因的DNA芯片,应用基因芯片技术对同属O2血清型的禽高致病性大肠杆菌E058株和低致病性大肠杆菌E526株在体外LB培养基和鸡血清培养状态下进行差异表达分析。结果:在体外LB静置培养状态下,低致病株E526与高致病株E058相比共有16个差异基因,均为下调基因。在鸡血清静置培养中,E526与E058相比共有15个差异基因,均为下调基因。应用基因芯片成功筛选了禽致病性大肠杆菌在体外不同条件下的毒力基因及可能毒力基因中差异表达基因,表明一些铁摄取系统相关基因对APEC的毒力较重要,同时也筛选出了一些新的可能致病基因aes-1,aes-2,aes-3,aes-4,aes-6,aes-8,aes-10,aes-13,aes-15,aes-31等。

关键词：禽致病性大肠杆菌毒力基因体外培养基因表达 DNA芯片

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载体表达的siRNA分子对猪圆环病毒2型复制的抑制作用

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微生物学报 2008年第11期48卷 1507-1513页

作者：王海燕刘文博高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】寻找一种基于RNA干扰技术的猪圆环病毒2型感染的防控方法。【方法】根据猪圆环病毒2型毒株基因组核苷酸序列,设计了3条特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)分子,其中2条针对猪圆环病毒1型和2型复制酶基因(rep),1条针... 详细信息

【目的】寻找一种基于RNA干扰技术的猪圆环病毒2型感染的防控方法。【方法】根据猪圆环病毒2型毒株基因组核苷酸序列,设计了3条特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)分子,其中2条针对猪圆环病毒1型和2型复制酶基因(rep),1条针对猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因(cap),将合成的DNA片段退火形成双链,分别连接到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ ZsGreen载体鼠源U6启动子下游,转化大肠杆菌得到阳性克隆,测序鉴定后分别命名为Retro-SH1,Retro-SH4,Retro-SH6。用上述质粒转染PCV2感染前、后的Dulac细胞及肌肉注射PCV2感染前、后的BALB/c小鼠,应用实时定量PCR试验评价其对病毒在细胞及小鼠体内复制的抑制作用,免疫组化法检测脾脏中病毒的存在。【结果】感染PCV2前或后转染500ng Retro-SH1,Retro-SH4,Retro-SH6质粒能有效抑制PCV2在Dulac细胞上的复制,抑制率最高可达99%以上,对10株不同来源的临床分离株在细胞中复制的抑制作用同样明显,且不同毒株间差异不大。动物试验中,肌肉注射10μg上述不同siRNA分子对小鼠体内PCV2的复制有一定的抑制作用,其抑制率在26%至99%之间。【结论】载体表达的siRNA分子可能成为防控猪圆环病毒2型感染的一种新工具。

关键词： RNA干扰猪圆环病毒2型复制抑制

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嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆的构建及其对小鼠的免疫原性

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微生物学报 2008年第9期48卷 1234-1240页

作者：宋益朱丽娜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】本研究旨在构建嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆。【方法】利用PCR技术扩增PCV2 ORF2,克隆入缺失PCV1 ORF2的pSK-PCV1△ORF2中,得到pSK-sPCV1-2。该重组质粒中包含嵌合型PCV1-2全基因组,通过不完全酶切的方法,将嵌合型PCV1-... 详细信息

【目的】本研究旨在构建嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆。【方法】利用PCR技术扩增PCV2 ORF2,克隆入缺失PCV1 ORF2的pSK-PCV1△ORF2中,得到pSK-sPCV1-2。该重组质粒中包含嵌合型PCV1-2全基因组,通过不完全酶切的方法,将嵌合型PCV1-2全基因组串联入pSK载体中,得到含串联双拷贝的嵌合型PCV1-2感染性DNA克隆。【结果】经序列测定,获得含串联双拷贝的嵌合型PCV1-2感染性DNA克隆。PCV1-2嵌合病毒接种BALB/c小鼠,用间接ELISA方法对接种后7、14、21、28、35、42d的小鼠进行血清抗体检测。结果显示从接种后14d开始,即有部分小鼠产生了针对PCV2Cap蛋白的特异性抗体;至接种后42d,几乎全部接种小鼠的血清均呈阳性。【结论】构建了PCV1-2型感染性DNA克隆,该嵌合病毒能够激发机体产生体液免疫应答。

关键词： PCV1 PCV2 ORF2基因嵌合型DNA克隆

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转座子随机插入鉴定肠炎沙门氏菌生物膜形成相关基因

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微生物学报 2008年第7期48卷 869-873页

作者：董洪燕张小荣潘志明彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】生物膜在沙门氏菌的致病性和引起沙门氏菌食物中毒等方面起着重要作用,本研究为了鉴定影响沙门氏菌生物膜形成的基因。【方法】利用结晶紫染色定量法对74株鸡源的肠炎、鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌进行生物膜测定,选择生物膜生长较... 详细信息

【目的】生物膜在沙门氏菌的致病性和引起沙门氏菌食物中毒等方面起着重要作用,本研究为了鉴定影响沙门氏菌生物膜形成的基因。【方法】利用结晶紫染色定量法对74株鸡源的肠炎、鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌进行生物膜测定,选择生物膜生长较好的肠炎沙门氏菌C050041,采用转座子随机插入法构建突变株库。【结果】84%的鸡源沙门氏菌菌株可在塑料表面形成生物膜;通过转座子插入获得1924个突变株,筛选的生物膜降低突变株经生长曲线测定、测序和序列比对及Southern blot分析鉴定出15个插入基因,它们分别为metE、ompR、rpoS、rfaG、rfaJ、rfaK、rfaP、rfbH、rhlE、spiA、steB、tpx、ybdN和2个未知功能的基因。【结论】我们鉴定出了多个影响生物膜形成的新基因,这些基因的发现为进一步研究沙门氏菌生物膜形成的调控机制,研制减毒沙门氏菌疫苗奠定了基础。

关键词：沙门氏菌转座子生物膜突变株基因

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猪源大肠杆菌(ETEC、STEC、AEEC)毒力基因及其与O抗原型的关系

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微生物学报 2008年第7期48卷 857-862页

作者：陈祥赵李祥高崧苗晓青焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室/江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

【目的】揭示从我国部分地区仔猪腹泻或水肿病病猪体内分离到的300个大肠杆菌分离株所属病原型(pathotype)、毒力基因及其与O血清型的关系。【方法】O血清型采用常规的凝集试验进行测定,毒力基因采用PCR方法检测。【结果】通过对这300... 详细信息

【目的】揭示从我国部分地区仔猪腹泻或水肿病病猪体内分离到的300个大肠杆菌分离株所属病原型(pathotype)、毒力基因及其与O血清型的关系。【方法】O血清型采用常规的凝集试验进行测定,毒力基因采用PCR方法检测。【结果】通过对这300个分离株的O血清型及其毒素、紧密素和黏附素基因进行鉴定,结果显示除50株未定型、17株自凝外,测定出233个分离株的血清型,这些分离株覆盖了45个血清型,其中以O149、O107、O139、O93和O91为主,共133株,占定型菌株的57.1%;拥有estⅠ、estⅡ、elt、stx2e和eaeA基因的菌株分别为102(34.0%)、190(63.3%)、81(27.0%)、57(19.0%)和54(18.0%)株;分离株中有51株K88基因阳性(其中菌毛表达率为100%),75株F18基因阳性(其中菌毛表达率为50.7%),在K88菌株中,O149血清型与estⅠ或estⅡ+elt密切相关,在F18菌株中,O107血清型与estⅠ或estⅡ、O139血清型与stx2e紧密相关。依其毒力特征可将这些分离株分为以下6种类型:ETEC、STEC、AEEC、ETEC/STEC、AEEC/ETEC和AEEC/ETEC/STEC,分别拥有190、24、36、32、17和1个菌株,占分离株的63.3%、8.0%、12.0%、10.7%、5.7%和0.3%。通过分析这些分离株的O血清型、毒素类型和黏附素型之间的相关性:猪源ETEC以O149、O107、O93和O98等血清型为主,O149:K88菌株主要与estⅡ或estⅡ+elt肠毒素相关,O107:F18菌株主要与estⅡ相关,O93和O98血清型菌株主要与estⅡ肠毒素相关;STEC菌株以O139:F18血清型为主,拥有stx2e;AEEC菌株拥有紧密素,无明显优势血清型;ETEC/STEC菌株以O107:F18和O116:F18血清型为主,主要与estⅠ+stx2e或estⅡ+stx2e密切相关,ETEC/AEEC菌株以O91和O107血清型为主,全部拥有肠毒素estⅠ和紧密素基因。【结论】我国至少存在6种病原型的猪肠道致病性大肠杆菌,其中ETEC为我国部分地区猪大肠杆菌病的主要病原,同时其病原型日益复杂。

关键词：仔猪大肠杆菌血清型毒力基因产肠毒素大肠杆菌产志贺毒素大肠杆菌黏附与脱落性大肠杆菌

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新城疫分离毒HN蛋白的抗原性初步分析及分子特性研究

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微生物学通报 2008年第1期35卷 87-93页

作者：姚春峰仇旭升刘文博顾敏吴双曹永忠刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

运用针对NDV囊膜糖蛋白(HN)的单克隆抗体(MAbs),对2005～2006年间自我国江苏和广西部分地区的20株NDV分离株进行排谱试验,初步分析了不同毒株之间HN蛋白的抗原表位差异;并应用RT-PCR技术成功扩增了其HN基因整个编码区,经克隆、测序最终... 详细信息

运用针对NDV囊膜糖蛋白(HN)的单克隆抗体(MAbs),对2005～2006年间自我国江苏和广西部分地区的20株NDV分离株进行排谱试验,初步分析了不同毒株之间HN蛋白的抗原表位差异;并应用RT-PCR技术成功扩增了其HN基因整个编码区,经克隆、测序最终获得13株鸡源NDV与7株鹅源NDV HN基因的编码区序列,分析测定核苷酸序列及推导的氨基酸序列,并将鹅源NDV与鸡源NDV相应序列进行了比较。结果单抗排谱试验表明,20株NDV分离株之间HN蛋白的抗原表位存在差异;测序结果表明,测定的HN基因的编码区长度皆为1716nt编码571个氨基酸;分离株中18株基因VⅡ型NDV分离株之间HN基因编码区核苷酸序列具有较高的同源性,达94.8%～100%;与近几年国内流行的其它基因VⅡ型NDV之间的核苷酸序列同源性为92.1%～99.6%。对其推导的HN蛋白一级结构中潜在的糖基化位点及HN蛋白细胞受体结合相关区域的氨基酸序列等进行了比较分析。结果显示,单抗排谱差异显著株在部分氨基酸位点发生了突变;同时揭示我国部分地区同期流行的鹅源NDV与鸡源NDV HN基因之间具有较近的亲缘关系。

关键词：新城疫病毒单克隆抗体 HN基因序列分析

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新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的安全性及免疫效力

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中国兽医科学 2008年第2期38卷 116-119页

作者：张体银王光锋孙蕾梁萍刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

将重组鸡痘病毒rFPVLP-SF分别皮下接种1日龄SPF鸡和26日龄商品鸡,评价其安全性和免疫效力。SPF鸡接种后除282E4株鸡痘病毒组在接种部位出现痘斑外,其他组鸡无任何临床症状。抗体检测结果表明,免疫接种后rFPVLP-SF组鸡的血清抗体水平没... 详细信息

将重组鸡痘病毒rFPVLP-SF分别皮下接种1日龄SPF鸡和26日龄商品鸡,评价其安全性和免疫效力。SPF鸡接种后除282E4株鸡痘病毒组在接种部位出现痘斑外,其他组鸡无任何临床症状。抗体检测结果表明,免疫接种后rFPVLP-SF组鸡的血清抗体水平没有显著变化,免疫后第21 d以1×105ELD50的F48E8株NDV滴鼻攻毒,观察14 d,rFPVLP-SF和油乳剂灭活疫苗免疫鸡的保护率分别为92%和100%,二者没有显著差异;大空斑株鸡痘病毒组和攻毒对照组鸡均全部死亡。结果显示,该重组病毒具有良好的安全性和免疫效力,有一定的应用前景。

关键词：新城疫病毒 F基因重组鸡痘病毒安全性免疫效力

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一株家养野猪源猪圆环病毒2型的分离与鉴定

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微生物学通报 2008年第11期35卷 1760-1763页

作者：王海燕高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用PCR方法从临诊疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)家养野猪病例的淋巴结和脾脏中扩增出预期长度的猪圆环病毒2型(PCV2)的DNA片段,在Dulac细胞中进行分离和培养,扩增全基因组序列后进行同源性分析。结果显示,扩增产物与家猪源参考... 详细信息

应用PCR方法从临诊疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)家养野猪病例的淋巴结和脾脏中扩增出预期长度的猪圆环病毒2型(PCV2)的DNA片段,在Dulac细胞中进行分离和培养,扩增全基因组序列后进行同源性分析。结果显示,扩增产物与家猪源参考毒株的序列同源性均在98%以上,该病毒与家猪源病毒差异不大。

关键词：家养野猪猪圆环病毒2型分离鉴定

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