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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会

作者：彭宜薛峰李彦芳陈浩彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏出入境检验检疫局盐城国家级珍禽自然保护区

前言候鸟等野生禽类,特别是野生水禽是流感病毒的天然宿主和贮存库,目前为止所有16个H A亚型和9个NA亚型的A型流感病毒已经在野生鸟类体内检测到,其中带毒最多的种类是鸭科鸟类。

关键词：禽流感病毒 Yanchen mallard 克隆和序列分析全基因组

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选择性捕获禽病原性大肠杆菌体内转录序列

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微生物学报 2007年第3期47卷 407-412页

作者：陈祥高崧王晓泉焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

采用选择性捕获转录序列(SCOTS)方法鉴定禽病原性大肠杆菌E037株(血清型O78)在感染SPF鸡过程中的转录表达基因.通过总RNA分离、cDNAs合成、PCR扩增和SCOTS对cDNAs选择和致病性特异转录序列的富集,致病性特异的cDNAs被分离鉴定,共获得31... 详细信息

采用选择性捕获转录序列(SCOTS)方法鉴定禽病原性大肠杆菌E037株(血清型O78)在感染SPF鸡过程中的转录表达基因.通过总RNA分离、cDNAs合成、PCR扩增和SCOTS对cDNAs选择和致病性特异转录序列的富集,致病性特异的cDNAs被分离鉴定,共获得31个转录序列(命名为aec),其中分别有2、1、4、14、2和8个aec序列与黏附素、LPS的合成、铁的摄取系统、质粒编码基因、噬菌体编码基因和一些其它功能基因相关;从气囊中分离到16个aec序列,心包膜中分离到15个aec序列;有3种与质粒编码基因相关序列在气囊和心包膜中都被分离到.结果显示APEC致病性特异序列包括黏附素、LPS的合成、铁的转运、质粒编码基因、噬菌体编码基因和一些其它功能基因等.通过SCOTS方法建立了一种体内表达致病性特异基因的方法和APEC在自然宿主感染模型中致病性相关基因的表达谱的筛选方法.

关键词：禽病原性大肠杆菌选择性捕获转录序列 O78血清型体内

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尿道致病性大肠杆菌HEC4株和禽源致病性大肠杆菌E058株毒力相关特性的比较(英文)

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微生物学报 2007年第5期47卷 918-922页

作者：宦海霞周琼赵李祥高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

对人尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)HEC4株和禽致病性大肠杆菌(avian pathogen-ic Escherichia coli,APEC)E058株进行毒力基因和其他相关特性的比较,结果显示,它们具有一些共同的毒力基因,包括一些存在于APE... 详细信息

对人尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)HEC4株和禽致病性大肠杆菌(avian pathogen-ic Escherichia coli,APEC)E058株进行毒力基因和其他相关特性的比较,结果显示,它们具有一些共同的毒力基因,包括一些存在于APEC中一个大的可传递质粒上的基因;同时,它们也具有一些相似的生化特性。对SPF鸡的致病性试验显示,这两株分离株具有相似的致病力。因此,对于APEC和UPEC的相关性,以及APEC是否有可能导致人尿道感染或者成为UPEC的毒力基因贮主,有待进一步研究。

关键词：尿道致病性大肠杆菌禽源致病性大肠杆菌毒力基因致病性

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用反向遗传技术致弱基因VIId型鹅源新城疫病毒ZJI株

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微生物学报 2007年第2期47卷 197-200页

作者：胡顺林孙庆吴艳涛张艳梅刘秀梵刘玉良王曲直扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与3个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫... 详细信息

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与3个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫病毒粒子。设计两对引物,经overlapPCR方法将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸后,替换pNDV/ZJI上的对应序列,构建了转录载体pNDV/ZJIFM,将pNDV/ZJIFM与3个辅助表达质粒共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了致弱的基因VIId型鹅源新城疫病毒NDV/ZJIFM,获救病毒的鸡胚最小致死剂量平均死亡时间(MDT)大于120h,同时该病毒的脑内接种致病指数(ICPI)为0.16,上述结果表明,获救病毒的毒力已被致弱,是一个较为理想的疫苗候选株。

关键词：新城疫病毒拯救致弱基因Ⅶd型

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江苏部分地区食源性和人源沙门氏菌的多重耐药性研究

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微生物学报 2007年第2期47卷 221-227页

作者：王晓泉焦新安刘晓文陈祥宦海霞刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

从江苏省部分地区收集了117个沙门氏菌分离株,其中食物源和人源菌株分别有81株和36株。16种抗生素敏感性试验表明,有111个分离株对2种或2种以上的抗生素有耐药性,人源沙门氏菌分离株的抗生素耐药率比食物源的高,单一抗生素以链霉素耐药... 详细信息

从江苏省部分地区收集了117个沙门氏菌分离株,其中食物源和人源菌株分别有81株和36株。16种抗生素敏感性试验表明,有111个分离株对2种或2种以上的抗生素有耐药性,人源沙门氏菌分离株的抗生素耐药率比食物源的高,单一抗生素以链霉素耐药率(92.3%,108/117)最高。对5种或5种以上抗生素耐药的分离株有59株(50.4%),其中对特定六种抗生素:氨苄青霉素、氯霉素、链霉素、磺胺、四环素和卡那霉素耐药(ACSSuTK,R型)的菌株有12株。设计18对耐药基因和I类整合子保守区的引物,对36株有不同来源和耐药特征的多重耐药菌株进行耐药基因和I类整合子的检测,PCR扩增结果与抗生素敏感性表型一致。有30株细菌携带有I类整合子,大小为0.3、0.6、1.0、1.2和1.6kb,其中1.6kb(aadA5-dfr17)大小的整合子在25株细菌中分布(24/36)。接合试验表明,氨苄青霉素、氯霉素、链霉素、甲氧苄氨嘧啶和四环素的耐药特性是由接合性质粒携带。结果显示,耐药基因多数由I类整合子和质粒携带,可以通过接合试验发生转移,可移动的DNA成分可能在耐药特性的转移和分布中起到重要作用。

关键词：沙门氏菌多重耐药性整合子接合

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禽病原性大肠杆菌tsh突变株的构建及分离株tsh基因的检测

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畜牧兽医学报 2007年第5期38卷 493-499页

作者：陈祥刘静苗晓青王晓泉高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

运用基因重组方法将庆大霉素(Gentamycin,GM)抗性基因连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下此tshF-GM-tshR片段,再将之克隆到pMEG-37... 详细信息

运用基因重组方法将庆大霉素(Gentamycin,GM)抗性基因连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下此tshF-GM-tshR片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建出自杀性载体pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到含tsh基因的受体APEC E037株中,根据同源重组原理,筛选出tsh基因缺失的E037突变株,命名为E037(Δtsh).E037和E037(Δtsh)株对1日龄鸡的LD50分别为105.6CFU和109.0CFU,动物感染性试验表明E037(Δtsh)株在内脏器官和血液中的感染能力和大肠杆菌病变程度均有明显下降.在243株禽源分离株中,有167株为tsh+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4%(146/167)、12.6%(21/1 67)和0%(0/167);O1、O2和O78血清型的高致病株占所在血清型分离株的89.5%～100%,而其它血清型的高致病株仅占其它分离株的53.3%,差异极显著(P＜0.01).结果显示tsh+株大多数为高致病性菌株,且其致病性与血清型的种类有一定的相关性,温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子.

关键词：禽病原性大肠杆菌同源重组温度敏感性血凝素突变体

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鸡IL-2、IL-18、IFN-γ cDNA和CpG DNA在减毒沙门菌运送H5亚型禽流感DNA疫苗中的佐剂作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第6期27卷 570-573页

作者：胡青海潘志明张成全焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室 225009

目的探讨鸡IL-2、IL-18、IFN-γcDNA和CpG DNA在减毒沙门菌运送H5亚型禽流感DNA疫苗中的佐剂作用。方法将携带禽流感病毒(AIV)DNA疫苗的重组沙门菌SL7207(pVAX1-HA- IL2)、SL7207(pVAX1-HA-IL18)、SL7207(pVAX1-HA-IFN-γ)、SL7207(pVAX1-HA-CpG)、SL7207(pVAX1-HA)和SL7207(pVAX1)经口服和滴鼻途径首免1日龄商品代伊莎褐蛋鸡,测定免疫鸡的体液和黏膜免疫应答水平,并进行攻毒保护试验。结果二免后3周,SL7207(pVAX1-HA-CpG)、SL7207(pVAX1-HA- IFN-γ)免疫组以及SL7207(pVAX1-HA)和SL7207(pVAX1-IFN-γ)联合免疫组鸡产生了较高水平的特异性黏膜免疫应答(P<0.05),但重组菌免疫鸡血清中抗AIV HI抗体水平与空载体组相比差异无统计学意义。SL7207(pVAX1-HA-CpG)、SL7207(pVAX1-HA-IFN-γ)的免疫保护指数显著高于阴性对照组。结论初步观察佐剂效应依次为:CpG>IFN-γ>IL-18,IL-2未表现出佐剂效应。

关键词：佐剂减毒沙门菌 H5亚型禽流感 DNA疫苗

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表达致PWD和ED保护性抗原重组菌的免疫效力

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中国兽医学报 2007年第4期27卷 490-492页

作者：杨健美高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

重组菌BL21(pFSFaeG)是能够同时表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原(F4、F18、Stx2e)基因的基因工程重组菌。由IPTG诱导的重组菌制成抗原,经甲醛灭活后腹腔免疫小鼠,用间接ELISA法定期检测小鼠血清中的抗体产生情况,结果显示重组菌能够诱... 详细信息

重组菌BL21(pFSFaeG)是能够同时表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原(F4、F18、Stx2e)基因的基因工程重组菌。由IPTG诱导的重组菌制成抗原,经甲醛灭活后腹腔免疫小鼠,用间接ELISA法定期检测小鼠血清中的抗体产生情况,结果显示重组菌能够诱导小鼠产生针对上述3种保护性抗原的特异性抗体IgG。免疫攻毒保护试验表明,用大肠杆菌标准强毒株C83907(F4)、108/86(F18)和Stx2e毒素攻毒后,重组菌诱导产生的抗体能够对小鼠提供80%以上的保护。

关键词：大肠杆菌 PWD ED 重组菌抗体检测攻毒免疫保护

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表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性及生物安全性评价

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中国预防兽医学报 2007年第5期29卷 327-331页

作者：卢军胡传伟金乔彭大新刘文博高崧张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色;间接免疫荧光实验证明rFPV-g... 详细信息

为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色;间接免疫荧光实验证明rFPV-gB/R中的gB基因始终能稳定表达;序列测定结果表明,重组病毒在细胞上连续传30代、在SPF鸡上连续传5代后,gB基因序列没有发生任何变化;以0、10、20、30代重组病毒制成冻干疫苗进行的实验室免疫效力实验表明,细胞连续传代后rFPV-gB/R仍然保持了原有的免疫原性。可见重组鸡痘病毒gB基因的结构和免疫原性都是高度稳定的。为了评价rFPV-gB/R的生物安全性,我们将rFPV-gB/R通过SPF鸡连续传5代,检测病毒在鸡体的存在部位及其消长、生长繁殖性能和毒力变化;将rFPV-gB/R免疫鸡与未免疫鸡同笼饲养,攻击FPV-102E6强毒,以检测rFPV-gB/R感染鸡的接触传染性。结果显示,rFPV-gB/R在鸡体的存在时间大约为7d,在体内仅存在于接种部位;鸡体传代后痘病毒毒力有一定程度下降,gB基因核苷酸序列未发生任何变化;同居未免疫SPF鸡在痘病毒强毒攻击后全部发痘,可见重组病毒免疫鸡没有接触传染性,能在鸡体内稳定地传代,rFPV-gB/R具有高度的生物安全性。

关键词：鸡马立克氏病重组鸡痘病毒 gB基因遗传稳定性生物安全性

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致初生仔猪腹泻大肠埃希氏菌氨基糖苷类耐药性检测及AAC(3)-Ⅱ基因序列分析

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中国预防兽医学报 2007年第12期29卷 925-928页

作者：陈一兵苗晓青高崧彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

从1995年至2006年分离鉴定的菌株中选取173株致初生仔猪腹泻大肠杆菌,进行氨基糖苷类药物的药敏试验;根据耐氨基糖苷类药物主要钝化酶—氨基糖苷乙酰转移酶(aminoglycoside acetyltransferases,AAC)的基因序列,设计一对引物,PCR扩增耐... 详细信息

从1995年至2006年分离鉴定的菌株中选取173株致初生仔猪腹泻大肠杆菌,进行氨基糖苷类药物的药敏试验;根据耐氨基糖苷类药物主要钝化酶—氨基糖苷乙酰转移酶(aminoglycoside acetyltransferases,AAC)的基因序列,设计一对引物,PCR扩增耐药基因片段,探讨AAC基因的分布规律及其与氨基糖苷类抗生素耐药性的相关性。对上述分离株中90个耐庆大霉素的大肠杆菌分离株进行检测,结果表明aac(3)-Ⅱ为这些分离株的主要钝化酶,检出64株,检出率为71.1%;对其中的20株PCR产物进行测序,结果表明对耐庆大霉素而不耐丁胺卡那霉素菌株aac(3)-Ⅱ基因保守区为213位A、232位C、527位A;对应的推导氨基酸序列中71位为赖氨酸、78位为脯氨酸和176位为谷氨酸。两者均耐药的菌株aac(3)-Ⅱ基因保守区具213位G、232位T、527位G,对应的推导氨基酸序列中71位为谷氨酸、78位为亮氨酸、176位为谷氨酰胺。

关键词：大肠杆菌耐药性乙酰转移酶(AAC) aac(3)-Ⅱ

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