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第15届世界禽病大会、中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

野生水禽一般被认为是 A 型流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)的天然贮存库,在其中病毒处于进化静止状态。在东亚和东南亚有成十亿计的家养水禽放养,在家养水禽与野生水禽之间,在家养水禽与其他动物和人之间形成两个生态界面。水禽通常抵... 详细信息

野生水禽一般被认为是 A 型流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)的天然贮存库,在其中病毒处于进化静止状态。在东亚和东南亚有成十亿计的家养水禽放养,在家养水禽与野生水禽之间,在家养水禽与其他动物和人之间形成两个生态界面。水禽通常抵抗甚至对鸡表现很强毒力的 AIV 和 NDV 毒株,感染而不产生明显临床疾病。在过去10年中 H5N1 AIV 和 NDV 强毒一直在不断进化,其结果之一就是这两种病毒都出现了对水禽毒力增强的毒株。本文将综述近年来 AIV (尤其是 H5N1亚型)和 NDV 在家养水禽感染和临床疾病的新进展,讨论它们在这两种病毒的进化、维持及相关疾病流行中所起的重要作用,并对改进这两种重要痰病控制方法提出建议。

关键词： NDV AIV 临床疾病新城疫病毒

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2005年、2006年江苏地区猪高热病病例中PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV感染的多重PCR检测及PRRSV分离株ORF5、Nsp2基因序列分析

2005年、2006年江苏地区猪高热病病例中PCV2、PPV、PRV、PRRSV和C...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：叶俊平盛瑜朱丽娜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用建立的两个多重PCR方法,对2005年、2006年收集于江苏地区的211份猪高热病疑似病料进行检测,结果108份病料为PRRSV阳性,阳性率为51.2％;93份病料为PCV2阳性,阳性率为44.1％;22份病料为CSFV阳性,阳性率为10.4％;8份病料为PPV阳性,阳... 详细信息

应用建立的两个多重PCR方法,对2005年、2006年收集于江苏地区的211份猪高热病疑似病料进行检测,结果108份病料为PRRSV阳性,阳性率为51.2％;93份病料为PCV2阳性,阳性率为44.1％;22份病料为CSFV阳性,阳性率为10.4％;8份病料为PPV阳性,阳性率为3.9％;5份病料为PRV阳性,阳性率为2.4％。同时发现,2005年病料中PCV2感染的阳性率为21.2％,2006年为73.2％;2005年PRRSV的阳性率为38.1％,2006年为67.7％。2006年猪高热病疫情远比2005年严峻,PCV2和PRRSV可能在其中发挥了协同致病作用。对PRRSV分离株ORF5和Nsp2基因进行测序,发现2006年分离株Nsp2基因中有87个碱基的缺失.

关键词：猪繁殖呼吸综合征病毒猪圆环病毒猪细小病毒猪瘟病毒猪伪狂犬病病毒猪高热病

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以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗的构建及其免疫原性

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生物技术通讯 2007年第6期18卷 912-914页

作者：焦红梅潘志明崔一晨田华荣焦新安扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

目的:构建以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗,研究该疫苗的免疫原性。方法:以小鼠肝炎病毒S1基因的重组真核表达质粒pVAX1-S1免疫BALB/c小鼠,ELISA检测其诱导抗体产生情况;再将重组质粒pVAX1-S1电转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7... 详细信息

目的:构建以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗,研究该疫苗的免疫原性。方法:以小鼠肝炎病毒S1基因的重组真核表达质粒pVAX1-S1免疫BALB/c小鼠,ELISA检测其诱导抗体产生情况;再将重组质粒pVAX1-S1电转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,构建运送S1基因的重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1),口服免疫BALB/c小鼠,间接免疫荧光试验鉴定减毒沙门氏菌运送的DNA疫苗的免疫原性。结果:与pVAX1空载体对照组相比,重组真核表达质粒pVAX1-S1免疫组二免及三免后抗体水平分别存在显著性差异(P<0.05)和极显著性差异(P<0.01)。减毒沙门氏菌运送的DNA疫苗SL7207(pVAX1-S1)诱导小鼠产生了特异性的血清抗体。结论:构建的重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1)具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生特异性的体液免疫应答。这为进一步研制冠状病毒新型基因疫苗奠定了基础。

关键词：小鼠肝炎病毒 S1基因 DNA疫苗减毒沙门氏菌免疫原性

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1962-2006年鸡白痢沙门氏菌耐药性的演化

1962-2006年鸡白痢沙门氏菌耐药性的演化

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第15届世界禽病大会、中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：王晓泉焦新安潘志明陈祥吴双刘晓文刘秀梵江苏省人兽共患病学重点实验室江苏省人兽共患病学重点实验室江苏省人兽共患病学重点实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室

1962-2006年间在江苏等10个省市分离和收集鸡白痢沙门氏菌分离株,测定其对抗生素的敏感性,比较不同年代沙门氏菌耐药性的差异,探讨沙门氏菌分离株耐药机制,以及40多年来分离株耐药性的演化过程。用微量稀释法测定了17种抗生素对鸡白痢... 详细信息

1962-2006年间在江苏等10个省市分离和收集鸡白痢沙门氏菌分离株,测定其对抗生素的敏感性,比较不同年代沙门氏菌耐药性的差异,探讨沙门氏菌分离株耐药机制,以及40多年来分离株耐药性的演化过程。用微量稀释法测定了17种抗生素对鸡白痢沙门氏菌分离株的敏感性,设计了18对耐药基因的引物和Ⅰ类整合子保守区引物,提取分离株的基因组和质粒,用 PCR 方法扩增沙门氏菌分离株的耐药基因,并通过接合试验分析耐药性的转移。1962-1970年分离株对17种抗生素的耐药率一般都较低,耐药率最高为磺胺甲基异恶唑(32．1%),其他抗生素的耐药率不超过22%;上个世纪70年代分离株的耐药率开始上升,并增加了壮观霉素和复方新诺明的耐药菌株;90年代分离株的耐药率达到高峰,但磺胺甲基异恶唑的耐药菌株从81．8%下降到35．7%,菌株对氯霉素和卡那霉素产生极低的耐药,多重耐药菌株和单个抗生素的耐药高峰出现于1998年以后,耐药表型主要为 ASSuTTm;2000年以后出现萘啶酮酸耐药菌株,同时对氟喹诺酮类药物的敏感性下降。鸡白痢沙门氏菌在近44年时间内耐药基因的产生发生了变化,在1962-1979年中,对一种抗生素的耐药基因往往是单一的,同时Ⅰ类整合酶基因检测为阴性,说明这些菌株都不携带基因盒。1990-1997年,耐药基因表现出多样性,如四环素耐药基因可能为 tetA、tetB 或 tetG 基因。1998-1999年,与耐药表型对应,耐药基因开始复杂,而且出现了Ⅰ类整合子,说明这些分离株中可能存在含有耐药基因的基因盒。2000-2006年,从本研究中的分离株来看,耐药基因似乎没有1998-1999年分离株复杂,但是新出现了 sul1基因。鸡白痢沙门氏菌耐药基因主要有 blatem-1, tetA,sul2,strA-B 和 dfrA12基因,类整合子出现于1998年以后分离株,dfrA17-aadA5基因盒在沙门氏菌中广泛存在,每个Ⅰ类整合子阳性分离株都携带 dfrA17-aadA5。近40多年来分离株的耐药性逐渐上升,单个耐药高峰出现于1998年,但是鸡白痢沙门氏菌的耐药性远远低于志贺氏菌、食源性和人源沙门氏菌等]。耐药基因多数由 I 类整合子和质粒携带,可以通过接合试验发生转移,可移动的 DNA 成分可能在耐药特性的转移和分布中起到重要作用。

关键词：鸡白痢沙门氏菌耐药性 Ⅰ类整合子接合转移

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用反向遗传技术产生冷适应致弱的重组A型人流感病毒的研究

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免疫学杂志 2007年第3期23卷 335-338页

作者：杨鹏辉颜艳罗德炎邢丽刘秀梵王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

目的以鸡胚高度适应株A/PR/8/34株为重组流感病毒骨架,利用反向遗传技术拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒。方法对冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株的PB2基因片段,进行了全基因序列合成,同时人工引入PB2265(... 详细信息

目的以鸡胚高度适应株A/PR/8/34株为重组流感病毒骨架,利用反向遗传技术拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒。方法对冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株的PB2基因片段,进行了全基因序列合成,同时人工引入PB2265(N265S)氨基酸的突变。PB2基因片段通过与改造后的转录/表达载体pAD3000连接,构建PB2基因的拯救载体。该重组质粒与PR8进行“7+1”组合的病毒拯救,共转染COS-1细胞。结果经测序获得序列准确的拯救质粒pMDV-A-PB2,利用反向遗传技术成功拯救出了具有血凝性(1×25)的冷适应的重组A型流感病毒。结论利用反向遗传技术成功拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒,该系统为深入研究甲型人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础。

关键词：流感病毒反向遗传技术 cDNA 重组病毒

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以减毒沙门菌为载体布鲁氏菌DNA疫苗的构建及免疫原性分析

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免疫学杂志 2007年第5期23卷 486-490页

作者：周丽丽姚碧涛罗德炎焦新安刘秀梵王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

目的构建携带布鲁氏菌BLS-L7/L12融合基因的重组减毒沙门菌并进行免疫原性分析,为口服布鲁氏菌DNA疫苗研究奠定基础。方法将BLS-7/L12融合基因克隆到真核表达载体asd+-pVAX1,依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X45... 详细信息

目的构建携带布鲁氏菌BLS-L7/L12融合基因的重组减毒沙门菌并进行免疫原性分析,为口服布鲁氏菌DNA疫苗研究奠定基础。方法将BLS-7/L12融合基因克隆到真核表达载体asd+-pVAX1,依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd+-pVAX1-BLS-L7/L12)。以1×109CFU/只的剂量口服免疫Balb/C小鼠,3次免疫后进行免疫效果的评价。结果构建的重组减毒沙门菌质粒转染COS-7细胞经免疫组化和Western-blot试验证明BLS-L7/L12融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清和肠黏液中有特异性抗体IgG和sIgA产生。通过淋巴细胞增殖实验、细胞因子和CD分子测定表明DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论所构建的以重组沙门菌为载体口服布鲁氏菌DNA疫苗具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,且以细胞免疫应答为主。可作为潜在的布鲁氏菌新型疫苗。

关键词：布鲁氏菌 BLS-L7/L12 DNA疫苗伤寒沙门菌平衡致死系统

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家养水禽A型流感病毒和新城疫病毒的感染和临床疾病

家养水禽A型流感病毒和新城疫病毒的感染和临床疾病

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中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州 225009

野生水禽一般被认为是A型流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)的天然贮存库，在其中病毒处于进化静止状态。在东亚和东南亚有成十亿计的家养水禽放养，在家养水禽与野生水禽之间，在家养水禽与其他动物和人之间形成两个生态界面。水禽通常... 详细信息

野生水禽一般被认为是A型流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)的天然贮存库，在其中病毒处于进化静止状态。在东亚和东南亚有成十亿计的家养水禽放养，在家养水禽与野生水禽之间，在家养水禽与其他动物和人之间形成两个生态界面。水禽通常抵抗甚至对鸡表现很强毒力的AIV和NDV毒株，感染而不产生明显临床疾病。在过去10年中H5N1AIV和NDV强毒一直在不断进化，其结果之一就是这两种病毒都出现了对水禽毒力增强的毒株。本文将综述近年来AIV(尤其是H5N1亚型)和NDV在家养水禽感染和临床疾痛的新进展，讨论它们在这两种病毒的进化、维持及相关疾病流行中所起的重要作用，并对改进这两种重要痰病控制方法提出建议。

关键词：野生水禽 A型流感病毒新城疫病毒病毒感染

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禽病原性大肠杆菌ΔiroΔtsh缺失株的构建

禽病原性大肠杆菌ΔiroΔtsh缺失株的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：陈祥潘志明高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室/江苏省人兽共患病学重点实验室

通过分子生物学方法分别将绿色荧光蛋白(EGFP)和庆大霉素抗性基因(Gentamycin,GM)连接到PCR扩增的iro、tsh基因两端区域产生的2个目的基因片段之间,并分别插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带EGFP和GM标志的载体pUC18-iroBNEGFP和pU... 详细信息

通过分子生物学方法分别将绿色荧光蛋白(EGFP)和庆大霉素抗性基因(Gentamycin,GM)连接到PCR扩增的iro、tsh基因两端区域产生的2个目的基因片段之间,并分别插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带EGFP和GM标志的载体pUC18-iroBNEGFP和pUC18-tshFRGM,从中切下此3个片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体pMEG375-iroBNEGFP和pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到受体APEC E037株中,根据同源重组原理,分别筛选出E037基因缺失突变株E037(iro)、E037(tsh)和E037(iro tsh)。动物实验结果表明E037(iro)、E037(tsh)和E037(iro tsh)突变株的致病性均有了明显下降。铁系统和温度敏感性血凝素在APEC E037株的致病性和持续感染中发挥重要的作用,但两个基因的致病协同能力不明显。在243株禽源大肠杆菌中,有205株为iro+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为89.8%(184/205)、8.8%(18/205)和1.5%(3/205);有167株为tsh+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4%(146/167)、12.6%(21/167)和0%(0/167)。结果显示铁系统和温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子。

关键词：禽病原性大肠杆菌铁系统温度敏感性血凝素缺失突变株

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常规动物用活疫苗冻干保护剂的改良初探

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中国动物检疫 2007年第10期24卷 28-29页

作者：陈果亮杜元钊管清江李宝臣郭景露扬州大学兽医学院畜禽传染病农业部重点实验室中国动物卫生与流行病学中心易邦生物制品有限公司山东青岛266032

目前国内动物用活疫苗仍然以5%蔗糖脱脂奶作为冻干保护剂,其冻干外型稳定,易溶性良好,成本低廉,但其耐热性能差,对病毒的保护作用较差。本试验以鸡新城疫Lasota冻干活疫苗为例,分别以不同浓度的海藻糖取代蔗糖,进行冻干保护性试验,结果... 详细信息

目前国内动物用活疫苗仍然以5%蔗糖脱脂奶作为冻干保护剂,其冻干外型稳定,易溶性良好,成本低廉,但其耐热性能差,对病毒的保护作用较差。本试验以鸡新城疫Lasota冻干活疫苗为例,分别以不同浓度的海藻糖取代蔗糖,进行冻干保护性试验,结果表明海藻糖在2%以上时,对病毒的保护效果明显优于5%蔗糖脱脂奶组,证明其具有很好的应用前景。

关键词：冻干活疫苗海藻糖保护剂

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江苏省部分地区鹅源致病性大肠杆菌的分离、鉴定和耐药性分析

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饲料工业 2007年第15期28卷 62-64页

作者：宦海霞苗晓青周琼赵新年高崧扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室浙江东立绿源饲料有限公司

从江苏盐城、高邮等地区临诊上具有典型大肠杆菌病病变的病、死白鹅中分离到大肠杆菌99株,通过玻板凝集和试管凝集试验,除8株未能定型、3株自凝外,测定出88个分离株的血清型,这些分离株覆盖了34个血清型,其中以O107、O9这两个血清型为主... 详细信息

从江苏盐城、高邮等地区临诊上具有典型大肠杆菌病病变的病、死白鹅中分离到大肠杆菌99株,通过玻板凝集和试管凝集试验,除8株未能定型、3株自凝外,测定出88个分离株的血清型,这些分离株覆盖了34个血清型,其中以O107、O9这两个血清型为主,占定型菌株的34%(30/88),为我国禽源大肠杆菌的常见血清型。同时将这些分离株进行了15种抗菌药物的敏感试验,结果显示:99株分离株无多黏菌素耐药性,除1株对丁胺卡那耐药,2株中度敏感,其它均对丁胺卡那敏感,同时所有菌株均对多黏菌素有不同程度的敏感,可指导临床用药。

关键词：鹅源致病性大肠杆菌血清型药敏试验

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