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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者：石火英陈素娟高崧刘武杰刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

选择中国大陆最早分离的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV) A／Chicken／Guangdong／SS／94(H9N2)(缩写为SS株)和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIV A／Chicken／Shanghai／F／98(H9N2)(缩写为F株)为研究对象,对其在SPF鸡体内的复制能力和传播途径特性作了系统的比较,发现F株在4周龄SPF鸡气管中的复制能力高于SS株,F株可以经气溶胶传播途径传播,SS株不能经气溶胶传播途径传播。

关键词： H9N2亚型AIV F株 SS株传播途径 HA和NA基因序列

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抗志贺样毒素Ⅱ型变异体单克隆抗体的制备及特性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第6期22卷 807-808页

作者：杨健美高崧林矫矫刘金明陈兆国傅志强刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 中国农业科学院上海兽医研究所上海动物生物技术研究中心上海200232

志贺样毒素Ⅱ变异体(SLT-Ⅱe)是猪水肿病的主要致病因子之一,为了制备SLT-Ⅱe单克隆抗体(mAb),我们从TB1菌中用多粘菌素诱导提取了SLT-Ⅱe蛋白,并且用硫酸铵盐析沉淀法对该蛋白进行了提纯,以提纯蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤细胞技术... 详细信息

志贺样毒素Ⅱ变异体(SLT-Ⅱe)是猪水肿病的主要致病因子之一,为了制备SLT-Ⅱe单克隆抗体(mAb),我们从TB1菌中用多粘菌素诱导提取了SLT-Ⅱe蛋白,并且用硫酸铵盐析沉淀法对该蛋白进行了提纯,以提纯蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤细胞技术制备mAb。细胞融合后,培养上清经间接ELISA检测,共得到3株阳性杂交瘤细胞2E11、2H9和4F3,ELISA效价分别为1∶213、1∶213和1∶28,3株杂交瘤细胞培养上清分泌的mAb在Westernblot试验中均与提纯的毒素蛋白反应,在Vero细胞中和试验中均能够中和毒素对Vero细胞的毒性作用,从而为临床分离株SLT-Ⅱe产生的免疫学检测方法奠定了一定的基础。

关键词： SLT—Ⅱe 单克隆抗体特性鉴定

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用反向遗传技术致弱基因VIId型鹅源新城疫病毒ZJI株

用反向遗传技术致弱基因VIId型鹅源新城疫病毒ZJI株

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中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：胡顺林张艳梅孙庆刘玉良吴艳涛刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与三个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫... 详细信息

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与三个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫病毒粒子.设计两对引物,经overlap PCR方法将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸后,替换pNDV/ZJI上的对应序列,构建了转录载体pNDV/ZJIFM,将pNDV/ZJIFM与三个辅助表达质粒共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了致弱的基因VIId型鹅源新城疫病毒NDV/ZJIFM,获救病毒的鸡胚最小致死剂量平均死亡时间(MDT)大于120h,初步表明获救病毒的毒力已致弱,是一个较为理想的疫苗候选株.

关键词：新城疫病毒反向遗传技术致弱基因鹅

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马立克病毒超强毒株(Md5、RB1B)毒力试验

马立克病毒超强毒株(Md5、RB1B)毒力试验

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：甘军纪刘秀梵吴长新扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室 225009 扬州威克生物工程有限公司 225127 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室 225009

本试验同时对鸡马立克病毒(MDV)超强毒株Md5和RB1B在易感SPF鸡上进行毒力测定.结果表明,Md5和RB1B毒力相近,500PFU以上攻毒、MD发病率在80％以上,Md5+RB1B联合攻毒时,引起更明显的早期死亡和体重下降.

关键词：马立克病毒超强毒株毒力测定发病率

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H9N2亚型禽流感病毒复制特性的基因分析

H9N2亚型禽流感病毒复制特性的基因分析

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：石火英陈素娟孙蕾刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

为研究A/Chicken/Guangdong/SS/94（H9N2）和A/Chicken/Shanghai/F/98（H9N2）复制特性差异的原因,从分子水平上探讨中国大陆1998年H9N2亚型禽流感病毒获得气溶胶传播特性的机制,本研究利用反向遗传技术,通过基因重排,产生来自A/Chicken...

为研究A/Chicken/Guangdong/SS/94（H9N2）和A/Chicken/Shanghai/F/98（H9N2）复制特性差异的原因,从分子水平上探讨中国大陆1998年H9N2亚型禽流感病毒获得气溶胶传播特性的机制,本研究利用反向遗传技术,通过基因重排,产生来自A/Chicken/Guangdong/SS/94（H9N2）的两个表面基因和其余基因来自A/Chicken/Shanghai/F/98（H9N2）的三株重排H9N2亚型AIV。经动物实验发现,A/Chicken/Shanghai/F/98（H9N2）在气管和肺组织中的复制能力都很强,都是6.58±0.581og10EID50/0.2mL,而A/Chicken/Guangdong/SS/94（H9N2）在气管中的复制能力要强于在肺组织中的复制能力,分别是4.0±0.83 log10EID/0.2mL和2.5±0.33log10EID/0.2mL。2株病毒在肠道中的复制能力都不强,只是偶尔分离到病毒。A/Chicken/Shanghai/F/98（H9N2）在气管和肺中的复制能力明显要强于A/Chicken/Guangdong/SS/94（H9N2）,即1994年中国首次分离到的H9N2亚型AIV经过4年的宿主适应和基因进化,加强了其在呼吸系统的复制能力,奠定了气溶胶传播的基础。以A/Chicken/Shanghai/F/98（H9N2）为内部基因骨架,当替换为A/Chicken/Guangdong/SS/94（H9N2）的HA基因和/或NA基因时,病毒在鸡的气管中的复制能力都低于A/Chicken/Shanghai/F/98（H9N2）,其中RF/SSHA株与A/Chicken/Guangdong/SS/94（H9N2）的复制滴度最接近;RF/SSHA在肺组织中的复制滴度最低,RF/SSNA和RF/SSHA/SSNA在肺组织中的复制滴度要高于其表面基因的母本病毒株A/Chicken/Guangdong/SS/94（H9N2）,低于内部基因母本病毒株A/Chicken/Shanghai/F/98（H9N2）。表明HA和NA基因对H9N2亚型AIV在呼吸道的复制特性起主要作用,内部基因对H9N2亚型AIV在呼吸道的复制也有作用。有报道认为肠道是禽流感病毒复制的主要场所。而人适应流感病毒是在呼吸道复制,不在内脏复制。中国大陆自1994年家禽中流行H9N2亚型禽流感病毒,仅仅经过4年的进化,其在呼吸系统复制能力得到了明显的提高,值得人们重视。

关键词：

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H11亚型禽流感病毒血凝素特异性单克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第4期22卷 513-513页

作者：陈清刘文博提金凤姚月琴刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

禽流感(avian influenza,AI)是由A型流感病毒(AIV)引起的一种禽类的感染和(或)疾病综合征。本病在世界各国均有存在,我国自1992年报道AI以来,已分离到了多株病毒,绝大多数都是低致病力毒株,却也给养禽业造成巨大的经济损失。血凝抑制试... 详细信息

禽流感(avian influenza,AI)是由A型流感病毒(AIV)引起的一种禽类的感染和(或)疾病综合征。本病在世界各国均有存在,我国自1992年报道AI以来,已分离到了多株病毒,绝大多数都是低致病力毒株,却也给养禽业造成巨大的经济损失。血凝抑制试验(HI)试验快速、简便,且价格低廉,因此是最常用的一种检测AIV的方法。但多抗血清的制备比较繁琐,不同批次的抗体质量差异大。如能制备出针对AIV HA蛋白的mAb,将会弥补以上多抗血清的缺点,还可无限制的制备同质的抗体。[第一段]

关键词： H11亚型禽流感病毒单克隆抗体血凝抑制试验

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H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较

H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术会议

作者：石火英陈素娟高崧刘武杰刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

选择中国大陆最早分离的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)(缩写为SS株)和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIVA/Chicken/Shanghai/F/98 (H9N2)(缩写为F株)为研究对象,对其在SPF鸡体内的复制能力和传播途径特性作了系统的比晓,发现F株在4周龄SPF鸡气管中的复制能力高于SS株,F株可以经气溶胶传播途径传播,SS株不能经气溶胶传播途径传播.

关键词：传播途径禽流感病毒病理生理学

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鸟类自然保护区高致病性禽流感防控策略

鸟类自然保护区高致病性禽流感防控策略

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会

作者：陈浩孙明薛峰彭大新刘秀梵江苏盐城国家级珍禽自然保护区管理处江苏盐城国家级珍禽自然保护区管理处扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

高致病性禽流感在禽、鸟中爆发,严重威胁着人类生命安全,鸟类自然保护区是鸟类天然集中的分布区,鸟在禽流感传播中起着重要的作用．本文对保护区高致病性禽流感提出了禽、鸟、人的隔离、禽类免疫、巡查监测、环志研究等综合防控策略．

关键词：自然保护区鸟禽流感

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马立克病毒超强毒株(Md5、RB1B)毒力试验

马立克病毒超强毒株(Md5、RB1B)毒力试验

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：甘军纪刘秀梵吴长新扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州威克生物工程有限公司

本试验同时对鸡马立克病毒(MDV)超强毒株Md5和RB1B在易感SPF鸡上进行毒力测定。结果表明,Md5和RB1B毒力相近,500PFU以上攻毒、MD发病率在80%以上,Md5+RB1B联合攻毒时,引起更明显的早期死亡和体重下降。

关键词：马立克病毒超强毒毒力

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重组减毒细菌运送CD8+ T细胞表位的效应分析

重组减毒细菌运送CD8+ T细胞表位的效应分析

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：潘志明张晓明焦新安 Richard Lo-Man Claude Leclerc 刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室法国巴斯德研究所免疫调节生物学实验室

目的:分析重组减毒菌体外运送CD8T细胞表位的效应。方法:以表达OVA和LCMV CD8T细胞表位的重组菌13A（ptG2F）、25A（ptG2F）、SL7207（ptG2F）感染抗原提呈细胞LK、LL和骨髓源树突状细胞（BMDC）,应用体外抗原提呈试验检测抗原提呈细胞... 详细信息

目的:分析重组减毒菌体外运送CD8T细胞表位的效应。方法:以表达OVA和LCMV CD8T细胞表位的重组菌13A（ptG2F）、25A（ptG2F）、SL7207（ptG2F）感染抗原提呈细胞LK、LL和骨髓源树突状细胞（BMDC）,应用体外抗原提呈试验检测抗原提呈细胞对重组菌运送的CD8T细胞表位的提呈效应。结果:感染试验证实,减毒菌13A、25A和SL7207对LK细胞或L细胞均具有良好的侵袭能力,BMDC对重组菌具有很好的摄取功能。抗原提呈试验结果显示,在感染早期（2h）,LK、LL和BMDC细胞均可提呈重组菌13A（ptG2F）或SL7207（ptG2F）运送的T细胞表位;在感染晚期（48h）,LK细胞对OVA257-264 CD8T细胞表位提呈效应降低,LL细胞对LCMV 118-132 CD8T细胞表位提呈效应增强。三种抗原提呈细胞均未对25A（ptG2F）运送的T细胞表位产生提呈效应。另外,在同样的作用条件下,BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LK和LL细胞。结论:在体外证实了重组菌能运送CD8T细胞表位,为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴。

关键词： CD8+T细胞表位减毒大肠杆菌减毒鼠伤寒沙门氏菌体外抗原提呈试验

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