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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：卢军周锦萍刘佩红孙泉云彭大新张如宽刘秀梵上海市畜牧兽医站扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色:间接免疫荧光实验证明rFPV-g... 详细信息

为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色:间接免疫荧光实验证明rFPV-gB/R中的gB基因始终能稳定表达:序列测定结果表明,重组病毒在细胞上连续传30代、在SPF鸡上连续传5代后,gB基因序列没有发生任何变化;以0、10、20、30代重组病毒制成冻干疫苗进行的实验室免疫效力实验表明,细胞连续传代后rFPV-gB/R仍然保持了原有的免疫原性。可见重组鸡痘病毒的gB基因的结构和免疫原性都是高度稳定的。为了评价rFPV-gB/R的生物安全性,我们将rFPV-gB/R通过SPF鸡连续传5代,检测病毒在鸡体的存在部位及其消长、生长繁殖性能和毒力变化;将rFPV-gB/R免疫鸡与未免疫鸡同笼饲养,攻击FPV-102E6强毒,以检测rFPV-gB/R感染鸡的接触传染性。结果显示,rFPV-gB/R在鸡体的存在时间大约为7天,在体内仅存在于接种部位;鸡体传代后痘病毒毒力有一定程度下降,gB基因核苷酸序列未发生任何变化;同居未免疫SPF鸡在痘病毒强毒攻击后全部发痘,可见重组病毒免疫鸡没有接触传染性,能在鸡体内稳定地传代。rFPV-gB/R具有高度的生物安全性。

关键词：鸡马立克氏病重组鸡痘病毒 gB基因遗传稳定性生物安全性

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产蛋鸡非典型性新城疫并发鸡白痢沙门氏菌病的诊治

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中国家禽 2005年第24期27卷 20-20页

作者：夏晓莉薛峰刘慧谋刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

1 发病情况及流行病学山东某鸡场蛋鸡4000只于5月龄开始产蛋,7月龄产蛋率达65%,从25周龄开始发病,到32周龄达发病高峰,这期间产蛋率在50%徘徊很久,且软皮蛋和破蛋比例居高不下.

关键词：鸡白痢沙门氏菌病非典型性新城疫产蛋鸡诊治并发发病情况流行病学产蛋率软皮蛋月龄

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海安县猪水肿病的流行病学与病原特性研究

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畜牧兽医科技信息 2005年第3期21卷 75-79页

作者：洪小花朱润芝庞全海李宏全高崧杨宏伟丁永龙山西农业大学动物科技学院太谷030801 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 江苏省海安县兽医站海安226000

水肿病(Edema disease，ED)是指由某种定殖于小肠的大肠杆菌引起的传染性肠毒素血症。这种大肠杆菌可产生能侵入血流并破坏血管壁的外毒素。由于胃粘膜下层及结肠系膜水肿是此病的主要特点，因此称为“水肿病”或“肠水肿”。其特征为... 详细信息

水肿病(Edema disease，ED)是指由某种定殖于小肠的大肠杆菌引起的传染性肠毒素血症。这种大肠杆菌可产生能侵入血流并破坏血管壁的外毒素。由于胃粘膜下层及结肠系膜水肿是此病的主要特点，因此称为“水肿病”或“肠水肿”。其特征为发病突然、病程短促、全身或局部麻痹、行走困难、共济失调，眼脸和喉头、胃、肠等组织器官水肿。本病通常散发，传染性不明显。在一窝仔猪中，营养良好、较肥壮而生长快者先发病。

关键词：猪水肿病发病传染性流行病学共济失调麻痹血流病原特性仔猪定殖

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海安县猪水肿病的流行病学与病原特性研究

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吉林畜牧兽医 2005年第3期27卷 6-10,12页

作者：洪小花朱润芝庞全海李宏全高崧杨宏伟丁永龙山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏省海安县兽医站江苏海安226000

对江苏省海安县2003年5月-2004年5月各乡镇猪水肿病的发病和死亡情况进行了流行病学调查,发现猪水肿病在海安地区呈零星散发性发生,发病率为0.31%-1.84%,死亡率为0.07%-0.56%,病死率为16.0%-35.0%。水肿病主要侵害仔猪,育成猪也偶有发生... 详细信息

对江苏省海安县2003年5月-2004年5月各乡镇猪水肿病的发病和死亡情况进行了流行病学调查,发现猪水肿病在海安地区呈零星散发性发生,发病率为0.31%-1.84%,死亡率为0.07%-0.56%,病死率为16.0%-35.0%。水肿病主要侵害仔猪,育成猪也偶有发生,一般以气温比较高的季节多发。同时从疑似猪水肿病的病料中分离到12株大肠杆菌,经O血清型鉴定,5株为O139,2株为O45,O55、O93、O9、O101、O119各1株。经多重PCR检测毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)和大肠杆菌粘附素单抗(F4、F5、F6,F41、F18)检测菌毛,共6个分离株带有SLT-2e基因,其中O139分离株5株,O55分离株1株,其余6株均带STb基因。12个分离株中,单独表达F18菌毛的4株(O1392株,O45、O119各1株),F5+F411株(O93),F41+F181株(O139),F5+F41+F182株(均为O139)。经药敏试验,多数分离株对壮观霉素和新霉素高度敏感。

关键词：分离株 SLT 流行病学多发 e基因多重PCR检测发病猪水肿病病原特性病料

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海安县猪水肿病的流行病学与病原特性研究

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广东畜牧兽医科技 2005年第2期30卷 34-38页

作者：朱润芝洪小花庞全海李宏全高崧杨宏伟丁永龙山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏省海安县兽医站江苏海安226000

对江苏省海安县2003年5月-2004年5月各乡镇猪水肿病的发病和死亡情况进行了流行病学调查,发现猪水肿病在该地区呈零星散发性发生,发病率为0.31%～1.84%,死亡率为0.07%～0.56%,病死率为16.0%～35.0%。水肿病主要侵害仔猪,育成猪也偶有发... 详细信息

对江苏省海安县2003年5月-2004年5月各乡镇猪水肿病的发病和死亡情况进行了流行病学调查,发现猪水肿病在该地区呈零星散发性发生,发病率为0.31%～1.84%,死亡率为0.07%～0.56%,病死率为16.0%～35.0%。水肿病主要侵害仔猪,育成猪也偶有发生,一般以气温比较高的季节多发。同时从疑似猪水肿病的病料中分离到12株大肠杆菌,经O血清型鉴定,5株为O139,2株为O45,O55、O93、O9、O101、O119各1株。经多重PCR检测毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)和大肠杆菌粘附素单抗(F4、F5、F6、F41、F18)检测菌毛,共6个分离株带有SLT-2e基因,其中O139分离株5株,O55分离株1株,其余6株均带STb基因。12个分离株中,单独表达F18菌毛的4株(O1392株,O45、O119各1株),F5+F411株(O93),F41+F181株(O139),F5+F41+F182株(均为O139)。经药敏试验,多数分离菌株对壮观霉素和新霉素高度敏感。

关键词：猪水肿病大肠杆菌 O血清型 F38菌毛致水肿病2型类志贺毒素流行病学海安县

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表达鸡白细胞介素2重组鸡痘病毒的构建及其体外表达产物生物活性的检测

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生物工程学报 2004年第1期20卷 136-139页

作者：邵卫星彭大新卢建红韦栋平刘玉良刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

从ConA刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 2 (ChIL 2 )基因编码区。将该编码区cDNA序列和调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE L)的基因片段定向克隆到鸡痘病毒转移载体p1175中 ,获得重组转移载体p1175IL2 ,然后转染已感染鸡痘病毒 ... 详细信息

从ConA刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 2 (ChIL 2 )基因编码区。将该编码区cDNA序列和调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE L)的基因片段定向克隆到鸡痘病毒转移载体p1175中 ,获得重组转移载体p1175IL2 ,然后转染已感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株 (wt FPV)的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,质粒p1175IL2与wt FPV基因组DNA发生同源重组 ,产生了表达ChIL 2的重组鸡痘病毒rFPV IL2。通过在含X gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑 ,获得并纯化重组鸡痘病毒rFPV IL2。应用XTT PMS方法检测的rFPV IL2 (M .O .I 2 0 )感染CEF 72小时后细胞上清中表达的重组ChIL 2生物活性 ,效价为 3 6× 10 5u mL ,表明rFPV IL2能有效地表达ChIL 2。下一步将利用rFPV IL2在体内表达ChIL 2 ,研究ChIL 2的免疫增强作用及其作用机理。

关键词：表达鸡白细胞介素2 重组鸡痘病毒构建体外表达产物生物活性

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直接ELISA和PCR相结合快速检测样品中的沙门氏菌

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中国人兽共患病杂志 2004年第4期20卷 321-323,327页

作者：黄金林焦新安文其乙潘志明张小荣张如宽刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室

目的　通过样品试验 ,得到优化的沙门氏菌检测方法。方法　在单抗直接ELISA和PCR法检测沙门氏菌的基础上 ,将PCR法和单抗直接ELISA两种快速检测方法进行比较研究。结果　直接ELISA方法结合PCR方法对城区 14 1份水样、2 0 0 2年春季饮食... 详细信息

目的　通过样品试验 ,得到优化的沙门氏菌检测方法。方法　在单抗直接ELISA和PCR法检测沙门氏菌的基础上 ,将PCR法和单抗直接ELISA两种快速检测方法进行比较研究。结果　直接ELISA方法结合PCR方法对城区 14 1份水样、2 0 0 2年春季饮食行业工作人员健康检查的 14 2 6份人粪便样品 ,并与常规国标方法对比 ,直接ELISA法的敏感性和特异性达 10 0 %和 97 2 % ,PCR法的敏感性和特异性均为 10 0 %。通过对鲜牛奶样、龙虾、虾仁、熟食制品、水样、人粪样测试 ,最终确定较优化的沙门氏菌检测程序。结论　PCR法的敏感性优于直接ELISA法。对大量样品采用直接ELISA筛检 ,除去大量阴性样品 ,阳性样品用PCR法作进一步鉴定 ;需要确定血清型时则用国标方法。

关键词： ELISA PCR 快速检测样品沙门氏菌

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以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫原性

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微生物学报 2004年第2期44卷 157-161页

作者：张小荣焦新安潘志明张晓明刘秀梵黄金林张如宽扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

根据GenBank中已发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列 ,设计一对引物 ,通过RT PCR扩增鹅源H5亚型高致病力禽流感病毒HA基因 ,测序确认后 ,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd pVAX1得到重组表达载体pVAX1 HA和asd pVAX1 HA。将重组质粒转染... 详细信息

根据GenBank中已发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列 ,设计一对引物 ,通过RT PCR扩增鹅源H5亚型高致病力禽流感病毒HA基因 ,测序确认后 ,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd pVAX1得到重组表达载体pVAX1 HA和asd pVAX1 HA。将重组质粒转染P815细胞 ,经间接免疫荧光试验证实 ,HA基因在细胞内得到了瞬时表达。进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4 5 5 0得到两种运送DNA疫苗的重组沙门氏菌X4 5 5 0 (pVAX1 HA)和X4 5 5 0 (asd pVAX1 HA) ,以 1× 10 9CFU 只的剂量两次口服免疫BALB c小鼠 ,免疫小鼠不仅可以检测到HA特异性的血清抗体应答 ,而且还能抵抗稳定表达H5亚型禽流感病毒HA基因的P815肥大细胞瘤的攻击 ,说明该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能够成功释放所携带的质粒 ,并且能够刺激机体产生保护性免疫应答。

关键词：减毒沙门氏菌 H5亚型禽流感病毒 DNA疫苗免疫原性小鼠 HA基因序列 RT-PCR 免疫应答

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华东地区致初生仔猪腹泻大肠杆菌的O血清型和毒力因子

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微生物学报 2004年第1期44卷 96-100页

作者：陈祥高崧王雷焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

从江苏、江西、安徽等 7个省疑似黄、白痢直肠棉拭及病死猪的十二指肠和肠系膜淋巴结中分离鉴定出 339株病原性大肠杆菌。经O血清型鉴定 ,除 77株未能定型、4 1株自凝外 ,测定出 2 2 1个分离株的O血清型 ,这些分离株覆盖了 6 4个血清型 ... 详细信息

从江苏、江西、安徽等 7个省疑似黄、白痢直肠棉拭及病死猪的十二指肠和肠系膜淋巴结中分离鉴定出 339株病原性大肠杆菌。经O血清型鉴定 ,除 77株未能定型、4 1株自凝外 ,测定出 2 2 1个分离株的O血清型 ,这些分离株覆盖了 6 4个血清型 ,以O1 0 7、O1 0 1 、O2 0 、O93、O1 1 和O1 49为主 ,共 99株 ,占定型菌株的 4 4 80 %。这些血清型与已报道的常见血清型间存在一定差异。运用黏附素单抗对以上菌株进行F4、F5、F6、F1 8、F4 1 5种黏附素检测 ,共 97个分离株表达黏附素 (2 8 6 1 % ) ,而表达两种和 3种黏附素的菌株分别有 2 2株和 8株 ,它们分别占表达黏附素菌株的2 2 6 8%和 8 2 5 % ,其中单独表达F4、F6、F5 +F4 1黏附素菌株分别有 1 8、30、1 5株 ,分别占表达黏附素菌株的1 8 5 6 %、30 93%和 1 5 4 6 % ;同时运用多重PCR对其中 1 4 5个分离株进行毒素基因 (STa、STb、LT、SLT 2e)的检测 ,拥有STa和STb毒素基因的菌株分别占检测菌株的 5 1 72 %和 37 2 4 %。F6、F4、F5 +F4 1和STa。

关键词：仔猪腹泻大肠杆菌 0血清型黏附素毒素

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共表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒

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微生物学报 2004年第3期44卷 286-290页

作者：韦栋平刘玉良邵卫星卢建红刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用RT PCR扩增出新城疫病毒F4 8E8株融合蛋白 (F)基因 ,将其克隆入pGEM Teasyvector构建重组质粒pGEM TF并进行测序确证。分别从pGEM T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株 (A chicken china F 1 998)血凝素 (HA)基因 ,通过一系列... 详细信息

应用RT PCR扩增出新城疫病毒F4 8E8株融合蛋白 (F)基因 ,将其克隆入pGEM Teasyvector构建重组质粒pGEM TF并进行测序确证。分别从pGEM T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株 (A chicken china F 1 998)血凝素 (HA)基因 ,通过一系列分子生物学操作步骤插入到质粒pFPV7S中的鸡痘病毒基因组复制非必需片段构建重组质粒p7SHF ,其中F基因和HA基因分别由鸡痘病毒启动子PE L和合成启动子PS调控。最后将P1 1 LacZ报告基因表达盒插入质粒p7SHF获得转移载体pFPVHF ,用以转染已预先感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株的鸡胚成纤维细胞 (CEF)。通过在含有X Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化重组病毒。PCR和Southernblot检测证实了F基因和HA基因已插入鸡痘病毒的基因组 ;间接免疫荧光试验结果表明重组病毒能够同时正确表达HA和F蛋白。

关键词：新城疫病毒 H9亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒融合蛋白血凝素

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