检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2010年第1期41卷 60-64页

作者：王彦红陈素娟刘武杰仇旭升董丽彭大新刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

作者旨在探讨鸡痘病毒ORF073或ORF214基因缺失后,在母源抗体存在情况下对重组病毒免疫效力的影响。将构建好的在ORF073或ORF214基因插入H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)及单表达H5亚型AIV HA基因... 详细信息

作者旨在探讨鸡痘病毒ORF073或ORF214基因缺失后,在母源抗体存在情况下对重组病毒免疫效力的影响。将构建好的在ORF073或ORF214基因插入H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)及单表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-12LSH5A)分别免疫SPF鸡和商品鸡,检测重组疫苗诱导的免疫效力。结果:3种重组鸡痘病毒在SPF鸡产生较高的HI抗体效价及100%的免疫保护;在HI母源抗体效价为2.45的商品鸡体内基因缺失株重组病毒比rFPVLP-12LSH5A易于清除,抗体上升缓慢而且免疫28 d后HI抗体效价较低,免疫保护率低,分别为16.7%和23.3%;在母源HI抗体效价为0的商品鸡体内基因缺失株重组病毒免疫后产生的抗体效价高,免疫28 d后分别达到3.50和3.17。结果表明在商品鸡体内母源抗体影响下,缺失ORF073或ORF214基因的重组鸡痘病毒的免疫效力降低。

关键词：重组鸡痘病毒 H5亚型AIV 免疫效力

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共表达H_9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

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病毒学报 2003年第1期19卷 52-58页

作者：程坚刘秀梵彭大新刘红旗吴艳涛张如宽扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州225009

为了构建更为安全有效的抗低致病性H9亚型禽流行性感冒 (流感 )的基因工程疫苗 ,将包含有H9亚型禽流感病毒分离株的血凝素 (HA)基因、鸡Ⅱ型干扰素 (IFN Ⅱ )全长cDNA序列及调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE/L)的基因片段 ,定向插... 详细信息

为了构建更为安全有效的抗低致病性H9亚型禽流行性感冒 (流感 )的基因工程疫苗 ,将包含有H9亚型禽流感病毒分离株的血凝素 (HA)基因、鸡Ⅱ型干扰素 (IFN Ⅱ )全长cDNA序列及调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE/L)的基因片段 ,定向插入鸡痘病毒转移载体 1175的痘苗病毒启动子P7.5的下游 ,得到HA和IFN Ⅱ基因分别处于P7.5及PE/L转录调控下的重组转移载体 1175HAIFN。以脂质体转染法将 1175HAIFN转染至已感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株 (wt FPV)的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中。 1175HAIFN与wt FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV HA IFN Ⅱ。通过在含X gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rF PV HA IFN Ⅱ。以间接免疫荧光法和细胞病变抑制试验证实 ,纯化的rFPV HA IFN Ⅱ感染的CEF能以非融合的方式同时表达HA和具有抗VSV活性的鸡IFN Ⅱ。动物试验表明 ,rFPV HA IFN Ⅱ能显著抑制静脉攻毒后 1日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡从泄殖腔排毒 ,且能减轻单表达HA的重组鸡痘病毒 (rFPV HA)抑制 1日龄SPF雏鸡增重的副作用。

关键词： H9亚型禽流行性感冒病毒重组鸡痘病毒鸡Ⅱ型干扰素血凝素

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近年来华东地区家鸭中禽流感病毒的亚型分布

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微生物学报 2008年第10期48卷 1290-1294页

作者：仇保丰刘武杰彭大新胡顺林刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】为了研究近年来华东地区家鸭中禽流感病毒的亚型分布情况。【方法】对2002-2006年分离自华东地区家鸭的180株禽流感病毒的HA亚型和其中88株禽流感病毒的NA亚型分别进行了测定。【结果】近年来华东地区家鸭中至少存在9种HA亚型和... 详细信息

【目的】为了研究近年来华东地区家鸭中禽流感病毒的亚型分布情况。【方法】对2002-2006年分离自华东地区家鸭的180株禽流感病毒的HA亚型和其中88株禽流感病毒的NA亚型分别进行了测定。【结果】近年来华东地区家鸭中至少存在9种HA亚型和6种NA亚型组成的H1N1,H3N1,H3N2,H3N8,H4N6,H5N1,H5N2,H6N2,H6N8,H8N4,H9N2,H10N3,H11N2共13种亚型的禽流感病毒。【结论】华东地区家鸭中有多种亚型的禽流感病毒分布,应加强家鸭禽流感的监测和防制工作。

关键词：华东地区家鸭禽流感病毒亚型分布

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鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆与P基因的表达鉴定

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微生物学通报 2004年第2期31卷 37-40页

作者：刘玉良吴艳涛黄勇邵卫星韦栋平刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM Teasy载体 ,再分别亚克隆到真核表达载体pCI neo上 ,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。利用P基因开放性阅读框 (ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点 ,将... 详细信息

将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM Teasy载体 ,再分别亚克隆到真核表达载体pCI neo上 ,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。利用P基因开放性阅读框 (ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点 ,将报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)基因克隆进P基因真核表达重组质粒 ,分别转染COS 1细胞和CEF细胞 ,在倒置荧光显微镜下可见到绿色荧光 ,表明GFP基因已得到表达 ,由此证明P基因也已得到表达。鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆成功。

关键词：鹅新城疫病毒 NP、P和L基因绿色荧光蛋白表达

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猪圆环病毒2型江苏分离株的遗传进化分析

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中国兽医学报 2014年第7期34卷 1047-1052页

作者：束陈宇许秋阳段世鹏李晨曦张小荣焦库华吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用PCR方法扩增了15个猪圆环病毒2型（PCV 2）江苏分离株的基因组DNA,以这些毒株的ORF2核苷酸序列进行遗传进化分析。经序列比较发现,所有分离株均属于2b基因群,其中7株为1A/1B亚群、8株为1C亚群;毒株间核苷酸同源性为93.6%~100%,所编... 详细信息

采用PCR方法扩增了15个猪圆环病毒2型（PCV 2）江苏分离株的基因组DNA,以这些毒株的ORF2核苷酸序列进行遗传进化分析。经序列比较发现,所有分离株均属于2b基因群,其中7株为1A/1B亚群、8株为1C亚群;毒株间核苷酸同源性为93.6%~100%,所编码的Cap蛋白氨基酸同源性为92.3%~100%。PCV 2江苏分离株Cap蛋白的主要变异区域为53~90、121~151和190~210位氨基酸;R59、R89、S90、S121、T134、S169、A190、E210为1A/1B亚群分离株的特征氨基酸,而F8、I53、N68、L89、T90、T121、N134、R169、D210、I215、K234则是1C亚群分离株的特征氨基酸。

关键词：猪圆环病毒2型序列分析 ORF2基因 Cap蛋白

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近年来大肠杆菌K88ac菌毛的变异和生物学特性

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农业生物技术学报 2006年第5期14卷 757-762页

作者：陈祥苗晓青刘静黄莉莉高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

2000￣2005年,从猪大肠杆菌病(colibacillosis)中分离到一些表达K88菌毛的大肠杆菌(Escherichiacoli),这些分离株只与K88a因子单抗反应,而不与K88b、c和d因子单抗反应。分离的菌株(13/16)以O149为常见血清型,且全部拥有STb毒素基因,通过... 详细信息

2000￣2005年,从猪大肠杆菌病(colibacillosis)中分离到一些表达K88菌毛的大肠杆菌(Escherichiacoli),这些分离株只与K88a因子单抗反应,而不与K88b、c和d因子单抗反应。分离的菌株(13/16)以O149为常见血清型,且全部拥有STb毒素基因,通过K88常规血清交叉吸收试验、SDS-PAGE和Western印迹,表明这些菌株不仅与K88ac参考菌株C83907制备的c因子血清反应,而且与以分离株SEC586制备且经K88ab、K88ac和K88ad参考菌株吸收后的血清也反应,表明这些分离株仍为K88ac大肠杆菌。对新近分离的SEC464、SEC525、SEC586、SEC799和EC910株及80年代我国分离的TM128株的K88主要亚单位结构基因faeG进行克隆、测序,发现新近分离株的faeG基因由846对核苷酸组成,编码菌毛主要亚单位的261个氨基酸及21个氨基酸的信号肽,比国内外报道的K88acFaeG亚单位(262个氨基酸)少了一个氨基酸,比K88ab、K88ad(264个氨基酸)少了3个氨基酸。TM128株的FaeG氨基酸序列与K88ac(M29375)的同源性为100.0%,SEC464、SEC525、SEC586、SEC799和SEC910株的FaeG亚单位氨基酸序列的同源性为97.7%￣99.6%,它们与K88ac的同源性为94.6%￣96.6%;与K88ab的同源性为90.0%￣91.6%;与K88ad的同源性为87.0%￣88.9%。结果表明新分离的K88ac大肠杆菌黏附素主要亚单位已发生了部分变异。

关键词：大肠杆菌 K88黏附素单克隆抗体 faeG基因

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两株基因Ⅲ型强毒新城疫的全基因组测序及其与Ⅰ系苗的亲缘性分析

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微生物学报 2009年第3期49卷 302-308页

作者：仇旭升孙庆姚春峰董丽吴艳涛胡顺林刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

【目的】研究基因III型新城疫(Newcastle disease,ND)强毒分离株JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go与中等毒力疫苗株Mukteswar的亲缘性关系,分析三株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的全基因差异。【方法】采用RT-PCR方法获得两株NDV分离株的全基因组核苷酸序列,与GenBank中公布的Mukteswar序列比对分析。【结果】强毒分离株与中等毒力疫苗株Mukteswar全基因组核苷酸同源性均为99.7%;病毒6个阅读框核苷酸序列与Mukteswar同源性为99.6%～99.9%;预测的8种病毒编码蛋白同源性在98.8%～99.8%。然而,测定MDT,ICPI和IVPI发现JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go毒力明显强于Mukteswar,其中JS/7/05/Ch株的IVPI达到了2.18。【结论】综合3株NDV的遗传分析结果和已有的流行病学资料可以推断分离株JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go是由疫苗株Mukteswar自然进化而来的返强毒株。因此,必须停止使用中等毒力疫苗以免造成更大的危害。

关键词：基因Ⅲ型新城疫病毒 Mukteswar 全基因组毒力返强

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H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株的全基因克隆及序列分析

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微生物学报 2005年第5期45卷 690-696页

作者：龙进学王曲直卢建红刘玉良刘秀梵扬州大学畜牧兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用流感病毒通用引物[4]和H5N1亚型禽流感(Avian influenza virus,AIV)的型特异性引物,成功的扩增出H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株(简称A/D/SD/04)的全基因序列(包括5′和3′端的非编码区序列).A/D/SD/04的基因组核苷酸全序列与18株网上公布的禽流感基因序列进行比较和分析,结果与4株鸭源H5N1的5～7个基因具99%以上的同源性;与14株H5N1有至少一个以上内部基因同源性在95%以上.与H9亚型AIV代表株A/Quail/Hongkong/G1/97(简称G1株)和A/Chicken/Beijing/1/94(简称BJ94)比较,除了非结构基因(Nonstructural gene,NS)与G1株的同源性为95.3%外,其余基因均在36.6%～92.1%之间.说明A/D/SD/04没有H9N2基因的直接整合,是H5N1毒株在自然界的重组株.推导的HA氨基酸序列分析,A/D/SD/04 的血凝素(Heamgglutinin,HA)裂解位点与比较的16株AIV的序列一致,是高致病性禽流感的分子特征(PQRERRRKKR/G),第226位氨基酸是对禽类和哺乳细胞均具有亲嗜性的蛋氨酸(Met).神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)在第48位氨基酸(颈部)后有20个氨基酸的缺失,但非结构蛋白(NS)没有在79～84氨基酸发生缺失.碱性聚合酶2(PB2)的627位氨基酸是亲禽类细胞的谷氨酸(Glu,E).结合生物学特性和分子特征,A/D/SD/04对小鼠的致病力是由多种因素决定,其可能是一株对鸡高度致病,并逐渐获得对哺乳动物致病能力的中间重组病毒.

关键词： H5N1亚型禽流感病毒通用引物全基因组序列序列分析

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1株H1亚型水禽流感病毒分离株的致病特性和表面膜蛋白基因的序列分析

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中国兽医学报 2007年第6期27卷 785-789,794页

作者：薛峰刘慧谋彭宜张评浒钱忠明刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用常规血清学试验和特异性RT-PCR方法,对我国华东地区家养水禽流感病毒进行了长达4年的跟踪监测,分离到多株H1亚型禽流感病毒,并对其中的1株A/Duck/Yangzhou/163/2003(简称Dk/YZ/163/03)的血凝素基因进行了序列测定,并与GenBank中收... 详细信息

采用常规血清学试验和特异性RT-PCR方法,对我国华东地区家养水禽流感病毒进行了长达4年的跟踪监测,分离到多株H1亚型禽流感病毒,并对其中的1株A/Duck/Yangzhou/163/2003(简称Dk/YZ/163/03)的血凝素基因进行了序列测定,并与GenBank中收录的其他序列进行了比较。结果发现,Dk/YZ/163/03的血凝素基因(HA)与禽流感日本分离株A/Japan/91(H1)的同源性最高;而神经氨酸酶基因(NA)与Mallard dk/A1b/35/1976(H1N1)同源性最高;其推导的氨基酸剪切位点序列为P-S-I-Q-S-R,是典型低致病性禽流感病毒的特征序列,这与该毒株对SPF鸡和BALB/c小鼠的低致病特性相吻合。

关键词：禽流感病毒 H1亚型 HA NA 致病性剪切位点

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江苏省猪高热病病例主要继发感染病毒的多重PCR检测

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中国兽医科学 2007年第12期37卷 1029-1034页

作者：叶俊平盛瑜朱丽娜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

应用建立的2个多重PCR方法，对2005～2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果，PRRSV阳性率为51．2％，PCV2阳性率为44．1％，CSFV阳性率为10．4％，PPV阳性率为3．9％，PRV阳性率为2．4％。2005年病料中PCV2阳性率... 详细信息

应用建立的2个多重PCR方法，对2005～2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果，PRRSV阳性率为51．2％，PCV2阳性率为44．1％，CSFV阳性率为10．4％，PPV阳性率为3．9％，PRV阳性率为2．4％。2005年病料中PCV2阳性率为21．2％，2006年为73．2％；2005年PRRSV阳性率为38．1％，2006年为67．7％。2006年猪高热病疫情比2005年严重，PCV2和PRRSV可能在其中发挥了协同致病作用。对10个PRRSV分离株ORF5基因和Nsp2基因进行的测序表明，2006年分离株Nsp2基因中有连续87个碱基的缺失。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型猪细小病毒猪瘟病毒猪伪狂犬病病毒猪高热病多重PCR ORF5基因 Nsp2基因

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