检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2008年第7期48卷 869-873页

作者：董洪燕张小荣潘志明彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】生物膜在沙门氏菌的致病性和引起沙门氏菌食物中毒等方面起着重要作用,本研究为了鉴定影响沙门氏菌生物膜形成的基因。【方法】利用结晶紫染色定量法对74株鸡源的肠炎、鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌进行生物膜测定,选择生物膜生长较... 详细信息

【目的】生物膜在沙门氏菌的致病性和引起沙门氏菌食物中毒等方面起着重要作用,本研究为了鉴定影响沙门氏菌生物膜形成的基因。【方法】利用结晶紫染色定量法对74株鸡源的肠炎、鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌进行生物膜测定,选择生物膜生长较好的肠炎沙门氏菌C050041,采用转座子随机插入法构建突变株库。【结果】84%的鸡源沙门氏菌菌株可在塑料表面形成生物膜;通过转座子插入获得1924个突变株,筛选的生物膜降低突变株经生长曲线测定、测序和序列比对及Southern blot分析鉴定出15个插入基因,它们分别为metE、ompR、rpoS、rfaG、rfaJ、rfaK、rfaP、rfbH、rhlE、spiA、steB、tpx、ybdN和2个未知功能的基因。【结论】我们鉴定出了多个影响生物膜形成的新基因,这些基因的发现为进一步研究沙门氏菌生物膜形成的调控机制,研制减毒沙门氏菌疫苗奠定了基础。

关键词：沙门氏菌转座子生物膜突变株基因

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用反向遗传技术致弱基因VIId型鹅源新城疫病毒ZJI株

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微生物学报 2007年第2期47卷 197-200页

作者：胡顺林孙庆吴艳涛张艳梅刘秀梵刘玉良王曲直扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与3个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫... 详细信息

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与3个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫病毒粒子。设计两对引物,经overlapPCR方法将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸后,替换pNDV/ZJI上的对应序列,构建了转录载体pNDV/ZJIFM,将pNDV/ZJIFM与3个辅助表达质粒共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了致弱的基因VIId型鹅源新城疫病毒NDV/ZJIFM,获救病毒的鸡胚最小致死剂量平均死亡时间(MDT)大于120h,同时该病毒的脑内接种致病指数(ICPI)为0.16,上述结果表明,获救病毒的毒力已被致弱,是一个较为理想的疫苗候选株。

关键词：新城疫病毒拯救致弱基因Ⅶd型

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H5N1亚型禽流感病毒NS第263~277位核苷酸缺失提高病毒对鸡的致病力

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微生物学报 2006年第2期46卷 301-305页

作者：龙进学薛峰彭宜顾敏刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义，构建H5N1A／D／SD／04株HA、NA、NS的全基因表达／转录载体，以及NS的删除突变载体（m248），A/D/YZ/04株的NS基因表... 详细信息

为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义，构建H5N1A／D／SD／04株HA、NA、NS的全基因表达／转录载体，以及NS的删除突变载体（m248），A/D/YZ/04株的NS基因表达／转录载体（848）和其补加15个核苷酸的NS突变载体（m848）。构建的载体分别与编码WSN（H1N1）内部基因载体进行组合转染，拯救获得4个具不同NS的重组的H5N1亚型流感病毒：RWSN-848和RWSN—m248在263-277位缺失15个碱基。RWSN-m848和RWSN-248则在相同位置不发生缺失。4个重组病毒的平均鸡胚繁殖效价（HA）、鸡胚的平均死亡时间（MDT）和鸡胚半数感染量（EID50）均无显著差异；但RWSN-848和RWSN-m248对6周龄SPF鸡的致病力明显高于RWSN—m848和RWSN-248。结果说明H5N1的NS基因在263～277位核苷酸发生缺失后，不影响重组H5N1在鸡胚中的繁殖性能，但提高了病毒对鸡的致病力。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒病毒拯救突变非结构基因NS 病毒蚀斑形成单位

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水禽流感病毒分离株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)膜蛋白基因遗传进化分析

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微生物学报 2005年第4期45卷 491-495页

作者：张评浒刘晓文钱忠明唐应华刘秀梵薛峰郝贵杰扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

采用常规的血清学收验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行两年多的监测,分离鉴定出多株H6亚型禽流感病毒。对其中的一株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)(简称DkYZ23302)(H6N2)的表面膜蛋白基因进行了序列测定... 详细信息

采用常规的血清学收验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行两年多的监测,分离鉴定出多株H6亚型禽流感病毒。对其中的一株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)(简称DkYZ23302)(H6N2)的表面膜蛋白基因进行了序列测定,并与GenBank中收录的其它序列进行了比较,遗传进化结果表明DkYZ23302的血凝素基因(HA)与近年香港分离的鸭源毒株DkHK346199(H6N1)、中国台湾鸡源毒株CkTaiwanna398的亲缘关系最近;而神经氨酸酶基因(NA)遗传进化分析结果表明DkYZ23302(H6N2)的NA基因起源于禽源H9N2亚型流感病毒,这可能是不同亚型禽流感病毒在水禽体内发生基因重配的结果。DkYZ23302(H6N2)的HA推导的氨基酸剪切位点序列为P-Q-I-E-T-R-D,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,与对SPF鸡的致病力试验相吻合。

关键词：病毒分离株进化分析基因遗传低致病性禽流感病毒 RT-PCR方法 GenBank 神经氨酸酶基因 H9N2亚型遗传进化膜蛋白基因血凝素基因致病力试验华东地区分离鉴定序列测定亲缘关系中国台湾 NA基因分析结果特征序列

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栽培模式及生态条件对弱筋小麦籽粒品质的影响

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麦类作物学报 2025年第1期45卷 80-88页

作者：陈松朱娟吕超王菲菲郭宝健许如根江苏省作物基因组学和分子育种重点实验室/植物功能基因组学教育部重点实验室/江苏省作物遗传生理重点实验室/扬州大学农学院/江苏省粮食作物现代产业技术协同创新中心江苏扬州225009

为研究不同栽培模式及生态条件对弱筋小麦籽粒品质的影响,以8个扬麦系列和宁麦系列弱筋小麦品种及2个中筋小麦品种为材料,分析参试小麦品种在不同栽培模式及生态条件下籽粒容重、蛋白质含量及淀粉含量的稳定性及差异性。结果表明,小麦... 详细信息

为研究不同栽培模式及生态条件对弱筋小麦籽粒品质的影响,以8个扬麦系列和宁麦系列弱筋小麦品种及2个中筋小麦品种为材料,分析参试小麦品种在不同栽培模式及生态条件下籽粒容重、蛋白质含量及淀粉含量的稳定性及差异性。结果表明,小麦籽粒品质既受品种遗传因素的控制,也受栽培模式及生态条件的影响。在弱筋小麦优质栽培模式[基本苗2.40×10^(6)株·hm^(-2),施用纯氮180 kg·hm^(-2),磷、钾肥以基苗肥为主,氮肥运筹按基肥∶苗肥∶拔节肥(倒3.5叶前)=7∶1∶2],弱筋小麦籽粒蛋白质含量较低,容重大,淀粉品质较高,中筋品种扬麦25和扬麦28也能够达到优质弱筋的要求。在中筋小麦高产栽培模式(基本苗1.80×10^(6)·hm^(-2),施用纯氮240 kg·hm^(-2),磷、钾肥以基苗肥为主,氮肥运筹按基肥∶苗肥∶拔节孕穗肥=5∶2∶3)下,参试品种籽粒蛋白质含量均较高,多数品种不能达到弱筋小麦的标准。要保证弱筋小麦品质,应选择适宜良种,在常规大田栽培措施的基础上,采用第一种栽培模式,并根据当地当年气候生态条件作适当调整。

关键词：弱筋小麦栽培模式生态条件品质

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鹅源新城疫病毒ZJ1株微型基因组的构建及其初步应用

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微生物学报 2005年第1期45卷 72-76页

作者：张艳梅刘玉良黄勇贾立军刘秀梵卢建红韦栋平吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

在获得鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组序列的基础上 ,用增强型绿色荧光蛋白 (eGFP)报告基因取代鹅源新城疫病毒ZJ1株整个编码区 ,只保留与病毒复制、转录和病毒粒子包装相关的调控序列 ,将其反向克隆入转录载体TVT7R(0 0 )中 ,构建了该... 详细信息

在获得鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组序列的基础上 ,用增强型绿色荧光蛋白 (eGFP)报告基因取代鹅源新城疫病毒ZJ1株整个编码区 ,只保留与病毒复制、转录和病毒粒子包装相关的调控序列 ,将其反向克隆入转录载体TVT7R(0 0 )中 ,构建了该毒株的微型基因组。当转染用辅助病毒ZJ1株感染的HEp_2细胞时报告基因得到表达 ,表明此微型基因组RNA可被辅助病毒提供的NP、P和L蛋白翻译。同时将该病毒NP、P和L蛋白基因分别克隆入真核表达载体pCI_neo中 ,构建了表达该病毒NP、P与L蛋白的辅助质粒 ,用此微型基因组对辅助质粒的表达产物进行了功能鉴定并对该病毒拯救过程中痘苗病毒的最适感染剂量进行了摸索。

关键词：新城疫病毒微型基因组病毒拯救

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利用反向遗传操作技术产生ZJI株鹅源新城疫病毒

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微生物学报 2005年第5期45卷 780-783页

作者：刘玉良张艳梅胡顺林吴艳涛刘秀梵龙进学石火英张小荣张如宽扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

利用反向遗传操作技术,将ZJI株鹅源新城疫病毒全基因组cNDA克隆(NDV3GM122)和含该毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCI-NP、pCI-P与pCI-L)共转染BSR-T7/5细胞;同时,将NDV3GM122与含新城疫病毒La Sota毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCIne... 详细信息

利用反向遗传操作技术,将ZJI株鹅源新城疫病毒全基因组cNDA克隆(NDV3GM122)和含该毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCI-NP、pCI-P与pCI-L)共转染BSR-T7/5细胞;同时,将NDV3GM122与含新城疫病毒La Sota毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCIneoNP、pCIneoP与pCIneoL)进行共转染。通过间接免疫荧光实验(Indiectimmunofluorescence assay,IFA)以及接种鸡胚后进行血凝(Hemagglutinin,HA)与血凝抑制(Hemagglutinininhibition,HI)试验、RT-PCR扩增和电镜观察,结果均证实全基因组cDNA克隆NDV3GM122与La Sota毒株表达载体共转染组产生了有血凝性的鹅源新城疫病毒,而NDV3GM122与ZJI株表达载体共转染组暂未检测到有血凝性的病毒。ZJI株鹅源新城疫病毒的拯救成功为对该病毒进行功能基因组研究和疫苗的研制等后续工作打下了基础。

关键词：反向遗传操作技术鹅源新城疫病毒鹅病毒拯救

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缺失ORF73或ORF214基因对重组鸡痘病毒免疫应答的影响

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微生物学报 2010年第4期50卷 512-516页

作者：王彦红陈素娟刘武杰仇旭升董丽彭大新刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

【目的】旨在研究鸡痘病毒ORF73和ORF214编码蛋白是否具有IL-18结合蛋白的功能,以及ORF73或ORF214基因缺失后对重组病毒诱导免疫应答的影响。【方法】以缺失ORF73或ORF214基因并表达H5亚型AIVHA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rF... 详细信息

【目的】旨在研究鸡痘病毒ORF73和ORF214编码蛋白是否具有IL-18结合蛋白的功能,以及ORF73或ORF214基因缺失后对重组病毒诱导免疫应答的影响。【方法】以缺失ORF73或ORF214基因并表达H5亚型AIVHA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)作为研究对象,以未缺失ORF73或ORF214基因而表达H5亚型AIVHA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-12LSH5A)作为对照,检测重组病毒体外诱导SPF鸡脾细胞和外周血淋巴细胞产生IFN情况,同时检测重组病毒免疫SPF鸡后诱导的体液免疫、CD4+/CD8+比值、外周血淋巴细胞的增殖能力和H5亚型AIV强毒攻击后的免疫保护效力。【结果】rFPVLP-△73LRH5A和rFPVLP-△214LRH5A体外诱导脾细胞产生的IFN量显著高于rFPVLP-12LSH5A,而免疫10d后的CD4+/CD8+比值显著低于rFPVLP-12LSH5A;3种重组鸡痘病毒诱导外周血淋巴细胞增殖的能力没有明显差异;3种重组病毒在SPF鸡均产生针对H5亚型AIV的HI抗体,免疫14d后rFPVLP-△214LRH5A组诱生的HI抗体水平显著低于rFPVLP-12LSH5A组的抗体,但3组在免疫21d后HPAIV的致死性攻击时,均100%被保护。【结论】鸡痘病毒ORF73和ORF214编码蛋白具有IL-18结合蛋白抑制IFN产生的功能,虽然缺失株和亲本株重组鸡痘病毒在细胞和体液免疫应答存在一定差异,但在SPF鸡均能诱导产生良好的免疫保护。

关键词：重组鸡痘病毒 ORF73 ORF214 免疫应答

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表达鸡白细胞介素2重组鸡痘病毒的构建及其体外表达产物生物活性的检测

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生物工程学报 2004年第1期20卷 136-139页

作者：邵卫星彭大新卢建红韦栋平刘玉良刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

从ConA刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 2 (ChIL 2 )基因编码区。将该编码区cDNA序列和调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE L)的基因片段定向克隆到鸡痘病毒转移载体p1175中 ,获得重组转移载体p1175IL2 ,然后转染已感染鸡痘病毒 ... 详细信息

从ConA刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 2 (ChIL 2 )基因编码区。将该编码区cDNA序列和调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE L)的基因片段定向克隆到鸡痘病毒转移载体p1175中 ,获得重组转移载体p1175IL2 ,然后转染已感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株 (wt FPV)的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,质粒p1175IL2与wt FPV基因组DNA发生同源重组 ,产生了表达ChIL 2的重组鸡痘病毒rFPV IL2。通过在含X gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑 ,获得并纯化重组鸡痘病毒rFPV IL2。应用XTT PMS方法检测的rFPV IL2 (M .O .I 2 0 )感染CEF 72小时后细胞上清中表达的重组ChIL 2生物活性 ,效价为 3 6× 10 5u mL ,表明rFPV IL2能有效地表达ChIL 2。下一步将利用rFPV IL2在体内表达ChIL 2 ,研究ChIL 2的免疫增强作用及其作用机理。

关键词：表达鸡白细胞介素2 重组鸡痘病毒构建体外表达产物生物活性

来源：评论

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表达新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

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生物工程学报 2000年第5期16卷 591-594页

作者：吴艳涛彭大新刘秀梵刘伟忠张如宽扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

将新城疫病毒 (NDV)F48E8株融合蛋白基因导入鸡痘病毒 (FPV)插入载体 pFG1175 1的P7 5启动子下游 ,得到转移载体pFG1175 1重组质粒。采用脂质体转染技术 ,将该质粒转染FPV2 82E4株感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)。经过多次蓝斑筛选纯化 ... 详细信息

将新城疫病毒 (NDV)F48E8株融合蛋白基因导入鸡痘病毒 (FPV)插入载体 pFG1175 1的P7 5启动子下游 ,得到转移载体pFG1175 1重组质粒。采用脂质体转染技术 ,将该质粒转染FPV2 82E4株感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)。经过多次蓝斑筛选纯化 ,获稳定的重组病毒rFPV NDF。间接免疫荧光试验表明 ,rFPV NDF感染的CEF中表达了NDV的融合蛋白。用rFPV NDF免疫的SPF试验鸡能产生对NDV强毒攻击的免疫力 ,保护率达96 3%。

关键词：重组鸡痘病毒新城疫融合蛋白免疫力

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