检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏某奶牛场健康奶牛体内产志贺毒素大肠杆菌的分离鉴定及其对小鼠致病性的研究

畜牧兽医学报 2011年第6期42卷 830-837页

作者：薛涛顾丛丛高崧焦新安周琼张文俊刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

通过对江苏省某奶牛场连续6个月的定群、定畜跟踪调查,获得产志贺毒素大肠杆菌(STEC)在该牛场分布的广泛性、持续性和血清型多样化的资料,并对一些重要血清型分离株作致病性的鉴定。基于本实验室已经建立的多重PCR方法对stx1、stx2、eae... 详细信息

通过对江苏省某奶牛场连续6个月的定群、定畜跟踪调查,获得产志贺毒素大肠杆菌(STEC)在该牛场分布的广泛性、持续性和血清型多样化的资料,并对一些重要血清型分离株作致病性的鉴定。基于本实验室已经建立的多重PCR方法对stx1、stx2、eaeA、ehxA共4个基因进行检测,对检测出的阳性样品,非O157STEC采用多重PCR结合CT-SMAC平板的分离方法,而O157STEC通过免疫磁珠结合O157显色平板的分离方法。结果表明,该奶牛场STEC的初筛率为16.1%(112/696),分离率为11.1%(77/696)。分离株属于35种O血清型和60种O∶H血清型。该场的优势血清型为O4、O26和O93,O157在该场存在,但并非优势血清型。77个分离株中,stx2基因的检出率为68.8%,远远高于其它毒力基因,如stx1(19.5%)、eaeA(11.7%)和ehxA(20.8%)。该场分离到一些O157和O26血清型的菌株,对小鼠具有较强的致病性。奶牛是STEC的天然宿主,可健康带菌。除了O157STEC外,非O157STEC中一些高致病力菌株对人类的健康也存在威胁。

关键词：产志贺毒素大肠杆菌奶牛多重PCR O抗原 H抗原毒力基因

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产志贺毒素大肠杆菌O18 XZ113株主要毒力基因eaeA、stx2、ehxA突变株的构建及其对小鼠的致病作用

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微生物学报 2011年第12期51卷 1655-1662页

作者：薛涛陈先亮高崧刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】探讨毒力基因eaeA、stx2、ehxA与产志贺毒素大肠杆菌O18致病力的关系。【方法】利用λ-Red重组系统,构建STEC XZ113株eaeA、stx2、ehxA基因缺失突变株并进行一系列生物学特性的研究。【结果】细胞粘附试验表明突变株XZ113△eaeA... 详细信息

【目的】探讨毒力基因eaeA、stx2、ehxA与产志贺毒素大肠杆菌O18致病力的关系。【方法】利用λ-Red重组系统,构建STEC XZ113株eaeA、stx2、ehxA基因缺失突变株并进行一系列生物学特性的研究。【结果】细胞粘附试验表明突变株XZ113△eaeA对HEp-2细胞的粘附能力明显降低;Vero细胞毒素试验表明突变株XZ113△stx2失去了使Vero细胞发生病变的能力;溶血活性试验表明突变株XZ113△ehxA无法在血平板上产生溶血圈,丢失了溶血能力。回复株在以上表型方面与野生株XZ113一致;与亲本株的体外竞争试验结果表明,突变株竞争力减弱,体内竞争结果表明突变株XZ113△eaeA被中度致弱;突变株XZ113△stx2和突变株XZ113△ehxA被高度致弱。【结论】stx2、ehxA基因在STEC O18 XZ113株的致病过程中发挥着更为重要的作用。

关键词：产志贺毒素大肠杆菌 O18 eaeA、stx2、ehxA基因突变株致病性

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稳定表达人Siat7e基因的MDCK细胞系的建立和全悬浮细胞的驯化

引用

中国生物工程杂志 2011年第11期31卷 75-80页

作者：张妍张文俊李群辉刘晓文刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的:现有的禽流感疫苗生产的方法已经不能适应工业化大生产的需求,有必要开发全悬浮培养的细胞系来满足大生产的需求。方法:我们通过转染稳定表达Siat7e基因的真核表达载体对MDCK细胞进行改造,并经过后期的驯化,筛选适应于全悬浮培养的... 详细信息

目的:现有的禽流感疫苗生产的方法已经不能适应工业化大生产的需求,有必要开发全悬浮培养的细胞系来满足大生产的需求。方法:我们通过转染稳定表达Siat7e基因的真核表达载体对MDCK细胞进行改造,并经过后期的驯化,筛选适应于全悬浮培养的MDCK细胞。结果:成功筛选到能稳定表达Siat7e基因并能适应全悬浮生长的细胞系。结论:该细胞系具有潜在的应用价值,为MDCK细胞的培养以及工业化大生产疫苗提供参考。

关键词： MDCK Siat7e 全悬浮疫苗生产

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一株H11N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析

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畜牧兽医学报 2011年第2期42卷 217-223页

作者：赵坤坤张妍段志强钟蕾朱艳梅赵国刘晓文刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了解禽流感病毒在华东地区家禽体内的进化情况,作者对华东地区某活禽市场的家禽进行了禽流感病毒的流行病学监测,并分离鉴定出1株H11N2亚型禽流感病毒A/duck/Jiangxi/k0701/2009。对该株病毒全基因组的遗传进化分析表明A/duck/Jiangxi... 详细信息

为了解禽流感病毒在华东地区家禽体内的进化情况,作者对华东地区某活禽市场的家禽进行了禽流感病毒的流行病学监测,并分离鉴定出1株H11N2亚型禽流感病毒A/duck/Jiangxi/k0701/2009。对该株病毒全基因组的遗传进化分析表明A/duck/Jiangxi/k0701/2009的8个基因片段来源广泛,与亚洲及欧洲某些地区的毒株存在广泛的重组现象。其PB2基因和NS基因可能由A/mallard/Korea/GH170/2007(H7N7)提供,NA基因与高致病性禽流感病毒A/duck/Hebei/0710/2009(H5N2)的NA基因亲缘关系较近,而PB1、PA和NP基因则可能与A/Muscovy duck/Thailand/CU-LM1984/2009(H4N9)有共同来源。本研究结果提示该株病毒可能为1株多元重组病毒,且可能在高致病性禽流感病毒的进化中起了重要作用。

关键词：禽流感病毒 H11N2亚型遗传进化分析基因重组

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HA基因138位点突变提高H5亚型禽流感疫苗候选株在鸡胚中的繁殖能力

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江苏农业科学 2011年第3期39卷 38-41页

作者：张文俊薛涛钟蕾宋庆庆吴小伟张妍刘秀梵扬州大学/农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

目前,H5亚型禽流感疫苗的大规模生产仍使用鸡胚培养的重组病毒灭活疫苗。为加深对重组病毒在鸡胚中繁殖适应性分子机制的理解,并获得在鸡胚中的高产疫苗候选株,以反向遗传技术构建了H5亚型禽流感疫苗候选株SF/H5N1,并在鸡胚尿囊腔中连... 详细信息

目前,H5亚型禽流感疫苗的大规模生产仍使用鸡胚培养的重组病毒灭活疫苗。为加深对重组病毒在鸡胚中繁殖适应性分子机制的理解,并获得在鸡胚中的高产疫苗候选株,以反向遗传技术构建了H5亚型禽流感疫苗候选株SF/H5N1,并在鸡胚尿囊腔中连续传代。同时对第1、6、7和10代病毒的全基因组序列进行了分析和发生点突变片段的结构模拟。结果均表明,HA片段138位丙氨酸(A)向丝氨酸(S)的突变与重组病毒SF/H5N1在鸡胚传代过程中繁殖性能升高相关。对不同来源重组病毒LF/H5N1进行A138S突变,产生了相似的效果。并且,A138S突变未明显改变重组病毒的抗原性和对鸡胚的致病力。因此,A138S突变对H5亚型禽流感疫苗候选株的鸡胚适应性具有重要影响,在疫苗生产中具有应用价值。

关键词：禽流感病毒反向遗传疫苗病毒繁殖

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新城疫病毒ClassⅠ与ClassⅡ毒株交叉血凝抑制试验快速分类

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中国家禽 2011年第4期34卷 14-17,21页

作者：王晓泉刘晓文胡顺林刘慧谋刘文博刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

ClassⅠ新城疫病毒(NDV)分离自健康家禽泄殖腔棉拭子,其基因序列与ClassⅡNDV存在很大差异,为了建立简单快速的NDV分类方法,用SPF鸡制备ClassⅠ和ClassⅡ毒株多价抗血清分别与选取的ClassⅠ和ClassⅡ代表毒株进行交叉血凝抑制反应。结... 详细信息

ClassⅠ新城疫病毒(NDV)分离自健康家禽泄殖腔棉拭子,其基因序列与ClassⅡNDV存在很大差异,为了建立简单快速的NDV分类方法,用SPF鸡制备ClassⅠ和ClassⅡ毒株多价抗血清分别与选取的ClassⅠ和ClassⅡ代表毒株进行交叉血凝抑制反应。结果表明所有ClassⅠ毒株比同ClassⅡ毒株的交叉血凝抑制值高8～64(3～6log2)倍;而ClassⅡ毒株与ClassⅡ抗血清的HI效价比同ClassⅠ毒株的交叉血凝抑制值高2～8(1～3log2)倍,结果与基因分型高度一致,说明可以用交叉血凝抑制试验进行初步分类。本研究结果显示,NDVClassⅠ弱毒株血凝性与广泛应用的NDV弱毒疫苗株不同,基因序列分析可以部分解释这种差异,另外可能HN蛋白的空间结构也会影响其与血凝素结合的特性。

关键词：新城疫病毒 Class Ⅰ和ClassⅡ 交叉血凝抑制性

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活禽市场中4株鹅源新城疫病毒的分离与鉴定

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中国家禽 2011年第22期33卷 60-61,63页

作者：刘慧谋胡顺林朱杰赵国王晓泉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

过去，一般认为水禽对新城疫病毒（Newcasfie disease virus，NDV）有较强的抵抗力，感染后不容易发病和造成流行或暴发。然而，自上世纪90年代后期以来，我国大面积出现了鹅群感染NDV并严重发病、死亡的事件，给养禽业造成了严重的威... 详细信息

过去，一般认为水禽对新城疫病毒（Newcasfie disease virus，NDV）有较强的抵抗力，感染后不容易发病和造成流行或暴发。然而，自上世纪90年代后期以来，我国大面积出现了鹅群感染NDV并严重发病、死亡的事件，给养禽业造成了严重的威胁和损失，引起了众多研究者和从业者的高度关注。

关键词：鹅源新城疫病毒鉴定分离市场活禽 virus 易发病抵抗力

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H5亚型禽流感疫苗变异候选株的构建

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中国家禽 2011年第8期33卷 14-18页

作者：张文俊薛涛吴小伟张妍钟蕾彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

本文就2008年在江苏某鸡场分离到的一株发生抗原变异的H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Huadong/4/2008(wt-DT株)开展如下研究:利用反向遗传技术,删除wt-DT株病毒血凝素(HA)基因多碱性氨基酸序列,使之成为低致病特征,再与wt-DT株的神经氨酸... 详细信息

本文就2008年在江苏某鸡场分离到的一株发生抗原变异的H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Huadong/4/2008(wt-DT株)开展如下研究:利用反向遗传技术,删除wt-DT株病毒血凝素(HA)基因多碱性氨基酸序列,使之成为低致病特征,再与wt-DT株的神经氨酸酶(NA)基因组合,结合鸡胚高产病毒PR8株的6个内部片段骨架,构建针对此种变异H5亚型禽流感的疫苗株,结果成功拯救出重组病毒rH5N1/PR8。病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖能力,相对于wt-DT株,rH5N1/PR8在MDCK细胞上的繁殖能力明显提高。rH5N1/PR8对SPF鸡和鸡胚无致病性,在鸡体内的免疫保护效果良好,符合疫苗候选株的标准。

关键词：禽流感病毒反向遗传 H5亚型疫苗

来源：评论

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细胞来源流感疫苗研究进展

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中国家禽 2011年第16期33卷 43-46,49页

作者：张文俊薛涛吴小伟张妍钟蕾刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

当面临高致病性流感全球大流行时,传统的鸡胚生产方法可能不足以满足疫苗市场的需求。研究机构和疫苗公司正在合作开发新的生产技术,以达到省时高效的目的。细胞培养作为鸡胚生产方式的一种补充或替代方法,不仅适用于人用疫苗的生产,而... 详细信息

当面临高致病性流感全球大流行时,传统的鸡胚生产方法可能不足以满足疫苗市场的需求。研究机构和疫苗公司正在合作开发新的生产技术,以达到省时高效的目的。细胞培养作为鸡胚生产方式的一种补充或替代方法,不仅适用于人用疫苗的生产,而且正逐渐引起禽用疫苗生产商的重视。本文对细胞培养疫苗生产方式的特征和优点,以及近年来利用Vero、MDCK和PER.C6细胞生产疫苗的研究进展作一综述。

关键词：细胞流感疫苗

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鸡胚成纤维细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

引用

扬州大学学报（农业与生命科学版） 2011年第2期32卷 1-5页

作者：段志强王郁杨朱艳梅开妍胡顺林王晓泉刘秀梵扬州大学兽医学院/农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装... 详细信息

选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装配和出芽的影响。结果表明：提取的细胞总RNA的D260 nm/D280 nm为1.96,甲醛变性琼脂糖凝胶显示RNA未发生降解,质量良好。获得的文库容量为3×106cfu,插入的双链cDNA片段大小为0.3~3 kb,平均长度为1.3 kb左右,文库重组率为100%。该文库的构建为发现和研究与NDV M蛋白相互作用的宿主细胞蛋白提供有效工具。

关键词：新城疫病毒鸡胚成纤维细胞酵母双杂交 cDNA文库 SMART技术

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