检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2009年第2期25卷 117-124页

作者：姚春峰刘文博胡顺林马怀良薛峰刘慧谋刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

通过部分生物学特性鉴定、RT-PCR及F基因的序列测定与遗传进化分析,对2005~2006年从我国江苏省和广西省部分地区的发病鸡群和鹅群中分离到的20株新城疫病毒(NDV)进行了研究。各分离株经典毒力测定结果显示:MDT在45.3h^58.2h之间,ICPI在1... 详细信息

通过部分生物学特性鉴定、RT-PCR及F基因的序列测定与遗传进化分析,对2005~2006年从我国江苏省和广西省部分地区的发病鸡群和鹅群中分离到的20株新城疫病毒(NDV)进行了研究。各分离株经典毒力测定结果显示:MDT在45.3h^58.2h之间,ICPI在1.61~2.00之间,均为新城疫病毒强毒株特征。血凝解脱及血凝素热稳定性试验显示:各分离株的血凝解脱时间短,血凝素热稳定性较差,符合NDV强毒株的特征。F基因的序列测定表明,分离株之间的核苷酸序列具有79.7%~100%的同源性,与疫苗株LaSota的同源性为78.1%~83.4%;与国内标准强毒株F48E8同源性为80.2%~90.1%。推导其氨基酸序列分析表明,各分离株的F蛋白的裂解位点氨基酸组成为112R-R-Q-R/K-R-F117,具有NDV强毒株特征,与毒力测定结果相符。根据序列所绘制系统进化发生树,表明20株NDV分离株中有18株为基因Ⅶd型,2株为基因Ⅲ型。

关键词：新城疫病毒生物学特性毒力 F基因序列分析

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简化RACE方法测定基因III、VIb和VIId型新城疫病毒leader和trailer序列及分析

简化RACE方法测定基因III、VIb和VIId型新城疫病毒leader和traile...

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：仇旭升丁铲陈鸿军刘秀梵中国农业科学院上海兽医研究所上海 200241 中国农业科学院上海兽医研究所上海 200241 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州 225009

目的:利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplificalion of cDNA ends，RACE)测定基因Ⅲ、VIb和VIId型新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)基因组两侧末端序列，并对NDV的leader和trailer进行分析。方法:利用T4 RNA连接酶将特... 详细信息

目的:利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplificalion of cDNA ends，RACE)测定基因Ⅲ、VIb和VIId型新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)基因组两侧末端序列，并对NDV的leader和trailer进行分析。方法:利用T4 RNA连接酶将特定寡聚核苷酸片段的连接于病毒基因组RNA和cDNA，再利用RT-PCR或PCR方法对病毒基因组的末端进行快速的扩增。结果:建立一套操作简单、低成本、可重复性高的RACE方法，测定了三种基因型5株NDV 3’末端leader和5’末端trailer序列比对分析结论:本实验测定的鹅源Ⅶ型毒株JS/7/05/Ch基因组的15，184nt由一个T变为了C，5’端trailer与3’端leader的连续互补序列由8 nt变为12 nt，而其它4株基因Ⅲ型和Ⅵ型NDV均未发现该突变。通过RNA的二级结构分析，NDV基因组和反向基因组RNA的3’末端形成-个发卡结构。JS/7/05/Ch等3株NDV U→C(T→C)的突变位于发卡环上，不影响二级结构的形成，发卡环的RNA序列突变为3’-UCUC-5’，与基因组3’端发卡环的3’-UCUUA-5’相似，推测可能影响了基因组RNA的复制速度。

关键词：新城疫病毒基因测定序列分析快速扩增技术

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简化cDNA末端快速扩增技术测定基因Ⅲ、Ⅵb和Ⅶd型新城疫病毒基因组末端序列及分析

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微生物学报 2009年第7期49卷 965-971页

作者：仇旭升孙庆王伟伟董丽吴双胡顺林吴艳涛刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】简化cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNAends,RACE)流程,测定基因Ⅲ、Ⅵb和Ⅶd型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因组两侧末端序列,并对NDV的leader和trailer进行分析。【方法】利用T4 RNA连接酶将特定寡聚核苷酸片段的连接于病毒基因组RNA和cDNA,再利用RT-PCR或PCR方法对病毒基因组的末端进行快速的扩增。【结果】建立一套操作简单、低成本、可重复性高的RACE方法,测定了三种基因型5株NDV3’末端leader和5’末端trailer序列比对分析。【结论】本实验测定的鹅源VII型毒株JS/7/05/Ch基因组的15,184 nt由一个T变为了C,5’端trailer与3’端leader的连续互补序列由8 nt变为12 nt,而其它4株基因Ⅲ型和VI型NDV均未发现该突变。通过RNA的二级结构分析,NDV基因组和反向基因组RNA的3’末端形成一个发卡结构。JS/7/05/Ch等3株NDV U→C(T→C)的突变位于发卡环上,不影响二级结构的形成,发卡环的RNA序列突变为3’-UCUC-5’,与基因组3’端发卡环的3’-UCUUA-5’相似,推测可能影响了基因组RNA的复制速度。

关键词： cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNA ends RACE) 基因Ⅲ型基因VIb型新城疫病毒基因组3’末端(1eader) 基因组5’末端(trailer)

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共表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力研究

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病毒学报 2009年第6期25卷 430-436页

作者：云水丽张伟刘武杰张小荣陈素娟吴艳涛彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

将H5亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因和鸡白介素(chiIL-2)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体p12LS的启动子Ps和PE/L下游,使这两个基因反向串联,构建携带AIV HA基因和chiIL-2基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒p12LSH5AIL2。将重组鸡痘病... 详细信息

将H5亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因和鸡白介素(chiIL-2)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体p12LS的启动子Ps和PE/L下游,使这两个基因反向串联,构建携带AIV HA基因和chiIL-2基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒p12LSH5AIL2。将重组鸡痘病毒转移载体质粒转染至已感染野生型鸡痘病毒282E4株的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,经蓝斑筛选获得纯化的重组鸡痘病毒rFPV-H5AIL2。间接免疫荧光试验表明重组鸡痘病毒能够表达H5亚型AIV HA;RT-PCR和间接免疫荧光试验证实重组鸡痘病毒可表达chiIL-2。SPF鸡和商品蛋鸡的免疫攻毒保护试验表明,经rFPV-H5AIL2免疫的试验鸡的抗体水平显著高于经rFPV-H5A免疫的试验鸡;在SPF鸡中rFPV-H5AIL2免疫组和rPFV-H5A免疫组的攻毒保护率和排毒率相当,但在商品鸡中rFPV-H5AIL2免疫组的攻毒保护率显著高于rFPV-H5A免疫组,而排毒率显著低于后者。本研究为研制新型禽流感重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。

关键词：禽流感病毒血凝素鸡白细胞介素2 重组鸡痘病毒免疫效力

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两株基因Ⅲ型强毒新城疫的全基因组测序及其与Ⅰ系苗的亲缘性分析

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微生物学报 2009年第3期49卷 302-308页

作者：仇旭升孙庆姚春峰董丽吴艳涛胡顺林刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

【目的】研究基因III型新城疫(Newcastle disease,ND)强毒分离株JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go与中等毒力疫苗株Mukteswar的亲缘性关系,分析三株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的全基因差异。【方法】采用RT-PCR方法获得两株NDV分离株的全基因组核苷酸序列,与GenBank中公布的Mukteswar序列比对分析。【结果】强毒分离株与中等毒力疫苗株Mukteswar全基因组核苷酸同源性均为99.7%;病毒6个阅读框核苷酸序列与Mukteswar同源性为99.6%～99.9%;预测的8种病毒编码蛋白同源性在98.8%～99.8%。然而,测定MDT,ICPI和IVPI发现JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go毒力明显强于Mukteswar,其中JS/7/05/Ch株的IVPI达到了2.18。【结论】综合3株NDV的遗传分析结果和已有的流行病学资料可以推断分离株JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go是由疫苗株Mukteswar自然进化而来的返强毒株。因此,必须停止使用中等毒力疫苗以免造成更大的危害。

关键词：基因Ⅲ型新城疫病毒 Mukteswar 全基因组毒力返强

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嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护

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中国兽医学报 2009年第9期29卷 1097-1102页

作者：程旭宋益盛瑜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及真核表达质粒pcDNA3．1／V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0．07～0．60不等的商品猪，9头猪随机分为4组，1组（3头）肌肉注射免疫10^3.5 TCID50的PCV1-2／头，2组（2头... 详细信息

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及真核表达质粒pcDNA3．1／V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0．07～0．60不等的商品猪，9头猪随机分为4组，1组（3头）肌肉注射免疫10^3.5 TCID50的PCV1-2／头，2组（2头）肌肉注射真核表达质粒200μg／头，3组（2头）肌肉注射空载体（pcDNA3．1）200μg／头，4组（2头）不免疫作为攻毒对照组。于免疫后42d，PCV1—2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体。免疫后42d所有组攻毒PCV2和PRRSV，剂量分别为2×10^4.5 TCID50／头和10^6 TCID50／头。攻毒后21d，攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大，免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒栽量低于对照组，攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组。这些结果表明，嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后，对PCV2感染能产生保护性免疫应答，有可能成为候选疫苗。

关键词：嵌合型猪圆环病毒(PCV1—2) 真核表达质粒免疫保护

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表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组马立克氏病病毒的构建

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中国兽医学报 2009年第10期29卷 1264-1268页

作者：郦晓琼吴艳涛徐晓静王郁杨扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用聚合酶链反应或反转录-聚合酶链反应扩增出H5亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因、网状内皮增生症病毒的长末端重复序列(LTR)、马立克氏病病毒(MDV)Rispens CVI988毒株基因组的sorf 1和sorf 2序列、两端带loxp位点的lac/smGFP标志基因,构... 详细信息

采用聚合酶链反应或反转录-聚合酶链反应扩增出H5亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因、网状内皮增生症病毒的长末端重复序列(LTR)、马立克氏病病毒(MDV)Rispens CVI988毒株基因组的sorf 1和sorf 2序列、两端带loxp位点的lac/smGFP标志基因,构建含这些基因的转移载体质粒pMHA;以MDV Rispens CVI988毒株的基因组DNA和pMHA质粒DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),采用同源重组方法将LTR、lac/smGFP和HA基因插入到MDV基因组,获得重组病毒rMDV-HA/GFP;以cre介导的同源重组去除lac/smGFP标志基因,再转染CEF,获得仅带LTR启动子和HA基因的重组MDV疫苗毒株rMDV-HA。rMDV-HA仍保留了MDV RispensCVI988疫苗毒株的复制特点,并能稳定表达AIV的HA。

关键词：禽流感病毒马立克氏病病毒血凝素同源重组

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鹅源新城疫病毒基因组密码子使用分析

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中国家禽 2009年第11期31卷 19-23页

作者：曹永忠顾敏刘文博刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)的跨种间传播机制是近年来研究的热点。选择NDV鹅源毒株ZJ1、SF02以及鸡源株、鸽源株和疫苗株La Sota株的全基因组序列,对其6个结构蛋白基因编码区序列运用SMS和Codon W软件进行了密码子使用分... 详细信息

新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)的跨种间传播机制是近年来研究的热点。选择NDV鹅源毒株ZJ1、SF02以及鸡源株、鸽源株和疫苗株La Sota株的全基因组序列,对其6个结构蛋白基因编码区序列运用SMS和Codon W软件进行了密码子使用分析,同时从物种密码子数据库获得鹅、鸡的密码子使用数据,与NDV基因组密码子使用情况进行比较。结果显示:鹅源、鸡源、鸽源与疫苗株NDV的基因组密码子使用情况基本一致;基因组密码子使用的偏向性较小,全基因组ENC值为57,6个编码基因的NEC值从54～60不等;基因组在密码子使用上存在28个优先使用的密码子,其中8个为高频使用密码子。鹅源NDV与鹅、鸡密码子使用偏性基本一致,仅5～6个密码子存在差异。

关键词：新城疫病毒密码使用比较

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家养野猪断奶多系统衰竭综合征的诊断

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中国兽医杂志 2009年第11期45卷 73-74页

作者：王海燕朱丽娜程旭焦库华高崧扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

江苏某养殖户养殖18头野猪,2007年10月20日到本院动物医院就诊。据该养殖户介绍,该猪为2月龄,18头中有10头发病,已死亡2头,主要是断奶后发育迟缓、消瘦、气喘,剖检可见淋巴结水肿、出血;肺脏淤血、水肿;大、小肠出血;肾有出血点;肝淤血... 详细信息

江苏某养殖户养殖18头野猪,2007年10月20日到本院动物医院就诊。据该养殖户介绍,该猪为2月龄,18头中有10头发病,已死亡2头,主要是断奶后发育迟缓、消瘦、气喘,剖检可见淋巴结水肿、出血;肺脏淤血、水肿;大、小肠出血;肾有出血点;肝淤血、水肿;[第一段]

关键词：断奶多系统衰竭综合征野猪诊断家养养殖户动物医院发育迟缓肝淤血

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新城疫病毒反向遗传载体的构建及其外源基因表达的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2009年第1期 19-20页

作者：曹军平胡顺林扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

新城疫(newcastle disease,ND)是由NDV引起的多种禽类发生高度死亡的一种重要传染病。文章对NDV反向遗传载体的构建及其表达外源基因的研究进展进行了综述,并展示了其广阔的应用前景。

关键词：新城疫病毒反向遗传载体外源基因表达

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