检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2006年第1期46卷 111-114页

作者：陈素娟孙蕾刘武杰孙学辉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗,将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同... 详细信息

为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗,将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同的外源基因且两基因盒方向为背向串联的重组转移载体p11SH5ANA。将p11SH5ANA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中。p11SH5ANA与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV-11SH5ANA。通过在含X-Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑,获得纯化的重组病毒。经传代证实该重组病毒具有良好的遗传稳定性。用105PFU的rFPV-11SH5NA免疫无特定病原体(SPF)鸡,能激发机体产生有效的血凝抑制(HI)抗体。初步的动物试验表明,该重组病毒能使经肌肉注射攻毒的SPF鸡抵抗H5亚型AIV的致死性攻击,保护率为100%,显示出一定的应用前景。

关键词： H5亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒血凝素神经氨酸酶

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H5N1亚型禽流感病毒拯救体系的建立

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微生物学报 2006年第1期46卷 55-59页

作者：龙进学吴艳涛张小荣王曲直刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

选择鸡胚高产的鸭源H5N1亚型禽流感病毒A／Duck／Shandong／093／2004株作为骨架病毒，在完成了全基因组序列测定基础上，设计合成的11对引物对病毒的8个基因分11段进行扩增。通过与转录载体PHW2000连接，构建A／SD／04的8个基因的拯救... 详细信息

选择鸡胚高产的鸭源H5N1亚型禽流感病毒A／Duck／Shandong／093／2004株作为骨架病毒，在完成了全基因组序列测定基础上，设计合成的11对引物对病毒的8个基因分11段进行扩增。通过与转录载体PHW2000连接，构建A／SD／04的8个基因的拯救载体，经测序获得序列准确的拯救质粒：241、242、243、244、245、246、247和248。A／SD／04的8质粒与PR8（H1N1）进行不同组合的拯救，获得8个均含A／SD／04HA基因的H5重组流感病毒。鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝效价在2^8-2^10，EID50在10^-8.5 - 10^-9之间，MDT在34～46h之间，均与野生A／SD／04（wt A／SD／04）相似。重组病毒对6周龄的SPF鸡的静脉接种指数（IVPI）与wt A／SD／04却有明显的差异，说明不同组合的内部基因影响病毒对鸡的致病力，但不影响病毒的鸡胚致死能力、对鸡胚的感染能力和病毒在鸡胚中的繁殖能力。构建的A／SD／04的8个质粒拯救系统，为H5NI的基因功能研究和新型疫苗开发奠定基础。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒 8质粒拯救系统病毒拯救重组病毒

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抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第4期22卷 510-512页

作者：戴华焦新安潘志明黄金林胡茂志唐伟刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb)。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Wester... 详细信息

目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb)。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Westernblot鉴定mAb的特异性。结果:获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3,其Ig亚类均为IgG2a,腹水mAb1G5、5E3的ELISA效价分别为1∶1600000,1∶120000。在Dot-ELISA试验中,这2株mAb均只与表达His-ChIFN-γ及GST-ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,与未表达这2种IFN-γ的其他8种菌株均不发生反应。在蛋白质印迹试验中,2株mAb均能与融合蛋白GST-ChIFN-γ、His-ChIFN-γ发生反应,出现特异性条带。结果表明,mAb1G5、5E3是针对鸡γ-干扰素的特异性mAb。结论:成功地制备抗鸡γ-干扰素的mAb,它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应用价值。

关键词：鸡γ-干扰素(ChIFN-γ) 单克隆抗体

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H4亚型家养水禽流感病毒分离株的表面膜蛋白基因的序列测定和遗传进化分析

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畜牧兽医学报 2006年第12期37卷 1334-1339页

作者：薛峰顾敏彭宜姚春峰张评浒钱忠明刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

采用常规的血清学试验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行4年多的监测,分离鉴定出多株H4亚型禽流感病毒。对其中的A/Duck/Yangzhou/216/2002(简称Dk/YZ/216/02)、A/Duck/Yangzhou/526/2003(简称Dk/YZ/526/03)、A/Duck/Yangzhou/36/2004(简称Dk/YZ/36/04)的血凝素基因和Dk/YZ/526/03、Dk/YZ/36/04的神经氨酸酶基因进行了克隆测序,并与GenBank中收录的其它序列进行了比较,遗传进化结果表明Dk/YZ/216/02的血凝素基因(HA)与毒株Tk/Minnesota/833/80(H4N2)同源性最高,而Dk/YZ/526/03和Dk/YZ/36/04的血凝素基因(HA)均与Budgerigar/Hokkaido/1/77(H4N6)同源性最高;而神经氨酸酶基因(NA)遗传进化分析结果表明Dk/YZ/36/04(H4N6)的NA基因与毒株Pigeon/Nanchang/8-142/2000(H3N6)同源性最高,而Dk/YZ/526/03(H4N2)的NA基因与Dk/Hokkaido/13/00(H9N2)同源性最高,3株禽流感病毒的HA推导的氨基酸剪切位点序列均为P-E-K-A-S-R,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,与对SPF鸡的致病力试验相吻合。

关键词：禽流感病毒 H4 HA NA 剪切位点

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禽流感病毒NS第263～277位核苷酸缺失降低其抗干扰素能力

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微生物学通报 2006年第2期33卷 34-39页

作者：龙进学王曲直刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

2000年以来，多数H5N1亚型禽流感病毒在NS基因的263～277位发牛15个碱基的缺失。为了研究此缺失在流感病毒进化中的生物学意义，构建H5N1亚型流感病毒A／SD／04株的HA、NA、NS的全基因表达载体，以及NS基因263～277位删除的突变载体。... 详细信息

2000年以来，多数H5N1亚型禽流感病毒在NS基因的263～277位发牛15个碱基的缺失。为了研究此缺失在流感病毒进化中的生物学意义，构建H5N1亚型流感病毒A／SD／04株的HA、NA、NS的全基因表达载体，以及NS基因263～277位删除的突变载体。通过反向遗传学技术，与编码WSN的其他内部基因（PB2，PB1，PA，NP和M）的表达载体进行组合转染，获得在NS基因的263～277位缺失和不缺失的2个重组H5N1亚型流感病毒（RWSN—m248和RWSN-248）。此两个重组病毒在无干扰素产生的Vero细胞上的繁殖滴度相似，在能产生干扰素的细胞MDCK和COS-1细胞上的繁殖滴度有明显差异。两个重组病毒在鸡胚中的繁殖滴，IVPI，MDT和EID50均无显著差异。说明NS基因的263～277位核苷酸的缺失不影响病毒的整体毒力，但降低了H5N1的抗干扰素能力。

关键词：拯救重组病毒 NS 缺失突变病毒空班形成单位(PFU)

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重组鸡痘病毒表达的鸡IL-1β、IL-2和髓细胞生长因子对新城疫La Sota疫苗免疫效果影响

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 544-548页

作者：邵卫星卢建红彭大新刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室

为研究在新城疫LaSota疫苗免疫不全的情况下,重组鸡痘病毒(rFPV)表达的鸡白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素2(IL-2)和髓细胞生长因子(MGF)是否具有免疫增强作用。10日龄SPF鸡随机分成8组(I～VIII),每组18只,每只接种1个半数保护剂量(PD... 详细信息

为研究在新城疫LaSota疫苗免疫不全的情况下,重组鸡痘病毒(rFPV)表达的鸡白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素2(IL-2)和髓细胞生长因子(MGF)是否具有免疫增强作用。10日龄SPF鸡随机分成8组(I～VIII),每组18只,每只接种1个半数保护剂量(PD50)的LaSota疫苗,同时免疫不同剂量的表达鸡IL-1β、IL-2或cMGF的rFPV(rFPV-IL-1β、IL-2、cMGF)。结果:rFPV表达的IL-1β、IL-2或cMGF可以消除鸡痘病毒在免疫早期对雏鸡体重增长的影响;一定剂量的IL-1β和IL-2可使鸡脾脏中CD4+T细胞和CD8+T细胞的总体水平提高;免疫21d后用新城疫的F48E8强毒经肌肉攻毒,一定剂量的IL-1β和IL-2(I和III组)能提高LaSota疫苗的免疫保护率,而cMGF却没有表现出这种作用。本研究表明rFPV表达的IL-1β和IL-2在一定的剂量下可以增强LaSota疫苗的免疫效果,具有免疫增强作用。

关键词：鸡痘病毒白细胞介素1β 白细胞介素2 髓细胞生长因子 La Sota疫苗

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重组鸡痘病毒表达的鸡IL-1β和IL-2以及cMGF对新城疫LaSota疫苗免疫效果的影响

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中国兽医科学 2006年第8期36卷 617-620页

作者：邵卫星卢建红彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

将128只10日龄SPF鸡随机分成8组,每只免疫1 PD_(50)的新城疫LaSota疫苗；同时Ⅰ～Ⅵ组鸡分别皮下注射不同剂量的重组鸡痘病毒rFPV-IL-1β、rFPV-IL-2或cMGF,而Ⅶ组和Ⅷ组鸡分别皮下注射鸡痘病毒wt-FPV和PBS作为阴性对照和空白对照。结果... 详细信息

将128只10日龄SPF鸡随机分成8组,每只免疫1 PD_(50)的新城疫LaSota疫苗；同时Ⅰ～Ⅵ组鸡分别皮下注射不同剂量的重组鸡痘病毒rFPV-IL-1β、rFPV-IL-2或cMGF,而Ⅶ组和Ⅷ组鸡分别皮下注射鸡痘病毒wt-FPV和PBS作为阴性对照和空白对照。结果,重组鸡痘病毒表达的IL-1β、IL-2或cMGF可以消除鸡痘病毒在免疫后第7d对雏鸡体重增长的影响；一定剂量的IL-1β和IL-2可使鸡脾中CD4^+T细胞在免疫后第7d和CD8^+T细胞在免疫后第14d的总体水平提高；免疫第21d新城疫F48E8强毒攻毒后,一定剂量的IL-1β和IL-2能提高免疫保护率,而cMGF却无此作用。结果表明,重组鸡痘病毒表达的IL-1β和IL-2在一定剂量下可增强新城疫LaSota疫苗的免疫效果。

关键词：鸡痘病毒白细胞介素-1β 白细胞介素-2 鸡髓细胞生长因子新城疫LaSota疫苗免疫效果

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2002-2005年华东地区家鸭中不同HA亚型低致病性禽流感病毒的分布

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中国人兽共患病学报 2006年第9期22卷 888-889,854页

作者：薛峰彭宜钱忠明张评浒刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

从2002年起我们对中国华东地区部分省市的家鸭进行LPAIVs的病毒学监测,主要对家鸭中AIVs的感染率、亚型分布、分布的时间规律等方面进行研究。其目的就是为我国制定禽流感防制措施提供详实的流行病学信息.并对水禽中流感病毒的自然基因... 详细信息

从2002年起我们对中国华东地区部分省市的家鸭进行LPAIVs的病毒学监测,主要对家鸭中AIVs的感染率、亚型分布、分布的时间规律等方面进行研究。其目的就是为我国制定禽流感防制措施提供详实的流行病学信息.并对水禽中流感病毒的自然基因库进行研究,探讨陆地家禽中流行的AIVs与水禽中流行的AIVs之间的关系。

关键词：禽流感病毒华东地区家鸭致病性 A亚型流行病学信息病毒学监测亚型分布

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新城疫病毒ZJ1株F蛋白裂解位点突变对其融合活性的影响

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微生物学通报 2006年第4期33卷 69-73页

作者：张艳梅胡顺林孙庆吴艳涛刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

新城疫病毒ZJ1毒株是近年来在我国水禽中流行并能引起水禽严重发病和死亡的强毒株,其F蛋白裂解位点有多个碱性氨基酸分布。将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸,构建了重组表达质粒pCI-FT... 详细信息

新城疫病毒ZJ1毒株是近年来在我国水禽中流行并能引起水禽严重发病和死亡的强毒株,其F蛋白裂解位点有多个碱性氨基酸分布。将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸,构建了重组表达质粒pCI-FT。分别将突变前后的F蛋白与该毒株的HN蛋白在COS-1细胞共表达,表明突变前后的F蛋白均有融合活性;分别将突变前后的F蛋白与该毒株的HN蛋白在CEF细胞共表达,表明突变后F蛋白被裂解的活性大大降低。以上研究为下一步在全长cDNA克隆水平上对F蛋白裂解位点氨基酸序列进行相应突变,研究毒力相关因素以及构建毒力致弱疫苗株等奠定基础。

关键词：新城疫病毒 F蛋白突变融合活性裂解活性

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肠致病性大肠杆菌(EPEC)的致病机理

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中国人兽共患病学报 2006年第6期22卷 590-593页

作者：宦海霞高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

腹泻性疾病是世界范围内的一个重要的公共卫生问题,每年死亡人数都超过200万,特别是那些不足5岁的婴幼儿。导致这些婴幼儿腹泻的一个最常见的病原是肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)。尽管近20年来对EPEC的致... 详细信息

腹泻性疾病是世界范围内的一个重要的公共卫生问题,每年死亡人数都超过200万,特别是那些不足5岁的婴幼儿。导致这些婴幼儿腹泻的一个最常见的病原是肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)。尽管近20年来对EPEC的致病机制有了较深入的研究,但还有许多问题需要进一步了解。[第一段]

关键词：肠致病性大肠杆菌致病机理婴幼儿腹泻公共卫生问题世界范围内腹泻性疾病死亡人数致病机制

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