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全国人畜共患病学术研讨会

作者：潘志明张晓明焦新安 Richard Lo-Man Claude Leclerc 刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室法国巴斯德研究所免疫调节生物学实验室

目的:分析重组减毒菌体外运送CD8T细胞表位的效应。方法:以表达OVA和LCMV CD8T细胞表位的重组菌13A（ptG2F）、25A（ptG2F）、SL7207（ptG2F）感染抗原提呈细胞LK、LL和骨髓源树突状细胞（BMDC）,应用体外抗原提呈试验检测抗原提呈细胞... 详细信息

目的:分析重组减毒菌体外运送CD8T细胞表位的效应。方法:以表达OVA和LCMV CD8T细胞表位的重组菌13A（ptG2F）、25A（ptG2F）、SL7207（ptG2F）感染抗原提呈细胞LK、LL和骨髓源树突状细胞（BMDC）,应用体外抗原提呈试验检测抗原提呈细胞对重组菌运送的CD8T细胞表位的提呈效应。结果:感染试验证实,减毒菌13A、25A和SL7207对LK细胞或L细胞均具有良好的侵袭能力,BMDC对重组菌具有很好的摄取功能。抗原提呈试验结果显示,在感染早期（2h）,LK、LL和BMDC细胞均可提呈重组菌13A（ptG2F）或SL7207（ptG2F）运送的T细胞表位;在感染晚期（48h）,LK细胞对OVA257-264 CD8T细胞表位提呈效应降低,LL细胞对LCMV 118-132 CD8T细胞表位提呈效应增强。三种抗原提呈细胞均未对25A（ptG2F）运送的T细胞表位产生提呈效应。另外,在同样的作用条件下,BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LK和LL细胞。结论:在体外证实了重组菌能运送CD8T细胞表位,为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴。

关键词： CD8+T细胞表位减毒大肠杆菌减毒鼠伤寒沙门氏菌体外抗原提呈试验

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携带新城疫病毒DNA疫苗的鼠伤寒沙门氏菌及其安全性与免疫效力

携带新城疫病毒DNA疫苗的鼠伤寒沙门氏菌及其安全性与免疫效力

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中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：潘志明焦新安黄金林殷月兰唐丽华张辉张晓明张小荣刘秀梵扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株JS5 F基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。将pVAX1 -F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL72... 详细信息

根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株JS5 F基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。将pVAX1 -F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F)。重组菌以不同剂量口服免疫1日龄雏鸡,结果表明,细菌对雏鸡具有良好的安全性,且不影响鸡的增重。将SL7207(pVAX1-F)分别以108CFU和 109CFU的剂量三次口服免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡,抗体检测结果显示,在三免后1周,SL7207(pVAX1-F)109CFU剂量组的血清抗体效价与空载体组之间存在显著性差异(P<0．05)。重组菌两个剂量组在首免后2周开始出现黏膜抗体,并于二免后2周和3周达到较高水平。免疫保护试验结果显示,SL7207(pVAX1-F)109 CFU剂量组的保护率为77．27％,与空载体组之间存在显著性差异(P<0．05)。

关键词：减毒沙门氏菌 DNA疫苗新城疫病毒安全性免疫效力

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强化动物禽流感的防控从源头上降低人类大流行流感发生的风险

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科技导报 2006年第3期24卷 1-1页

作者：刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

自1997年香港发生“禽流感事件”以来，特别是2003年底至2004年初亚洲近10个国家和地区相继发生H5N1亚型高致病性禽流感（以下简称H5N1禽流感）以来，全世界对该亚型禽流感已日益广泛而严重地关注。据FAO估计，该病在亚洲已造成约1.5亿... 详细信息

自1997年香港发生“禽流感事件”以来，特别是2003年底至2004年初亚洲近10个国家和地区相继发生H5N1亚型高致病性禽流感（以下简称H5N1禽流感）以来，全世界对该亚型禽流感已日益广泛而严重地关注。据FAO估计，该病在亚洲已造成约1.5亿家禽死亡或补扑杀，经济损失超过100亿美元，

关键词：高致病性禽流感 H5N1亚型风险人类源头防控动物强化 FAO 亚洲

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病毒在人类肿瘤治疗中的应用

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中国禽业导刊 2006年第3期23卷 14-14页

作者：张艳梅提金凤扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

早在100年前,人们就发现某些病毒可以选择性裂解肿瘤细胞.至20世纪70年代初,已经发现38种病毒对肿瘤细胞有裂解作用.近年来,随着分子生物学的发展,人们对肿瘤的发生机制、病毒复制以及调控机制有了深入了解,同时对病毒与细胞、病毒与免... 详细信息

早在100年前,人们就发现某些病毒可以选择性裂解肿瘤细胞.至20世纪70年代初,已经发现38种病毒对肿瘤细胞有裂解作用.近年来,随着分子生物学的发展,人们对肿瘤的发生机制、病毒复制以及调控机制有了深入了解,同时对病毒与细胞、病毒与免疫系统相互作用机理的认识也更加深入,利用病毒治疗肿瘤的研究有了突破性进展.和经典肿瘤治疗方法相比,肿瘤增殖病毒在肿瘤治疗方面具有以下几种优势:①病毒可以选择性地在肿瘤细胞内有效复制而对正常细胞无杀伤作用;②新的子代病毒自细胞中释放后继续感染邻近细胞并复制,最终将肿瘤细胞完全消灭;③病毒感染可以增强机体抗肿瘤免疫应答;④病毒可以作为基因治疗的载体,结合病毒治疗与基因治疗的优势,增强抗肿瘤效果;⑤可通过基因工程技术对病毒基因组改造,增强其治疗效果和安全性.

关键词：病毒复制肿瘤治疗 20世纪70年代肿瘤细胞应用人类相互作用机理基因工程技术裂解作用调控机制

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防控好动物禽流感降低人类大流行流感的发生

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北方牧业 2006年第21期 9-9页

作者：刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

近年来，禽流感给人类造成的损失不可估量。据FAO估计．禽流感在亚洲已造成约1.5～2．0亿家禽死亡或被销毁．经济损失远超过100亿美元，近2亿从事小规模家禽生产的农民的生计受到严重影响。我国家禽年生产量约130亿羽，2004年H5N1禽流... 详细信息

近年来，禽流感给人类造成的损失不可估量。据FAO估计．禽流感在亚洲已造成约1.5～2．0亿家禽死亡或被销毁．经济损失远超过100亿美元，近2亿从事小规模家禽生产的农民的生计受到严重影响。我国家禽年生产量约130亿羽，2004年H5N1禽流感暴发以来养禽业的经济损失严重．养禽业和相关行业的8000万从业人员受到影响。自2003年至2006年10月3日，全世界确诊感染H5NI亚型禽流感的人数累计已达252人．其中148人死亡，这导致全球对可能出现人大流行流感的严重关注。我国自2004年1月至2006年6月已报告发生H5N1禽流感近80起．涉及20多个省、市、自治区．死亡和销毁的家禽达数千万羽。自2005年至2006年10月3日底．我国已发生21例人类感染．其中14例死亡。

关键词：禽流感人类家禽生产动物防控经济损失 H5N1 从业人员

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强化动物禽流感的防控，从源头上降低人类大流行流感发生的风险

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中国学术期刊文摘 2006年第19期12卷插1页

作者：刘秀梵扬州市大学南路88号扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室　　江苏扬州　　（225002）

自1997年香港发生“禽流感事件”以来，特别是2003年底至2004年初亚洲近10个国家和地区相继发生H5N1亚型高致病性禽流感（以下简称H5N1禽流感）以来，全世界对该亚型禽流感已日益广泛而严重地关注。据FAO估计，该病在亚洲已造成约1．5... 详细信息

自1997年香港发生“禽流感事件”以来，特别是2003年底至2004年初亚洲近10个国家和地区相继发生H5N1亚型高致病性禽流感（以下简称H5N1禽流感）以来，全世界对该亚型禽流感已日益广泛而严重地关注。据FAO估计，该病在亚洲已造成约1．5亿家禽死亡或被扑杀，经济损失超过100亿美元，使近2亿从事小规模家禽生产的农民的生计受到严重影响。据WHO资料统计，该亚型病毒从2003年起至2006年2月6日止，已在7个国家中引起161例人类感染，其中86例死亡。由于该病毒有从业洲向世界其它地区扩散的趋势，因此，防控禽流感和应对可能发生的人类大流行流感已成为全世界面临的严峻问题。[第一段]

关键词：风险调节流感人/预防和控制禽流感/预防和控制动物人类

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鼠伤寒沙门氏菌SL7207 SifA^-突变株的构建和鉴定

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微生物学报 2005年第3期45卷 349-354页

作者：张晓明焦新安唐丽华潘志明殷月兰刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

鼠伤寒沙门氏菌SifA- 基因突变株的特点是能进入真核细胞的胞液。利用P2 2噬菌体转导技术构建了鼠伤寒沙门氏菌疫苗株SL72 0 7的SifA- 突变株SL72 0 7 ,该突变株与SL72 0 7有着相似的体外生长曲线和细胞侵袭力,SL72 0 7 在MDCK上皮细胞... 详细信息

鼠伤寒沙门氏菌SifA- 基因突变株的特点是能进入真核细胞的胞液。利用P2 2噬菌体转导技术构建了鼠伤寒沙门氏菌疫苗株SL72 0 7的SifA- 突变株SL72 0 7 ,该突变株与SL72 0 7有着相似的体外生长曲线和细胞侵袭力,SL72 0 7 在MDCK上皮细胞中的增殖能力增强,但在RAW2 6 4 7巨噬细胞中的生存能力减弱。小鼠毒力试验显示SL72 0 7 在BALB c小鼠体内毒力下降。仅SL72 0 7 在体外可向RAW2 6 4 7巨噬细胞递送真核表达质粒。SL72 0 7

关键词：鼠伤寒沙门氏菌,P22噬菌体 SifA基因疫苗载体

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水禽流感病毒分离株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)膜蛋白基因遗传进化分析

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微生物学报 2005年第4期45卷 491-495页

作者：张评浒刘晓文钱忠明唐应华刘秀梵薛峰郝贵杰扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

采用常规的血清学收验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行两年多的监测,分离鉴定出多株H6亚型禽流感病毒。对其中的一株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)(简称DkYZ23302)(H6N2)的表面膜蛋白基因进行了序列测定... 详细信息

采用常规的血清学收验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行两年多的监测,分离鉴定出多株H6亚型禽流感病毒。对其中的一株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)(简称DkYZ23302)(H6N2)的表面膜蛋白基因进行了序列测定,并与GenBank中收录的其它序列进行了比较,遗传进化结果表明DkYZ23302的血凝素基因(HA)与近年香港分离的鸭源毒株DkHK346199(H6N1)、中国台湾鸡源毒株CkTaiwanna398的亲缘关系最近;而神经氨酸酶基因(NA)遗传进化分析结果表明DkYZ23302(H6N2)的NA基因起源于禽源H9N2亚型流感病毒,这可能是不同亚型禽流感病毒在水禽体内发生基因重配的结果。DkYZ23302(H6N2)的HA推导的氨基酸剪切位点序列为P-Q-I-E-T-R-D,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,与对SPF鸡的致病力试验相吻合。

关键词：病毒分离株进化分析基因遗传低致病性禽流感病毒 RT-PCR方法 GenBank 神经氨酸酶基因 H9N2亚型遗传进化膜蛋白基因血凝素基因致病力试验华东地区分离鉴定序列测定亲缘关系中国台湾 NA基因分析结果特征序列

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利用反向遗传操作技术产生ZJI株鹅源新城疫病毒

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微生物学报 2005年第5期45卷 780-783页

作者：刘玉良张艳梅胡顺林吴艳涛刘秀梵龙进学石火英张小荣张如宽扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

利用反向遗传操作技术,将ZJI株鹅源新城疫病毒全基因组cNDA克隆(NDV3GM122)和含该毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCI-NP、pCI-P与pCI-L)共转染BSR-T7/5细胞;同时,将NDV3GM122与含新城疫病毒La Sota毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCIne... 详细信息

利用反向遗传操作技术,将ZJI株鹅源新城疫病毒全基因组cNDA克隆(NDV3GM122)和含该毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCI-NP、pCI-P与pCI-L)共转染BSR-T7/5细胞;同时,将NDV3GM122与含新城疫病毒La Sota毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCIneoNP、pCIneoP与pCIneoL)进行共转染。通过间接免疫荧光实验(Indiectimmunofluorescence assay,IFA)以及接种鸡胚后进行血凝(Hemagglutinin,HA)与血凝抑制(Hemagglutinininhibition,HI)试验、RT-PCR扩增和电镜观察,结果均证实全基因组cDNA克隆NDV3GM122与La Sota毒株表达载体共转染组产生了有血凝性的鹅源新城疫病毒,而NDV3GM122与ZJI株表达载体共转染组暂未检测到有血凝性的病毒。ZJI株鹅源新城疫病毒的拯救成功为对该病毒进行功能基因组研究和疫苗的研制等后续工作打下了基础。

关键词：反向遗传操作技术鹅源新城疫病毒鹅病毒拯救

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鹅源新城疫病毒ZJ1株微型基因组的构建及其初步应用

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微生物学报 2005年第1期45卷 72-76页

作者：张艳梅刘玉良黄勇贾立军刘秀梵卢建红韦栋平吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

在获得鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组序列的基础上 ,用增强型绿色荧光蛋白 (eGFP)报告基因取代鹅源新城疫病毒ZJ1株整个编码区 ,只保留与病毒复制、转录和病毒粒子包装相关的调控序列 ,将其反向克隆入转录载体TVT7R(0 0 )中 ,构建了该... 详细信息

在获得鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组序列的基础上 ,用增强型绿色荧光蛋白 (eGFP)报告基因取代鹅源新城疫病毒ZJ1株整个编码区 ,只保留与病毒复制、转录和病毒粒子包装相关的调控序列 ,将其反向克隆入转录载体TVT7R(0 0 )中 ,构建了该毒株的微型基因组。当转染用辅助病毒ZJ1株感染的HEp_2细胞时报告基因得到表达 ,表明此微型基因组RNA可被辅助病毒提供的NP、P和L蛋白翻译。同时将该病毒NP、P和L蛋白基因分别克隆入真核表达载体pCI_neo中 ,构建了表达该病毒NP、P与L蛋白的辅助质粒 ,用此微型基因组对辅助质粒的表达产物进行了功能鉴定并对该病毒拯救过程中痘苗病毒的最适感染剂量进行了摸索。

关键词：新城疫病毒微型基因组病毒拯救

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