检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科技 2004年第4期34卷 3-8页

作者：韦栋平徐忠林张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法。通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(lnET)的线性回归分析,获得了回归方程lnET=0.201×P/N+... 详细信息

用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法。通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(lnET)的线性回归分析,获得了回归方程lnET=0.201×P/N+4.632。应用该ELISA方法对表达NDVF基因的重组鸡痘病毒免疫鸡群进行了血清抗体检测,结果表明,血清的ELISA抗体效价与相应血清中和试验的抗体效价高度相关。攻毒保护试验的结果显示,ELISA抗体效价与机体的保护力表现一定程度的相关性。

关键词：新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA 抗体效价鸡痘病毒栽体基因工程疫苗

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致断奶仔猪腹泻、水肿病大肠杆菌F18菌毛a因子单克隆抗体的研制及其初步应用

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中国兽医学报 2004年第6期24卷 541-544页

作者：郭玉广高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

以表达 F18ac菌毛参考菌株 2 134(O15 7∶ H19)为研究对象 ,摸索出了 F18ac菌毛表达的最佳条件 ,采用热洗脱法获得了较纯的 F18ac菌毛 ,并以之免疫小鼠 ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,用直接玻板凝集法筛选出 1株杂交瘤细胞株 19B4 ,能稳定... 详细信息

以表达 F18ac菌毛参考菌株 2 134(O15 7∶ H19)为研究对象 ,摸索出了 F18ac菌毛表达的最佳条件 ,采用热洗脱法获得了较纯的 F18ac菌毛 ,并以之免疫小鼠 ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,用直接玻板凝集法筛选出 1株杂交瘤细胞株 19B4 ,能稳定分泌针对 F18ac菌毛和 F18ab菌毛共同抗原表位 a因子的单克隆抗体。细胞培养上清对 F18ac菌毛参考菌株 2 134和 F18ab菌毛参考菌株 10 7/ 86的直接凝集价均可达 1∶ 8,腹水单抗直接凝集效价可达 1∶ 10 2 4 ,而与猪源产 F4、F5、F6和 F4 1粘附素大肠杆菌菌株、鸡源产型菌毛大肠杆菌菌株及沙门氏菌不发生凝集反应。免疫印迹试验结果显示 ,腹水单抗可同时特异识别 F18ac菌毛 170 0 0和 F18ab菌毛 15 0 0 0左右的主要亚单位多肽。应用所研制的单抗对 2 15株断奶仔猪腹泻大肠杆菌分离株进行了检测 ,结果上述分离株 TSB培养物的 F18菌毛的检出率为13.4 % ,TSA培养物的检出率为 8.4 %。F18菌毛阳性分离株的 O血清型除了常见血清型 O139、O14 1外 ,还有非常见血清型 O10 7、O131和 O9等。TSB培养物的 F18菌毛检出率明显高于 TSA培养物的检出率 ,表明 F18菌毛在 TSB培养基中比在 TSA培养基上更容易表达 ,TSB培养基是适合 F18菌毛检测。

关键词：断奶仔猪腹泻水肿病大肠杆菌 F18菌毛 a因子单克隆抗体研制技术

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鸡痘病毒通用高效表达载体的构建及其初步应用

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中国兽医学报 2004年第5期24卷 429-432页

作者：孙蕾吴艳涛张体银陈素娟刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后... 详细信息

利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后将 FPV早晚期启动子 PE/ L 及其启动的鹅源新城疫病毒 NDV ZJ1株的 F基因一并插入 p N1 1 S中 ,使PE/ L 与 Ps反向串联 ,从而构建出 1个含 NDV ZJ1株 F基因的重组 FPV高效双表达载体 p N1 1 SEF,其 MCS可以用于插入其他外源基因。在此基础上 ,将 NDV ZJ1株的 HN基因插入 p N1 1 SEF的 Ps启动子下游的 MCS中 ,构建了共表达 NDV ZJ1株 F和 HN基因的重组 FPV双表达载体 p N1 1 SEFHN。将 p H1 1 SEFHN质粒 DNA与 FPV2 82 E4株共转染 CEF,得到共表达 NDV ZJ1株和 HN基因的重组 FPV,间接免疫荧光实验初步证明外源基因得到了较好的表达。表明所构建的通用高效 FPV表达载体有利于高效基因工程活载体疫苗的研制。

关键词：鸡痘病毒表达载体新城疫病毒 F基因 HN基因疫苗

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以减毒鼠伤寒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的安全性与免疫效力

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中国兽医学报 2004年第6期24卷 531-533页

作者：张小荣焦新安潘志明张晓明黄金林张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

将运送 H5亚型高致病力禽流感病毒 DNA疫苗的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 X4 5 5 0 (p VAX1- HA)和 X4 5 5 0 (asd-p VAX1- HA )以 1× 10 1 0 CFU的剂量腹腔注射 1日龄 SPF白莱航雏鸡 ,结果表明 ,二者均具有良好的安全性。对 SPF白莱... 详细信息

将运送 H5亚型高致病力禽流感病毒 DNA疫苗的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 X4 5 5 0 (p VAX1- HA)和 X4 5 5 0 (asd-p VAX1- HA )以 1× 10 1 0 CFU的剂量腹腔注射 1日龄 SPF白莱航雏鸡 ,结果表明 ,二者均具有良好的安全性。对 SPF白莱航鸡的免疫原性试验结果表明 ,这 2种细菌均能刺激鸡体产生高水平的肠道粘膜免疫应答 ,但是不能有效地激发血清抗体应答。对商品代伊莎褐蛋鸡的免疫效力试验初步结果显示 ,X4 5 5 0 (asd- p VAX1- HA)免疫鸡能够抵抗强毒的攻击 ,保护指数为 77.8% ,而 X4 5 5 0 (p VAX1- HA)

关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌 H5亚型禽流感病毒 DNA疫苗安全性免疫效力

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RNA病毒反向遗传操作技术研究进展

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病毒学报 2004年第1期20卷 90-94页

作者：刘玉良刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州225009

近年来,在分子病毒学研究领域兴起一门新型技术,即病毒的全长感染性cDNA克隆技术,是一种反向遗传操作技术(reverse genetics),通常被称为"病毒拯救(the rescue of virus)",它解决了对RNA病毒基因组难以操作这一困扰研究者多... 详细信息

近年来,在分子病毒学研究领域兴起一门新型技术,即病毒的全长感染性cDNA克隆技术,是一种反向遗传操作技术(reverse genetics),通常被称为"病毒拯救(the rescue of virus)",它解决了对RNA病毒基因组难以操作这一困扰研究者多年的难题.从cDNA克隆拯救出负链RNA全病毒是20世纪90年代分子病毒学研究领域最振奋人心的突破之一,它开启了人们对病毒基因组进行人工操作和详细了解病毒基因及其产物功能的大门.该技术发展迅速,倍受国内外研究者关注.

关键词：分子病毒学 RNA病毒反向遗传 cDNA 克隆

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表达鸡白细胞介素1β基因重组鸡痘病毒的构建

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中国兽医科技 2004年第1期34卷 12-16页

作者：邵卫星卢建红刘玉良韦栋平彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

从伴刀豆球蛋白 (ConA)刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 1β(ChIL 1β)编码区基因 ,通过与GenBank上登录的ChIL 1β序列 (Y15 0 0 6 )进行比较。结果显示 ,在ChIL 1β基因编码区的 10 4位、30 6位、387位和 4 32位的核苷酸发生了变... 详细信息

从伴刀豆球蛋白 (ConA)刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 1β(ChIL 1β)编码区基因 ,通过与GenBank上登录的ChIL 1β序列 (Y15 0 0 6 )进行比较。结果显示 ,在ChIL 1β基因编码区的 10 4位、30 6位、387位和 4 32位的核苷酸发生了变化 ;相应的氨基酸在 35位也发生了变化。虽然 30 6位、387位和 4 32位的核苷酸发生了变化 ,但没有引起氨基酸变化 ,说明这一区域的氨基酸具有一定的保守性。从氨基酸的性质上看 ,35位 (Asp→Ala)由酸性氨基酸变为中性氨基酸 ,这可能是同一种属的不同品种间的正常变化。以鸡痘病毒 (FPV )为活载体 ,构建了表达ChIL 1β的重组鸡痘病毒rFPV IL 1β。应用XTT/PMS方法检测rFPV IL 1β感染的成纤维细胞 72h后表达ChIL 1β的生物活性 ,效价为 1.0× 10 5U /mL ,证明FPV能有效地表达ChIL 1β。

关键词：鸡痘病毒基因重组鸡白细胞介素1β 生物活性鸡脾细胞核苷酸氨基酸品种 FPV 细胞因子

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鸡马立克氏病重组鸡痘病毒与火鸡疱疹病毒二价冻干疫苗免疫效力试验

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中国家禽 2004年第20期26卷 7-9页

作者：胡传伟彭大新张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

本文对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清Ⅰ型疫苗毒株CVI988/RispensgB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗对MD超强毒株(vvMDV)Md5和RB1B攻击后的免疫保护效果,实验室免疫效力试验的结果表明,HVT+rFPV-g... 详细信息

本文对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清Ⅰ型疫苗毒株CVI988/RispensgB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗对MD超强毒株(vvMDV)Md5和RB1B攻击后的免疫保护效果,实验室免疫效力试验的结果表明,HVT+rFPV-gB/R二价冻干苗对超强毒株Md5和RB1B攻击时的免疫保护效果明显优于HVT冻干苗,接近CVI988/Rispens的水平,本研究证明HVT+rFPV-gB/R二价冻干疫苗是一种安全、方便、高效的疫苗。

关键词：鸡马立克氏病超强毒株冻干火鸡疱疹病毒重组鸡痘病毒疫苗免疫保护效果 RB1 效力试验血清

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H_9亚型禽流感病毒分型单克隆抗体的研制及初步应用

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中国家禽 2004年第10期26卷 21-22,27页

作者：王海燕刘文博胡顺林孔晶吴艳涛文其乙张评浒高崧张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

禽流感分型单克隆抗体在禽流感的检疫、监测、预警预报工作中发挥重要作用。作者以Ｈ_9 Ｎ_2 亚型禽流感病毒Ｆ株为免疫原获得了特异性优、血凝抑制效价高的单克隆抗体，为Ｈ_9 亚型禽流感病毒的分型提供了良好的诊断试剂。

关键词： H9亚型禽流感病毒单克隆抗体宿主谱传染源诊断

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直接酶联免疫吸附法和聚合酶链反应联合检测沙门菌的应用

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中华预防医学杂志 2004年第5期38卷 331-334页

作者：黄金林焦新安潘志明文其乙孙林刘秀梵扬州大学生物科学与技术学院 225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

目的　通过比较试验 ,得到准确、快速的沙门菌检测方法。方法　 2 2 8株沙门菌经过前增菌、选择性增菌后 ,采用在聚合酶链反应 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 ,并将 2种快速检测方法进行比较研究。结果　PCR法的敏感性优于直接... 详细信息

目的　通过比较试验 ,得到准确、快速的沙门菌检测方法。方法　 2 2 8株沙门菌经过前增菌、选择性增菌后 ,采用在聚合酶链反应 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 ,并将 2种快速检测方法进行比较研究。结果　PCR法的敏感性优于直接ELISA法 ,2种方法的检测符合率达 99%以上。直接ELISA结合PCR法对饮食行业工作人员健康检查的 15 4 6份人粪便样品进行检测 ,同时以国家标准方法为参照 ,直接ELISA法的敏感性和特异性达 10 0 %和 97 14 % ,PCR法的敏感性和特异性均为 10 0 %。结论　优化的沙门菌检测程序是对大量样品采用直接ELISA筛检 ,除去大量阴性样品 ,阳性样品用PCR法作进一步鉴定 ;血清型的确定用国家标准方法。

关键词：沙门菌 PCR法酶联免疫吸附法 ELISA法联合检测聚合酶链反应敏感性人粪比较试验样品

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家禽DNA疫苗研究进展(下)

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中国家禽 2004年第1期26卷 31-33页

作者：张小荣焦新安扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

5影响DNA疫苗免疫应答的因素5.1载体本身的因素对于载体本身而言,启动子强弱是决定免疫应答强度的最主要因素.由于DNA疫苗载体由细菌质粒DNA衍生而来,而细菌的DNA中富含CpG基因序列,因此,载体序列中CpG基因序列的有无及数量多少也成了... 详细信息

5影响DNA疫苗免疫应答的因素5.1载体本身的因素对于载体本身而言,启动子强弱是决定免疫应答强度的最主要因素.由于DNA疫苗载体由细菌质粒DNA衍生而来,而细菌的DNA中富含CpG基因序列,因此,载体序列中CpG基因序列的有无及数量多少也成了影响免疫应答的因素.此外,质粒的存在形式也可能会对免疫应答造成影响,例如仅有Schubbert的一篇研究报道表明,将NDV F基因克隆入CMV极早期启动子和鸡β肌动蛋白基因启动子的下游,构建NDVDNA疫苗,环状质粒DNA肌肉接种1周龄小鸡并不能诱导产生针对F蛋白的抗体,也没有任何保护效果,而线性化质粒DNA免疫后的5只鸡有4只产生了高水平的抗体,并能保护强毒株的攻击.而在其他所有的研究中使用的都是高纯度的超螺旋质粒DNA进行免疫.

关键词：家禽 DNA疫苗载体安全性

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