检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2009年第5期41卷 45-47页

作者：楚电峰杜元钊刘相娥周洁刘思思朱吕昌扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009 青岛易邦生物工程有限公司山东青岛266032

通过蚀斑克隆技术，对新城疫病毒LaSota疫苗株进行连续纯化，在原病毒株的基础上筛选到1株免疫原性较好的病毒纯化株，血凝效价从9log2提高到11log2，鸡胚半数感染量（EID50）从10^-9.1／0．1mL上升到10^-9.5／0．1mL。通过对纯化株的F... 详细信息

通过蚀斑克隆技术，对新城疫病毒LaSota疫苗株进行连续纯化，在原病毒株的基础上筛选到1株免疫原性较好的病毒纯化株，血凝效价从9log2提高到11log2，鸡胚半数感染量（EID50）从10^-9.1／0．1mL上升到10^-9.5／0．1mL。通过对纯化株的F基因和HN基因进行测序，并与GenBank中已发表的新城疫病毒LaSota株基因序列进行比较发现，F和HN基因核苷酸序列的同源性分别在99．5％和98．6％，氨基酸同源性分别为99．1％和96．9％；F基因裂解位点区（112—117）氨基酸组成与原疫苗株完全一致。纯化株的鸡胚平均死亡时间（MDT）在109h、1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）为0．375，与原疫苗株进行生物学特性比较，表明该纯化株比原疫苗株更适合用于疫苗生产。

关键词：新城疫病毒 LaSota株蚀斑纯化

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11型鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及致病性研究

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中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 605-609页

作者：云水丽杨勇王小波卢焱炜高崧吴艳涛高以明彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 南通金太阳科技饲料有限公司江苏南通4314448 南京出入境检验检疫局江苏南京210001

从江苏某免疫鸭场的病死鸭中分离出1株细菌,经形态特性、生化试验、PCR扩增和血清型鉴定,证明该菌为血清11型的鸭疫里默氏杆菌(RA)。人工感染试验显示,106CFU/mL RA经肌肉注射后可导致鸭发病死亡,病死鸭的多个脏器组织均可分离到细菌,... 详细信息

从江苏某免疫鸭场的病死鸭中分离出1株细菌,经形态特性、生化试验、PCR扩增和血清型鉴定,证明该菌为血清11型的鸭疫里默氏杆菌(RA)。人工感染试验显示,106CFU/mL RA经肌肉注射后可导致鸭发病死亡,病死鸭的多个脏器组织均可分离到细菌,而滴鼻接种引起症状所需的细菌剂量为108CFU/mL;对106CFU/mL细菌肌肉注射致死鸭的脏器进行细菌计数,以法氏囊的含菌量最高;病理学变化涉及心、肝、脾、肺、胰、脑、肠粘膜和法氏囊。结果表明,江苏地区存在新的RA血清型,法氏囊是该细菌感染的一个重要靶器官。

关键词：鸭疫里默氏杆菌血清型法氏囊

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不同动物源新城疫病毒感染不同种属细胞的病变观察

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中国家禽 2009年第23期31卷 18-21页

作者：高以明张敬友王水明柯家法李超美朱雪良张扬严继宁黄立业任晓进吴艳涛刘文博南京农业大学动物医学院江苏南京210095 南京出入境检验检疫局江苏南京210001 江苏出入境检验检疫局江苏南京210001 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

用10株不同动物源的新城疫病毒F48E8,LaSota、LaSota-GFP、ZJ1、ZJ1-GFP、JS-4-05-Go、GX-1-05-Ch、JS-1-07-Os、JS-1-07-Du、JS-1-07-Pi等毒株分别感染鸡胚、鹅胚、鸭胚成纤维细胞、PK-15、Dulac、FK81、MDCK、Vero、Hela多种不同动物来源的传代细胞系,通过对病毒感染细胞后病变的观察、ZJ1-GFP及LaSota-GFP两个病毒感染细胞后细胞中绿色荧光蛋白指示的病变,了解不同的毒株对不同细胞感染性的差别。结果表明,不同毒力、不同动物源的新城疫病毒致不同种属细胞病变的作用不同,产生病变的时间有差异,强毒F48E8等毒株感染细胞后48～72h可以引起几种禽源成纤维细胞全部裂解,而哺乳动物来源的细胞在60～120h细胞发生病变,且病变也不如禽源成纤维细胞严重,出现了细胞的圆缩。弱毒株在胰酶处理后感染细胞,72h以后出现明显细胞病变,引起的哺乳动物细胞病变不明显。受试毒株的动物种属来源与细胞的致病性没有明显相关性。

关键词：新城疫病毒成纤维细胞传代细胞系绿色荧光蛋白致病性感染性

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载体表达的siRNA分子对猪圆环病毒2型复制的抑制作用

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微生物学报 2008年第11期48卷 1507-1513页

作者：王海燕刘文博高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】寻找一种基于RNA干扰技术的猪圆环病毒2型感染的防控方法。【方法】根据猪圆环病毒2型毒株基因组核苷酸序列,设计了3条特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)分子,其中2条针对猪圆环病毒1型和2型复制酶基因(rep),1条针... 详细信息

【目的】寻找一种基于RNA干扰技术的猪圆环病毒2型感染的防控方法。【方法】根据猪圆环病毒2型毒株基因组核苷酸序列,设计了3条特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)分子,其中2条针对猪圆环病毒1型和2型复制酶基因(rep),1条针对猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因(cap),将合成的DNA片段退火形成双链,分别连接到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ ZsGreen载体鼠源U6启动子下游,转化大肠杆菌得到阳性克隆,测序鉴定后分别命名为Retro-SH1,Retro-SH4,Retro-SH6。用上述质粒转染PCV2感染前、后的Dulac细胞及肌肉注射PCV2感染前、后的BALB/c小鼠,应用实时定量PCR试验评价其对病毒在细胞及小鼠体内复制的抑制作用,免疫组化法检测脾脏中病毒的存在。【结果】感染PCV2前或后转染500ng Retro-SH1,Retro-SH4,Retro-SH6质粒能有效抑制PCV2在Dulac细胞上的复制,抑制率最高可达99%以上,对10株不同来源的临床分离株在细胞中复制的抑制作用同样明显,且不同毒株间差异不大。动物试验中,肌肉注射10μg上述不同siRNA分子对小鼠体内PCV2的复制有一定的抑制作用,其抑制率在26%至99%之间。【结论】载体表达的siRNA分子可能成为防控猪圆环病毒2型感染的一种新工具。

关键词： RNA干扰猪圆环病毒2型复制抑制

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嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆的构建及其对小鼠的免疫原性

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微生物学报 2008年第9期48卷 1234-1240页

作者：宋益朱丽娜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】本研究旨在构建嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆。【方法】利用PCR技术扩增PCV2 ORF2,克隆入缺失PCV1 ORF2的pSK-PCV1△ORF2中,得到pSK-sPCV1-2。该重组质粒中包含嵌合型PCV1-2全基因组,通过不完全酶切的方法,将嵌合型PCV1-... 详细信息

【目的】本研究旨在构建嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆。【方法】利用PCR技术扩增PCV2 ORF2,克隆入缺失PCV1 ORF2的pSK-PCV1△ORF2中,得到pSK-sPCV1-2。该重组质粒中包含嵌合型PCV1-2全基因组,通过不完全酶切的方法,将嵌合型PCV1-2全基因组串联入pSK载体中,得到含串联双拷贝的嵌合型PCV1-2感染性DNA克隆。【结果】经序列测定,获得含串联双拷贝的嵌合型PCV1-2感染性DNA克隆。PCV1-2嵌合病毒接种BALB/c小鼠,用间接ELISA方法对接种后7、14、21、28、35、42d的小鼠进行血清抗体检测。结果显示从接种后14d开始,即有部分小鼠产生了针对PCV2Cap蛋白的特异性抗体;至接种后42d,几乎全部接种小鼠的血清均呈阳性。【结论】构建了PCV1-2型感染性DNA克隆,该嵌合病毒能够激发机体产生体液免疫应答。

关键词： PCV1 PCV2 ORF2基因嵌合型DNA克隆

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转座子随机插入鉴定肠炎沙门氏菌生物膜形成相关基因

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微生物学报 2008年第7期48卷 869-873页

作者：董洪燕张小荣潘志明彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】生物膜在沙门氏菌的致病性和引起沙门氏菌食物中毒等方面起着重要作用,本研究为了鉴定影响沙门氏菌生物膜形成的基因。【方法】利用结晶紫染色定量法对74株鸡源的肠炎、鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌进行生物膜测定,选择生物膜生长较... 详细信息

【目的】生物膜在沙门氏菌的致病性和引起沙门氏菌食物中毒等方面起着重要作用,本研究为了鉴定影响沙门氏菌生物膜形成的基因。【方法】利用结晶紫染色定量法对74株鸡源的肠炎、鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌进行生物膜测定,选择生物膜生长较好的肠炎沙门氏菌C050041,采用转座子随机插入法构建突变株库。【结果】84%的鸡源沙门氏菌菌株可在塑料表面形成生物膜;通过转座子插入获得1924个突变株,筛选的生物膜降低突变株经生长曲线测定、测序和序列比对及Southern blot分析鉴定出15个插入基因,它们分别为metE、ompR、rpoS、rfaG、rfaJ、rfaK、rfaP、rfbH、rhlE、spiA、steB、tpx、ybdN和2个未知功能的基因。【结论】我们鉴定出了多个影响生物膜形成的新基因,这些基因的发现为进一步研究沙门氏菌生物膜形成的调控机制,研制减毒沙门氏菌疫苗奠定了基础。

关键词：沙门氏菌转座子生物膜突变株基因

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HA基因322位和329位氨基酸对H5N1亚型禽流感病毒毒力的影响

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病毒学报 2008年第5期24卷 340-344页

作者：唐应华吴培培孙庆彭大新张文俊李彦芳汪文斌龙进学张评浒刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

A/mallard/Huadong/S/2005(S,IVPI=2.65)和A/mallard/Huadong/Y/2003(Y,IVPI=0),是对麻鸭具有不同致病力的病毒。两病毒的HA裂解位点区有2个氨基酸差异,S病毒在HA裂解位点区322是Leu(L322),329位缺失(-329),而Y病毒322位是Gln(Q322),329位是Lys(K329)。根据这两个位点的差异,利用反向遗传系统,以S和Y病毒各自为骨架,拯救HA基因突变病毒,检测获救的突变病毒对麻鸭的毒力。可以得知,以S病毒为骨架,将S病毒HA基因322位Leu替换为Gln和(或)在329位添加Lys,以及用Y病毒的HA(Q322L,K329-)替换S病毒HA,获救的重组病毒对麻鸭亦完全无致病力;但以Y病毒为骨架,将Y病毒HA基因322位Gln替换为Leu和(或)在329位缺失Lys后,Y重组病毒对麻鸭的毒力上升。结果提示,S和Y病毒HA基因裂解位点区322和329氨基酸残基突变或缺失均影响病毒对麻鸭的致病力,且HA基因与其它基因的匹配性显著影响病毒对麻鸭的致病力。

关键词： H5N1 HA基因麻鸭反向遗传致病力

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新城疫分离毒HN蛋白的抗原性初步分析及分子特性研究

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微生物学通报 2008年第1期35卷 87-93页

作者：姚春峰仇旭升刘文博顾敏吴双曹永忠刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

运用针对NDV囊膜糖蛋白(HN)的单克隆抗体(MAbs),对2005～2006年间自我国江苏和广西部分地区的20株NDV分离株进行排谱试验,初步分析了不同毒株之间HN蛋白的抗原表位差异;并应用RT-PCR技术成功扩增了其HN基因整个编码区,经克隆、测序最终... 详细信息

运用针对NDV囊膜糖蛋白(HN)的单克隆抗体(MAbs),对2005～2006年间自我国江苏和广西部分地区的20株NDV分离株进行排谱试验,初步分析了不同毒株之间HN蛋白的抗原表位差异;并应用RT-PCR技术成功扩增了其HN基因整个编码区,经克隆、测序最终获得13株鸡源NDV与7株鹅源NDV HN基因的编码区序列,分析测定核苷酸序列及推导的氨基酸序列,并将鹅源NDV与鸡源NDV相应序列进行了比较。结果单抗排谱试验表明,20株NDV分离株之间HN蛋白的抗原表位存在差异;测序结果表明,测定的HN基因的编码区长度皆为1716nt编码571个氨基酸;分离株中18株基因VⅡ型NDV分离株之间HN基因编码区核苷酸序列具有较高的同源性,达94.8%～100%;与近几年国内流行的其它基因VⅡ型NDV之间的核苷酸序列同源性为92.1%～99.6%。对其推导的HN蛋白一级结构中潜在的糖基化位点及HN蛋白细胞受体结合相关区域的氨基酸序列等进行了比较分析。结果显示,单抗排谱差异显著株在部分氨基酸位点发生了突变;同时揭示我国部分地区同期流行的鹅源NDV与鸡源NDV HN基因之间具有较近的亲缘关系。

关键词：新城疫病毒单克隆抗体 HN基因序列分析

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江苏地区猪圆环病毒2型流行病学调查

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中国兽医学报 2008年第12期28卷 1379-1382页

作者：李文杰刘金彪高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

应用复合PCR方法，对江苏地区的162份可疑病料进行了检测，结果72份病料为PCV2阳性，17份为PCV1阳性，其中7份同时感染PCV1和PCV2。从发病时间看，以9～11月发病最多，阳性率高达54．67％。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26．0... 详细信息

应用复合PCR方法，对江苏地区的162份可疑病料进行了检测，结果72份病料为PCV2阳性，17份为PCV1阳性，其中7份同时感染PCV1和PCV2。从发病时间看，以9～11月发病最多，阳性率高达54．67％。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26．03％和68．12％。通过流行病学调查，表明该病已在江苏地区呈流行趋势。同时对18头PCV2阳性猪病料的心、肝、脾、肺、肾、脑、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体进行PCV2检测，结果有7头PCV2阳性猪的各个脏器都能检测出PCV2；在这些脏器中，肺、腹股沟淋巴结、扁桃体的检出率都为100％，较其他受检脏器更适合作为PCV2的检测样品。

关键词：猪圆环病毒2型流行病学复合PCR 脏器检测

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40株新城疫病毒全基因组的比较研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2008年第1期29卷 1-5页

作者：曹永忠顾敏刘文博刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

利用作者单位测得的和从GenBank检索得到的40株新城疫病毒（NDV）全基因组序列,采用SMS、DNA Star等生物信息分析软件,比较分析NDV全基因组的基本特征和分子进化规律。结果表明：40株NDV全基因组核酸序列长度有3种：15186、15192、15198... 详细信息

利用作者单位测得的和从GenBank检索得到的40株新城疫病毒（NDV）全基因组序列,采用SMS、DNA Star等生物信息分析软件,比较分析NDV全基因组的基本特征和分子进化规律。结果表明：40株NDV全基因组核酸序列长度有3种：15186、15192、15198nt,均符合6倍数规律;基因组A＋T含量占53%～54%,C＋G含量占46%左右;NDV基因组前三分之一（4500nt前）序列存在高GC含量区,特别是在大约1200～2400nt区域,GC含量最高达到69%;F基因片段构建的分子进化树显示,40株NDV划分为两大类（ClassⅠ,ClassⅡ）,基因组长度为15198nt的毒株属于ClassⅠ,其余的属于ClassⅡ;ClassⅡ毒株又分为基因Ⅰ～Ⅶ型,这些已测序的毒株中没有基因和型;病毒6个基因CDS序列构建的进化树显示,各基因进化基本保持一致,仅少数毒株存在差异,可能与病毒分子的基因重组有关。

关键词：新城疫病毒全基因组生物信息学比较

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