检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2007年第3期47卷 407-412页

作者：陈祥高崧王晓泉焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

采用选择性捕获转录序列(SCOTS)方法鉴定禽病原性大肠杆菌E037株(血清型O78)在感染SPF鸡过程中的转录表达基因.通过总RNA分离、cDNAs合成、PCR扩增和SCOTS对cDNAs选择和致病性特异转录序列的富集,致病性特异的cDNAs被分离鉴定,共获得31... 详细信息

采用选择性捕获转录序列(SCOTS)方法鉴定禽病原性大肠杆菌E037株(血清型O78)在感染SPF鸡过程中的转录表达基因.通过总RNA分离、cDNAs合成、PCR扩增和SCOTS对cDNAs选择和致病性特异转录序列的富集,致病性特异的cDNAs被分离鉴定,共获得31个转录序列(命名为aec),其中分别有2、1、4、14、2和8个aec序列与黏附素、LPS的合成、铁的摄取系统、质粒编码基因、噬菌体编码基因和一些其它功能基因相关;从气囊中分离到16个aec序列,心包膜中分离到15个aec序列;有3种与质粒编码基因相关序列在气囊和心包膜中都被分离到.结果显示APEC致病性特异序列包括黏附素、LPS的合成、铁的转运、质粒编码基因、噬菌体编码基因和一些其它功能基因等.通过SCOTS方法建立了一种体内表达致病性特异基因的方法和APEC在自然宿主感染模型中致病性相关基因的表达谱的筛选方法.

关键词：禽病原性大肠杆菌选择性捕获转录序列 O78血清型体内

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用反向遗传技术致弱基因VIId型鹅源新城疫病毒ZJI株

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微生物学报 2007年第2期47卷 197-200页

作者：胡顺林孙庆吴艳涛张艳梅刘秀梵刘玉良王曲直扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与3个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫... 详细信息

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与3个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫病毒粒子。设计两对引物,经overlapPCR方法将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸后,替换pNDV/ZJI上的对应序列,构建了转录载体pNDV/ZJIFM,将pNDV/ZJIFM与3个辅助表达质粒共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了致弱的基因VIId型鹅源新城疫病毒NDV/ZJIFM,获救病毒的鸡胚最小致死剂量平均死亡时间(MDT)大于120h,同时该病毒的脑内接种致病指数(ICPI)为0.16,上述结果表明,获救病毒的毒力已被致弱,是一个较为理想的疫苗候选株。

关键词：新城疫病毒拯救致弱基因Ⅶd型

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1株H1亚型水禽流感病毒分离株的致病特性和表面膜蛋白基因的序列分析

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中国兽医学报 2007年第6期27卷 785-789,794页

作者：薛峰刘慧谋彭宜张评浒钱忠明刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用常规血清学试验和特异性RT-PCR方法,对我国华东地区家养水禽流感病毒进行了长达4年的跟踪监测,分离到多株H1亚型禽流感病毒,并对其中的1株A/Duck/Yangzhou/163/2003(简称Dk/YZ/163/03)的血凝素基因进行了序列测定,并与GenBank中收... 详细信息

采用常规血清学试验和特异性RT-PCR方法,对我国华东地区家养水禽流感病毒进行了长达4年的跟踪监测,分离到多株H1亚型禽流感病毒,并对其中的1株A/Duck/Yangzhou/163/2003(简称Dk/YZ/163/03)的血凝素基因进行了序列测定,并与GenBank中收录的其他序列进行了比较。结果发现,Dk/YZ/163/03的血凝素基因(HA)与禽流感日本分离株A/Japan/91(H1)的同源性最高;而神经氨酸酶基因(NA)与Mallard dk/A1b/35/1976(H1N1)同源性最高;其推导的氨基酸剪切位点序列为P-S-I-Q-S-R,是典型低致病性禽流感病毒的特征序列,这与该毒株对SPF鸡和BALB/c小鼠的低致病特性相吻合。

关键词：禽流感病毒 H1亚型 HA NA 致病性剪切位点

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江苏省猪高热病病例主要继发感染病毒的多重PCR检测

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中国兽医科学 2007年第12期37卷 1029-1034页

作者：叶俊平盛瑜朱丽娜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

应用建立的2个多重PCR方法，对2005～2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果，PRRSV阳性率为51．2％，PCV2阳性率为44．1％，CSFV阳性率为10．4％，PPV阳性率为3．9％，PRV阳性率为2．4％。2005年病料中PCV2阳性率... 详细信息

应用建立的2个多重PCR方法，对2005～2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果，PRRSV阳性率为51．2％，PCV2阳性率为44．1％，CSFV阳性率为10．4％，PPV阳性率为3．9％，PRV阳性率为2．4％。2005年病料中PCV2阳性率为21．2％，2006年为73．2％；2005年PRRSV阳性率为38．1％，2006年为67．7％。2006年猪高热病疫情比2005年严重，PCV2和PRRSV可能在其中发挥了协同致病作用。对10个PRRSV分离株ORF5基因和Nsp2基因进行的测序表明，2006年分离株Nsp2基因中有连续87个碱基的缺失。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型猪细小病毒猪瘟病毒猪伪狂犬病病毒猪高热病多重PCR ORF5基因 Nsp2基因

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禽病原性大肠杆菌tsh突变株的构建及分离株tsh基因的检测

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畜牧兽医学报 2007年第5期38卷 493-499页

作者：陈祥刘静苗晓青王晓泉高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

运用基因重组方法将庆大霉素(Gentamycin,GM)抗性基因连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下此tshF-GM-tshR片段,再将之克隆到pMEG-37... 详细信息

运用基因重组方法将庆大霉素(Gentamycin,GM)抗性基因连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下此tshF-GM-tshR片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建出自杀性载体pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到含tsh基因的受体APEC E037株中,根据同源重组原理,筛选出tsh基因缺失的E037突变株,命名为E037(Δtsh).E037和E037(Δtsh)株对1日龄鸡的LD50分别为105.6CFU和109.0CFU,动物感染性试验表明E037(Δtsh)株在内脏器官和血液中的感染能力和大肠杆菌病变程度均有明显下降.在243株禽源分离株中,有167株为tsh+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4%(146/167)、12.6%(21/1 67)和0%(0/167);O1、O2和O78血清型的高致病株占所在血清型分离株的89.5%～100%,而其它血清型的高致病株仅占其它分离株的53.3%,差异极显著(P＜0.01).结果显示tsh+株大多数为高致病性菌株,且其致病性与血清型的种类有一定的相关性,温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子.

关键词：禽病原性大肠杆菌同源重组温度敏感性血凝素突变体

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鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白单克隆抗体的制备及其初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第12期23卷 1197-1199页

作者：王彦红马怀良时红星吴培培彭大新刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州225009

目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb)。方法:以鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠... 详细信息

目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb)。方法:以鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,用间接ELISA方法检测筛选。结果:阳性细胞株经3代克隆纯化后,获得3株能稳定分泌抗FPVORF214蛋白mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2F10C9、3C3B10、2G8G7。3株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与FPVORF214蛋白反应,细胞上清ELISA效价均在1×102以上,mAb腹水效价达1×104以上。结论:该特异性mAb的研制成功为进一步研究ORF214的生物学特性奠定基础。

关键词：鸡痘病毒 ORF214 单克隆抗体(mAb)

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抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白特异性单克隆抗体的研制及鉴定

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中国兽医学报 2007年第5期27卷 664-666页

作者：郝贵杰提金凤陈清刘文博吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

以抗H5亚型禽流感病毒(AIV)JSD株鸡胚尿囊液免疫8周龄BALB/c小鼠,第4次免疫后取其脾淋巴细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)对杂交瘤进行筛选,经3次亚克隆后,共获得4株针对血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体,分别命名... 详细信息

以抗H5亚型禽流感病毒(AIV)JSD株鸡胚尿囊液免疫8周龄BALB/c小鼠,第4次免疫后取其脾淋巴细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)对杂交瘤进行筛选,经3次亚克隆后,共获得4株针对血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体,分别命名为:2D2、2C8、3D3和3D11。该4株单抗的小鼠腹水的HI效价在213～215,ELISA效价为1.2×105～5.1×105。亚类鉴定结果表明,2D2和3D11属于IgG1,2C8属于IgG3,3D3属于IgG2a亚类;特异性试验结果表明,上述4株单抗仅与H5 AIV毒株发生特异性反应,而不与其他亚型AIV以及NDV、IBV和EDSV-76等病毒反应;鸡胚中和试验结果显示,4株单抗均具有较好的中和活性。本研究成功获得4株针对H5 AIVHA蛋白的特异性单抗,为临床H5 AIV的血清学监测及鉴定提供了必需的试剂。

关键词：禽流感病毒单克隆抗体血凝抑制试验

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江苏部分地区食源性和人源沙门氏菌的多重耐药性研究

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微生物学报 2007年第2期47卷 221-227页

作者：王晓泉焦新安刘晓文陈祥宦海霞刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

从江苏省部分地区收集了117个沙门氏菌分离株,其中食物源和人源菌株分别有81株和36株。16种抗生素敏感性试验表明,有111个分离株对2种或2种以上的抗生素有耐药性,人源沙门氏菌分离株的抗生素耐药率比食物源的高,单一抗生素以链霉素耐药... 详细信息

从江苏省部分地区收集了117个沙门氏菌分离株,其中食物源和人源菌株分别有81株和36株。16种抗生素敏感性试验表明,有111个分离株对2种或2种以上的抗生素有耐药性,人源沙门氏菌分离株的抗生素耐药率比食物源的高,单一抗生素以链霉素耐药率(92.3%,108/117)最高。对5种或5种以上抗生素耐药的分离株有59株(50.4%),其中对特定六种抗生素:氨苄青霉素、氯霉素、链霉素、磺胺、四环素和卡那霉素耐药(ACSSuTK,R型)的菌株有12株。设计18对耐药基因和I类整合子保守区的引物,对36株有不同来源和耐药特征的多重耐药菌株进行耐药基因和I类整合子的检测,PCR扩增结果与抗生素敏感性表型一致。有30株细菌携带有I类整合子,大小为0.3、0.6、1.0、1.2和1.6kb,其中1.6kb(aadA5-dfr17)大小的整合子在25株细菌中分布(24/36)。接合试验表明,氨苄青霉素、氯霉素、链霉素、甲氧苄氨嘧啶和四环素的耐药特性是由接合性质粒携带。结果显示,耐药基因多数由I类整合子和质粒携带,可以通过接合试验发生转移,可移动的DNA成分可能在耐药特性的转移和分布中起到重要作用。

关键词：沙门氏菌多重耐药性整合子接合

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鹅源新城疫病毒拯救体系的建立

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微生物学通报 2007年第3期34卷 426-429页

作者：胡顺林张艳梅孙庆刘玉良吴艳涛刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

参照GenBank上公布的鹅源新城疫病毒ZJI株全序列,设计8对引物,经RT-PCR法从尿囊液中扩增目的片段后,分别克隆进pCR2.1载体,将Ⅰ～Ⅶ7对引物的扩增片段依次亚克隆到TVT7R转录载体中,构建了含NDV全基因组cDNA的转录载体(pNDVZJI),将Ⅴ、... 详细信息

参照GenBank上公布的鹅源新城疫病毒ZJI株全序列,设计8对引物,经RT-PCR法从尿囊液中扩增目的片段后,分别克隆进pCR2.1载体,将Ⅰ～Ⅶ7对引物的扩增片段依次亚克隆到TVT7R转录载体中,构建了含NDV全基因组cDNA的转录载体(pNDVZJI),将Ⅴ、Ⅵ和Ⅷ3对引物的扩增片段分别克隆进pCR2.1载体,并亚克隆到表达质粒pCI-neo上,构建了L基因的真核表达载体(pCI-L),pNDVZJI、pCI-L与另外两个辅助表达质粒(pCI-NP和pCI-P)共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有血凝性的鹅源新城疫病毒,ZJI株鹅源新城疫病毒的成功拯救为后续相关研究工作的开展打下了基础。

关键词：新城疫病毒 cDNA 转染拯救

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表达禽流感病毒特异性siRNA分子减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建

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病毒学报 2007年第2期23卷 125-129页

作者：刘文博张小荣曹永忠王海燕吴艳涛焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了寻找一种新的短干扰RNA（short interfering RNA，siRNA）片段的表达和递送系统，并进行评价，根据禽流感病毒核苷酸序列，设计了3条分别针对A型禽流感病毒核衣壳蛋白、聚合酶A和H5亚型禽流感病毒血凝素的特异性siRNA分子，人工合... 详细信息

为了寻找一种新的短干扰RNA（short interfering RNA，siRNA）片段的表达和递送系统，并进行评价，根据禽流感病毒核苷酸序列，设计了3条分别针对A型禽流感病毒核衣壳蛋白、聚合酶A和H5亚型禽流感病毒血凝素的特异性siRNA分子，人工合成相应DNA片段，退火后形成双链，与阴性对照片段分别连接到构建的pSIREN—ASD ZsGreen载体鼠源U6启动子下游，测序鉴定证实获得了阳性质粒，分别命名为PAZ—NP、PAZ-PA、PAZ—HA和PAZ-NC，1ng的质粒可以完全抑制50个PFU的禽流感病毒在MDCK细胞上的复制，细胞不产生任何病变，细胞上清的血凝效价为2^0，而对照组细胞在病毒感染36～48h后细胞变圆、死亡、脱落，其细胞上清的血凝效价可达2^4。将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550得到重组沙门氏菌X4550（PAZ—NP）、X4550（PAZ-PA）、X4550（PAZ—HA）和X4550（PAZ-NC）。对4日龄雏鸡口服1×10^9菌落形成单位（CFU）的重组菌后第1d、7d、15d用10。ELDso的H5亚型AIV进行攻毒，最后一次攻毒后观察15d，实验结束时采泄殖腔棉拭子对存活鸡进行病毒分离。结果表明，表达不同的siRNA分子对雏鸡有一定的保护力，保护率为27％～50％不等，存活鸡泄殖腔棉拭子未分离到病毒，说明重组减毒沙门氏菌携带质粒在体内产生的siRNA能够对机体产生一定保护力。

关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌 siRNA H5亚型禽流感病毒递送系统保护力

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