检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2007年第9期23卷 891-894,898页

作者：王晓泉陈祥吴双巢国祥焦新安刘秀梵江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009 扬州市疾病预防控制中心江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

目的分析125株萘啶酮酸耐药性沙门氏菌gyrA基因QRDR区变异情况及其对氟喹诺酮类药物敏感性的影响.方法用常规血清学方法鉴定沙门氏菌分离株血清型,通过微量稀释法测定其对萘啶酮酸和3种氟喹诺酮的敏感性,用PCR方法扩增沙门氏菌gyrA基因... 详细信息

目的分析125株萘啶酮酸耐药性沙门氏菌gyrA基因QRDR区变异情况及其对氟喹诺酮类药物敏感性的影响.方法用常规血清学方法鉴定沙门氏菌分离株血清型,通过微量稀释法测定其对萘啶酮酸和3种氟喹诺酮的敏感性,用PCR方法扩增沙门氏菌gyrA基因QRDR的序列并进行序列分析.结果这些分离株涉及18个血清型,最常见的血清型为德尔卑沙门氏菌和肠炎沙门氏菌,它们的分离率分别为22.4%(28/125)和19.2%(24/125).沙门氏菌分离株对萘啶酮酸的耐药率为39/125.3种氟喹诺酮药物对萘啶酮酸耐药性沙门氏菌的最小抑菌浓度明显比萘啶酮酸敏感株高.萘啶酮酸耐药性沙门氏菌gyrA基因QRDR的序列分析表明,所有萘啶酮酸耐药性沙门氏菌gyrA基因的83或87位点发生了突变,83位点发生点突变的菌株对萘啶酮酸的MIC范围大于或等于1 024μg/ml,而87位点突变的菌株的MIC范围为32～512μg/ml.结论沙门氏菌分离株gyrA基因发生点突变的位点与萘啶酮酸耐药水平高低存在关联,且导致对三种氟喹诺酮类药物的敏感性下降.

关键词：萘啶酮酸耐药沙门氏菌氟喹诺酮敏感性 gyrA变异

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美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2007年第2期29卷 134-137页

作者：范忠军柴虹陈继明吴延功孙承英王志亮扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009 农业部青岛动检所山东青岛266032

参照美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M基因序列,设计引物和探针,并建立其荧光RT-PCR检测方法,以检测严重危害我国养猪业的此型PRRSV。该法能检测到1 TCID50的PRRSV。用此法检测猪瘟病毒、乙脑病毒、伪狂犬病毒、马动脉炎病毒、圆... 详细信息

参照美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M基因序列,设计引物和探针,并建立其荧光RT-PCR检测方法,以检测严重危害我国养猪业的此型PRRSV。该法能检测到1 TCID50的PRRSV。用此法检测猪瘟病毒、乙脑病毒、伪狂犬病毒、马动脉炎病毒、圆环病毒Ⅱ型和MARC145细胞的RNA,结果均为阴性。对126份临床样品进行检测应用,检测结果(7份阳性,119份阴性)与病毒分离完全符合。此法中的阳性对照为体外转录的dsRNA,具有高度的稳定性,解决了此类检测方法所用的RNA阳性对照所普遍存在的易于降解的难题。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR 体外转录 dsRNA

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抗禽流感病毒H7亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第10期23卷 953-955页

作者：李玉君焦新安潘志明孙林王传彬张苏华孙泉云刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 农业部兽医诊断中心北京100094 上海市畜牧兽医站上海201103

目的:研制禽流感病毒H7亚型血凝素特异性单克隆抗体(mAb)。方法:以H7亚型禽流感诊断抗原为免疫原免疫6～8周雌性BALB/c小鼠,末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14进行融合。通过HA和HI试验筛选阳性克隆。应用HI试验和Wester... 详细信息

目的:研制禽流感病毒H7亚型血凝素特异性单克隆抗体(mAb)。方法:以H7亚型禽流感诊断抗原为免疫原免疫6～8周雌性BALB/c小鼠,末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14进行融合。通过HA和HI试验筛选阳性克隆。应用HI试验和Western blot试验测定mAb的反应性和特异性。结果:共获得4株分泌抗AIVH7亚型HAmAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为2E2、2A4、5F5、7G5。这些mAb的腹水HI效价在5×27～5×211之间,其中2E2属于IgM亚类,2A4属于IgG1亚类,5F5、7G5属于IgG2a亚类。Western blot分析结果显示,4株AIVH7亚型HAmAb能与AIVH7蛋白在Mr75000处反应,但不与新城疫病毒(NDV)蛋白发生反应,表明这些mAb能特异性识别AIVH7亚型HA。mAbHI反应性测定结果表明:4株mAb中,2E2、5F5、7G5只与H7亚型AIV发生特异性HI反应,而不与其他亚型AIV以及NDV、传染性支气管炎病毒(IBV)反应,显示出良好的特异性;而2A4除了与H7亚型AIV反应外,还与H15N8标准株发生低水平交叉反应。结论:这些mAb不仅为H7亚型AIV的HA结构分析提供了工具,而且为建立快速廉价的H7亚型禽流感诊断方法提供了核心试剂。

关键词：禽流感病毒 H7亚型血凝素单克隆抗体

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用DNA免疫研制鸡白细胞介素2单克隆抗体

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中国预防兽医学报 2007年第7期29卷 537-540页

作者：提金凤张艳梅李志杰宋宗好郝贵杰刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009 山东畜牧兽医职业学院山东潍坊261061

构建鸡白细胞介素2(鸡IL-2)的真核重组质粒pcDNA-IL-2和原核重组质粒pET-IL-2,以重组质粒pcDNA-IL-2免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以重组质粒pET-IL-2在大肠杆菌BL21(DE_3)中诱导表达的蛋白作为筛选抗原... 详细信息

构建鸡白细胞介素2(鸡IL-2)的真核重组质粒pcDNA-IL-2和原核重组质粒pET-IL-2,以重组质粒pcDNA-IL-2免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以重组质粒pET-IL-2在大肠杆菌BL21(DE_3)中诱导表达的蛋白作为筛选抗原,通过间接ELISA法对杂交瘤进行筛选,经亚克隆后共获得3株针对鸡IL-2的特异性单克隆抗体,并对这3株单克隆抗体的特性进行了鉴定。

关键词： DNA免疫鸡白细胞介素2 重组表达质粒

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利用流式细胞术检测H4亚型禽流感病毒感染细胞

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2007年第4期28卷 10-12页

作者：高明燕胡茂志吴艳涛王志亮焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏省物质微区与性能测试服务中心江苏扬州225009 农业部动物检疫所外来动物疾病诊断中心山东青岛266032

以不同稀释度的H4亚型禽流感病毒(AIV)感染MDCK细胞,分别在添加与不添加TPCK-胰酶的培养基中培养36 h后收集细胞。经固定后,加入抗H4亚型AIV的单抗2C11,继续加入荧光标记的抗鼠Ig抗体,用流式细胞仪(FCM)分析不同条件下病毒感染的细胞,... 详细信息

以不同稀释度的H4亚型禽流感病毒(AIV)感染MDCK细胞,分别在添加与不添加TPCK-胰酶的培养基中培养36 h后收集细胞。经固定后,加入抗H4亚型AIV的单抗2C11,继续加入荧光标记的抗鼠Ig抗体,用流式细胞仪(FCM)分析不同条件下病毒感染的细胞,并用血凝(HA)试验检测细胞培养上清中病毒的HA效价。FCM结果表明:不论加TPCK-胰酶与否,均能引起病毒的感染,且随着感染剂量的增加,含有病毒细胞的比率增加。相比而言,加胰酶后,低剂量感染便可引起病毒在MDCK细胞内大量增殖,并能检测到细胞上清中的病毒。FCM与HA试验相比,FCM试验更敏感,更能反应病毒在感染早期的增殖情况。

关键词：禽流感病毒血凝试验流式细胞术

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家养水禽A型流感病毒和新城疫病毒的感染和临床疾病

家养水禽A型流感病毒和新城疫病毒的感染和临床疾病

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中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州 225009

野生水禽一般被认为是A型流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)的天然贮存库，在其中病毒处于进化静止状态。在东亚和东南亚有成十亿计的家养水禽放养，在家养水禽与野生水禽之间，在家养水禽与其他动物和人之间形成两个生态界面。水禽通常... 详细信息

野生水禽一般被认为是A型流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)的天然贮存库，在其中病毒处于进化静止状态。在东亚和东南亚有成十亿计的家养水禽放养，在家养水禽与野生水禽之间，在家养水禽与其他动物和人之间形成两个生态界面。水禽通常抵抗甚至对鸡表现很强毒力的AIV和NDV毒株，感染而不产生明显临床疾病。在过去10年中H5N1AIV和NDV强毒一直在不断进化，其结果之一就是这两种病毒都出现了对水禽毒力增强的毒株。本文将综述近年来AIV(尤其是H5N1亚型)和NDV在家养水禽感染和临床疾痛的新进展，讨论它们在这两种病毒的进化、维持及相关疾病流行中所起的重要作用，并对改进这两种重要痰病控制方法提出建议。

关键词：野生水禽 A型流感病毒新城疫病毒病毒感染

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2005年、2006年江苏地区猪高热病病例中PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV感染的多重PCR检测及PRRSV分离株ORF5、Nsp2基因序列分析

2005年、2006年江苏地区猪高热病病例中PCV2、PPV、PRV、PRRSV和C...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：叶俊平盛瑜朱丽娜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用建立的两个多重PCR方法,对2005年、2006年收集于江苏地区的211份猪高热病疑似病料进行检测,结果108份病料为PRRSV阳性,阳性率为51.2％;93份病料为PCV2阳性,阳性率为44.1％;22份病料为CSFV阳性,阳性率为10.4％;8份病料为PPV阳性,阳... 详细信息

应用建立的两个多重PCR方法,对2005年、2006年收集于江苏地区的211份猪高热病疑似病料进行检测,结果108份病料为PRRSV阳性,阳性率为51.2％;93份病料为PCV2阳性,阳性率为44.1％;22份病料为CSFV阳性,阳性率为10.4％;8份病料为PPV阳性,阳性率为3.9％;5份病料为PRV阳性,阳性率为2.4％。同时发现,2005年病料中PCV2感染的阳性率为21.2％,2006年为73.2％;2005年PRRSV的阳性率为38.1％,2006年为67.7％。2006年猪高热病疫情远比2005年严峻,PCV2和PRRSV可能在其中发挥了协同致病作用。对PRRSV分离株ORF5和Nsp2基因进行测序,发现2006年分离株Nsp2基因中有87个碱基的缺失.

关键词：猪繁殖呼吸综合征病毒猪圆环病毒猪细小病毒猪瘟病毒猪伪狂犬病病毒猪高热病

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以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗的构建及其免疫原性

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生物技术通讯 2007年第6期18卷 912-914页

作者：焦红梅潘志明崔一晨田华荣焦新安扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

目的:构建以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗,研究该疫苗的免疫原性。方法:以小鼠肝炎病毒S1基因的重组真核表达质粒pVAX1-S1免疫BALB/c小鼠,ELISA检测其诱导抗体产生情况;再将重组质粒pVAX1-S1电转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7... 详细信息

目的:构建以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗,研究该疫苗的免疫原性。方法:以小鼠肝炎病毒S1基因的重组真核表达质粒pVAX1-S1免疫BALB/c小鼠,ELISA检测其诱导抗体产生情况;再将重组质粒pVAX1-S1电转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,构建运送S1基因的重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1),口服免疫BALB/c小鼠,间接免疫荧光试验鉴定减毒沙门氏菌运送的DNA疫苗的免疫原性。结果:与pVAX1空载体对照组相比,重组真核表达质粒pVAX1-S1免疫组二免及三免后抗体水平分别存在显著性差异(P<0.05)和极显著性差异(P<0.01)。减毒沙门氏菌运送的DNA疫苗SL7207(pVAX1-S1)诱导小鼠产生了特异性的血清抗体。结论:构建的重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1)具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生特异性的体液免疫应答。这为进一步研制冠状病毒新型基因疫苗奠定了基础。

关键词：小鼠肝炎病毒 S1基因 DNA疫苗减毒沙门氏菌免疫原性

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用反向遗传技术产生冷适应致弱的重组A型人流感病毒的研究

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免疫学杂志 2007年第3期23卷 335-338页

作者：杨鹏辉颜艳罗德炎邢丽刘秀梵王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

目的以鸡胚高度适应株A/PR/8/34株为重组流感病毒骨架,利用反向遗传技术拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒。方法对冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株的PB2基因片段,进行了全基因序列合成,同时人工引入PB2265(... 详细信息

目的以鸡胚高度适应株A/PR/8/34株为重组流感病毒骨架,利用反向遗传技术拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒。方法对冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株的PB2基因片段,进行了全基因序列合成,同时人工引入PB2265(N265S)氨基酸的突变。PB2基因片段通过与改造后的转录/表达载体pAD3000连接,构建PB2基因的拯救载体。该重组质粒与PR8进行“7+1”组合的病毒拯救,共转染COS-1细胞。结果经测序获得序列准确的拯救质粒pMDV-A-PB2,利用反向遗传技术成功拯救出了具有血凝性(1×25)的冷适应的重组A型流感病毒。结论利用反向遗传技术成功拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒,该系统为深入研究甲型人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础。

关键词：流感病毒反向遗传技术 cDNA 重组病毒

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以减毒沙门菌为载体布鲁氏菌DNA疫苗的构建及免疫原性分析

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免疫学杂志 2007年第5期23卷 486-490页

作者：周丽丽姚碧涛罗德炎焦新安刘秀梵王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

目的构建携带布鲁氏菌BLS-L7/L12融合基因的重组减毒沙门菌并进行免疫原性分析,为口服布鲁氏菌DNA疫苗研究奠定基础。方法将BLS-7/L12融合基因克隆到真核表达载体asd+-pVAX1,依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X45... 详细信息

目的构建携带布鲁氏菌BLS-L7/L12融合基因的重组减毒沙门菌并进行免疫原性分析,为口服布鲁氏菌DNA疫苗研究奠定基础。方法将BLS-7/L12融合基因克隆到真核表达载体asd+-pVAX1,依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd+-pVAX1-BLS-L7/L12)。以1×109CFU/只的剂量口服免疫Balb/C小鼠,3次免疫后进行免疫效果的评价。结果构建的重组减毒沙门菌质粒转染COS-7细胞经免疫组化和Western-blot试验证明BLS-L7/L12融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清和肠黏液中有特异性抗体IgG和sIgA产生。通过淋巴细胞增殖实验、细胞因子和CD分子测定表明DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论所构建的以重组沙门菌为载体口服布鲁氏菌DNA疫苗具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,且以细胞免疫应答为主。可作为潜在的布鲁氏菌新型疫苗。

关键词：布鲁氏菌 BLS-L7/L12 DNA疫苗伤寒沙门菌平衡致死系统

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