检索结果-内蒙古大学图书馆

中国家禽 2007年第21期29卷 55-56,58页

作者：高明燕胡茂志徐步吴艳涛王志亮焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏省物质微区与性能测试服务中心江苏扬州225009 中国农科院家禽科学研究所江苏扬州225003 农业部动物检疫所外来动物疾病诊断中心山东青岛266032

　　根据致病性不同,禽流感病毒(AIV)可以分为高致病性和低致病性.不同亚型AIV的致病性、细胞内定殖能力以及对T淋巴细胞的影响等特性可能有所不同.……

关键词：禽流感病毒 H4 致病性感染细胞定殖生物学特性细胞亚群尿囊液感染剂量混合感染

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家养水禽在A型流感病毒和新城疫病毒进化和疾病流行中的作用

家养水禽在A型流感病毒和新城疫病毒进化和疾病流行中的作用

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第二届中国水禽业发展高层论坛

作者：刘秀梵农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学兽医学院江苏扬州225009

本文对家养水禽在A型流感病毒和新城疫病毒进化和疾病流行中的作用进行了探讨。文章围绕A型流感病毒和新城疫病毒、野生水禽和家养水禽、家养水禽的A型流感病毒感染、家养水禽的NDV感染、家养水禽中A型禽流感病毒和新城疫病毒感染的控... 详细信息

本文对家养水禽在A型流感病毒和新城疫病毒进化和疾病流行中的作用进行了探讨。文章围绕A型流感病毒和新城疫病毒、野生水禽和家养水禽、家养水禽的A型流感病毒感染、家养水禽的NDV感染、家养水禽中A型禽流感病毒和新城疫病毒感染的控制等进行了论述。

关键词：水禽养殖禽流感病毒病毒进化

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H4亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备

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中国动物检疫 2007年第12期24卷 21-23页

作者：高明燕胡茂志孙林刘文博吴艳涛王志亮刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学江苏省物质微区与性能测试服务中心扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009 中国动物卫生与流行病学中心外来动物疾病诊断中心山东青岛266032

以H4亚型AIV分离株A/鸭/扬州/185/2003免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经血凝抑制(HI)试验筛选并克隆后,获得能够稳定分泌抗体的单克隆细胞株:2C11、6E7、4C8和5C5。4株单抗腹水的HI效价在2^(12)～2^(15),单抗亚类... 详细信息

以H4亚型AIV分离株A/鸭/扬州/185/2003免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经血凝抑制(HI)试验筛选并克隆后,获得能够稳定分泌抗体的单克隆细胞株:2C11、6E7、4C8和5C5。4株单抗腹水的HI效价在2^(12)～2^(15),单抗亚类均为IgG2a。4株单抗均能与感染了H4亚型AIV的MDCK细胞发生间接免疫荧光(IFA)反应。并且,均不与其他亚型AIV、NDV、IBV和EDS-76病毒发生HI反应。另外,4株单抗均能使病毒失去感染细胞的能力,显示出良好的中和特性。单抗HI反应谱表明,2C11、4C8、6E7和5C5分别可以抑制10株H4亚型AIV中9、8、7和7株病毒的血凝反应,且均不能抑制A/鸭/苏州/1/2002毒株的血凝作用。

关键词： H4亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体

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禽病原性大肠杆菌△iro △tsh缺失株的构建

禽病原性大肠杆菌△iro △tsh缺失株的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：陈祥潘志明高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室/江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

通过分子生物学方法分别将绿色荧光蛋白(EGFP)和庆大霉素抗性基因(GM)连接到PCR扩增的iro、tsh基因两端区域产生的2个目的基因片段之间,并分别插入到pUC18载体的多克隆位点。中,构建出带EGFP和GM标志的载体pUC18-iroBNEGFP和pUC18-tshFR... 详细信息

通过分子生物学方法分别将绿色荧光蛋白(EGFP)和庆大霉素抗性基因(GM)连接到PCR扩增的iro、tsh基因两端区域产生的2个目的基因片段之间,并分别插入到pUC18载体的多克隆位点。中,构建出带EGFP和GM标志的载体pUC18-iroBNEGFP和pUC18-tshFRGM,从中切下此3个片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体pMEG375-iroBNEGFP和pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到受体APECE037株中,根据同源重组原理,分别筛选出E037基因缺失突变株E037(△iro)、E037(△tsh)和E037(△iro△tsh)。动物实验结果表明E037(△iro)、E037(△tsh)和E037(△iro△tsh)突变株的致病性均有了明显下降.铁系统和温度敏感性血凝素在APEC E037株的致病性和持续感染中发挥重要的作用,但两个基因的致病协同能力不明显。在243株禽源大肠杆菌中,有205株为iro+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为89.8％(184/205)、8.8％(18/205)和1.5％(3/205);有167株为tsh+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4％(146/167)、12.6％(21/167)和0％(0/167)。结果显示铁系统和温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子。

关键词：禽病原性大肠杆菌铁系统血凝素基因缺失

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1962-2006年鸡白痢沙门氏菌耐药性的演化

1962-2006年鸡白痢沙门氏菌耐药性的演化

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第15届世界禽病大会、中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：王晓泉焦新安潘志明陈祥吴双刘晓文刘秀梵江苏省人兽共患病学重点实验室江苏省人兽共患病学重点实验室江苏省人兽共患病学重点实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室

1962-2006年间在江苏等10个省市分离和收集鸡白痢沙门氏菌分离株,测定其对抗生素的敏感性,比较不同年代沙门氏菌耐药性的差异,探讨沙门氏菌分离株耐药机制,以及40多年来分离株耐药性的演化过程。用微量稀释法测定了17种抗生素对鸡白痢... 详细信息

1962-2006年间在江苏等10个省市分离和收集鸡白痢沙门氏菌分离株,测定其对抗生素的敏感性,比较不同年代沙门氏菌耐药性的差异,探讨沙门氏菌分离株耐药机制,以及40多年来分离株耐药性的演化过程。用微量稀释法测定了17种抗生素对鸡白痢沙门氏菌分离株的敏感性,设计了18对耐药基因的引物和Ⅰ类整合子保守区引物,提取分离株的基因组和质粒,用 PCR 方法扩增沙门氏菌分离株的耐药基因,并通过接合试验分析耐药性的转移。1962-1970年分离株对17种抗生素的耐药率一般都较低,耐药率最高为磺胺甲基异恶唑(32．1%),其他抗生素的耐药率不超过22%;上个世纪70年代分离株的耐药率开始上升,并增加了壮观霉素和复方新诺明的耐药菌株;90年代分离株的耐药率达到高峰,但磺胺甲基异恶唑的耐药菌株从81．8%下降到35．7%,菌株对氯霉素和卡那霉素产生极低的耐药,多重耐药菌株和单个抗生素的耐药高峰出现于1998年以后,耐药表型主要为 ASSuTTm;2000年以后出现萘啶酮酸耐药菌株,同时对氟喹诺酮类药物的敏感性下降。鸡白痢沙门氏菌在近44年时间内耐药基因的产生发生了变化,在1962-1979年中,对一种抗生素的耐药基因往往是单一的,同时Ⅰ类整合酶基因检测为阴性,说明这些菌株都不携带基因盒。1990-1997年,耐药基因表现出多样性,如四环素耐药基因可能为 tetA、tetB 或 tetG 基因。1998-1999年,与耐药表型对应,耐药基因开始复杂,而且出现了Ⅰ类整合子,说明这些分离株中可能存在含有耐药基因的基因盒。2000-2006年,从本研究中的分离株来看,耐药基因似乎没有1998-1999年分离株复杂,但是新出现了 sul1基因。鸡白痢沙门氏菌耐药基因主要有 blatem-1, tetA,sul2,strA-B 和 dfrA12基因,类整合子出现于1998年以后分离株,dfrA17-aadA5基因盒在沙门氏菌中广泛存在,每个Ⅰ类整合子阳性分离株都携带 dfrA17-aadA5。近40多年来分离株的耐药性逐渐上升,单个耐药高峰出现于1998年,但是鸡白痢沙门氏菌的耐药性远远低于志贺氏菌、食源性和人源沙门氏菌等]。耐药基因多数由 I 类整合子和质粒携带,可以通过接合试验发生转移,可移动的 DNA 成分可能在耐药特性的转移和分布中起到重要作用。

关键词：鸡白痢沙门氏菌耐药性 Ⅰ类整合子接合转移

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禽病原性大肠杆菌ΔiroΔtsh缺失株的构建

禽病原性大肠杆菌ΔiroΔtsh缺失株的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：陈祥潘志明高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室/江苏省人兽共患病学重点实验室

通过分子生物学方法分别将绿色荧光蛋白(EGFP)和庆大霉素抗性基因(Gentamycin,GM)连接到PCR扩增的iro、tsh基因两端区域产生的2个目的基因片段之间,并分别插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带EGFP和GM标志的载体pUC18-iroBNEGFP和pU... 详细信息

通过分子生物学方法分别将绿色荧光蛋白(EGFP)和庆大霉素抗性基因(Gentamycin,GM)连接到PCR扩增的iro、tsh基因两端区域产生的2个目的基因片段之间,并分别插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带EGFP和GM标志的载体pUC18-iroBNEGFP和pUC18-tshFRGM,从中切下此3个片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体pMEG375-iroBNEGFP和pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到受体APEC E037株中,根据同源重组原理,分别筛选出E037基因缺失突变株E037(iro)、E037(tsh)和E037(iro tsh)。动物实验结果表明E037(iro)、E037(tsh)和E037(iro tsh)突变株的致病性均有了明显下降。铁系统和温度敏感性血凝素在APEC E037株的致病性和持续感染中发挥重要的作用,但两个基因的致病协同能力不明显。在243株禽源大肠杆菌中,有205株为iro+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为89.8%(184/205)、8.8%(18/205)和1.5%(3/205);有167株为tsh+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4%(146/167)、12.6%(21/167)和0%(0/167)。结果显示铁系统和温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子。

关键词：禽病原性大肠杆菌铁系统温度敏感性血凝素缺失突变株

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利用反向遗传技术研究H9N2亚型AIV传播途径的分子机制

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微生物学报 2006年第1期46卷 48-54页

作者：石火英刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

利用反向遗传技术,通过基因重排方法,产生两个表面基因来自A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)株和其余基因来自A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)AIV株的3株H9N2亚型重排AIV,动物传播性试验发现A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株、A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)AIV株和3株H9N2亚型重排AIV都可以经直接接触途径传播;在粪便接触途径下,3株重排AIV都不经粪便接触传播;只有A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株和重排AIV RF7/SSHA能经过气溶胶途径传播。HI试验结果进一步证明了以上的结果。实验结果表明H9N2亚型AIV的NA基因与H9N2亚型AIV气溶胶传播途径有重要的关系,即1998年中国大陆H9N2亚型AIV大流行可能是因为病毒获得气溶胶传播途径的特性,推测病毒的NA基因发挥了重要作用。

关键词： AIV H9N2亚型传播途径反向遗传技术 HA和NA基因

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抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第4期22卷 510-512页

作者：戴华焦新安潘志明黄金林胡茂志唐伟刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb)。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Wester... 详细信息

目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb)。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Westernblot鉴定mAb的特异性。结果:获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3,其Ig亚类均为IgG2a,腹水mAb1G5、5E3的ELISA效价分别为1∶1600000,1∶120000。在Dot-ELISA试验中,这2株mAb均只与表达His-ChIFN-γ及GST-ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,与未表达这2种IFN-γ的其他8种菌株均不发生反应。在蛋白质印迹试验中,2株mAb均能与融合蛋白GST-ChIFN-γ、His-ChIFN-γ发生反应,出现特异性条带。结果表明,mAb1G5、5E3是针对鸡γ-干扰素的特异性mAb。结论:成功地制备抗鸡γ-干扰素的mAb,它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应用价值。

关键词：鸡γ-干扰素(ChIFN-γ) 单克隆抗体

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H5N1亚型禽流感病毒NS第263~277位核苷酸缺失提高病毒对鸡的致病力

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微生物学报 2006年第2期46卷 301-305页

作者：龙进学薛峰彭宜顾敏刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义，构建H5N1A／D／SD／04株HA、NA、NS的全基因表达／转录载体，以及NS的删除突变载体（m248），A/D/YZ/04株的NS基因表... 详细信息

为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义，构建H5N1A／D／SD／04株HA、NA、NS的全基因表达／转录载体，以及NS的删除突变载体（m248），A/D/YZ/04株的NS基因表达／转录载体（848）和其补加15个核苷酸的NS突变载体（m848）。构建的载体分别与编码WSN（H1N1）内部基因载体进行组合转染，拯救获得4个具不同NS的重组的H5N1亚型流感病毒：RWSN-848和RWSN—m248在263-277位缺失15个碱基。RWSN-m848和RWSN-248则在相同位置不发生缺失。4个重组病毒的平均鸡胚繁殖效价（HA）、鸡胚的平均死亡时间（MDT）和鸡胚半数感染量（EID50）均无显著差异；但RWSN-848和RWSN-m248对6周龄SPF鸡的致病力明显高于RWSN—m848和RWSN-248。结果说明H5N1的NS基因在263～277位核苷酸发生缺失后，不影响重组H5N1在鸡胚中的繁殖性能，但提高了病毒对鸡的致病力。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒病毒拯救突变非结构基因NS 病毒蚀斑形成单位

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共表达H5亚型禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

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微生物学报 2006年第1期46卷 111-114页

作者：陈素娟孙蕾刘武杰孙学辉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗,将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同... 详细信息

为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗,将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同的外源基因且两基因盒方向为背向串联的重组转移载体p11SH5ANA。将p11SH5ANA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中。p11SH5ANA与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV-11SH5ANA。通过在含X-Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑,获得纯化的重组病毒。经传代证实该重组病毒具有良好的遗传稳定性。用105PFU的rFPV-11SH5NA免疫无特定病原体(SPF)鸡,能激发机体产生有效的血凝抑制(HI)抗体。初步的动物试验表明,该重组病毒能使经肌肉注射攻毒的SPF鸡抵抗H5亚型AIV的致死性攻击,保护率为100%,显示出一定的应用前景。

关键词： H5亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒血凝素神经氨酸酶

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