检索结果-内蒙古大学图书馆

中国家禽 2004年第1期26卷 31-33页

作者：张小荣焦新安扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

5影响DNA疫苗免疫应答的因素5.1载体本身的因素对于载体本身而言,启动子强弱是决定免疫应答强度的最主要因素.由于DNA疫苗载体由细菌质粒DNA衍生而来,而细菌的DNA中富含CpG基因序列,因此,载体序列中CpG基因序列的有无及数量多少也成了... 详细信息

5影响DNA疫苗免疫应答的因素5.1载体本身的因素对于载体本身而言,启动子强弱是决定免疫应答强度的最主要因素.由于DNA疫苗载体由细菌质粒DNA衍生而来,而细菌的DNA中富含CpG基因序列,因此,载体序列中CpG基因序列的有无及数量多少也成了影响免疫应答的因素.此外,质粒的存在形式也可能会对免疫应答造成影响,例如仅有Schubbert的一篇研究报道表明,将NDV F基因克隆入CMV极早期启动子和鸡β肌动蛋白基因启动子的下游,构建NDVDNA疫苗,环状质粒DNA肌肉接种1周龄小鸡并不能诱导产生针对F蛋白的抗体,也没有任何保护效果,而线性化质粒DNA免疫后的5只鸡有4只产生了高水平的抗体,并能保护强毒株的攻击.而在其他所有的研究中使用的都是高纯度的超螺旋质粒DNA进行免疫.

关键词：家禽 DNA疫苗载体安全性

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两种消毒剂对禽流感病毒的杀灭效果

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中国兽医杂志 2004年第5期40卷 43-44页

作者：卢建红刘玉良韦栋平邵卫星张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

禽流感是由正粘病毒科中的A型流感病毒引起的一种禽类感染和疾病综合征.A型流感病毒基因易变、亚型众多、分布广泛,虽然中国出现的禽流感主要是低致病性的H9N2亚型,但各种家禽散养和混养的生态以及香港和世界各地不断从活禽市场检出H5N... 详细信息

禽流感是由正粘病毒科中的A型流感病毒引起的一种禽类感染和疾病综合征.A型流感病毒基因易变、亚型众多、分布广泛,虽然中国出现的禽流感主要是低致病性的H9N2亚型,但各种家禽散养和混养的生态以及香港和世界各地不断从活禽市场检出H5N1流感病毒或发生禽流感等情况提示我们加强禽流感的防止工作迫在眉睫,除应用疫苗外,卫生和消毒等是非常重要的生物安全措施.我们对两种不同制剂的消毒剂进行了杀灭流感病毒试验,可以给实际应用提供参考.

关键词：消毒剂禽流感病毒杀灭效果菌毒杀星杀毒威

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抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 702-704页

作者：曾艳兵焦新安潘志明黄金林张评汻张苏华孙泉云刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 上海畜牧兽医总站兽医诊断中心上海201103

目的 :制备抗禽流感病毒 (AIV)H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以AIVH9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原 ,免疫 8wk龄BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹... 详细信息

目的 :制备抗禽流感病毒 (AIV)H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以AIVH9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原 ,免疫 8wk龄BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价 ;采用ELISA、HI、免疫荧光染色 (IF)及Westernblot鉴定mAb的特异性。结果 :获得 3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株 2A3、2H1和 1C8,其腹水mAb的ELISA效价依次为 1× 10 7、1× 10 5和 5× 10 6,血凝抑制效价为 1× 2 8～ 1× 2 13 ;3株mAb的Ig亚类均为IgG1。以mAb 2H1进行Westernblot的结果显示 ,该mAb能与AIV的Mr 为 75 0 0 0的蛋白条带起反应 ,表明其是针对AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb。与 32株AIVH9亚型国内分离株进行血凝抑制试验表明 ,mAb 2H1具有良好的广谱性。结论 :成功地制备了抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ,为AIV的抗原性分析、血清学诊断。

关键词：禽流感病毒 H9亚型血凝素单克隆抗体

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H_9亚型禽流感病毒分型单克隆抗体的研制及初步应用

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中国家禽 2004年第10期26卷 21-22,27页

作者：王海燕刘文博胡顺林孔晶吴艳涛文其乙张评浒高崧张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

禽流感分型单克隆抗体在禽流感的检疫、监测、预警预报工作中发挥重要作用。作者以Ｈ_9 Ｎ_2 亚型禽流感病毒Ｆ株为免疫原获得了特异性优、血凝抑制效价高的单克隆抗体，为Ｈ_9 亚型禽流感病毒的分型提供了良好的诊断试剂。

关键词： H9亚型禽流感病毒单克隆抗体宿主谱传染源诊断

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直接酶联免疫吸附法和聚合酶链反应联合检测沙门菌的应用

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中华预防医学杂志 2004年第5期38卷 331-334页

作者：黄金林焦新安潘志明文其乙孙林刘秀梵扬州大学生物科学与技术学院 225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

目的　通过比较试验 ,得到准确、快速的沙门菌检测方法。方法　 2 2 8株沙门菌经过前增菌、选择性增菌后 ,采用在聚合酶链反应 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 ,并将 2种快速检测方法进行比较研究。结果　PCR法的敏感性优于直接... 详细信息

目的　通过比较试验 ,得到准确、快速的沙门菌检测方法。方法　 2 2 8株沙门菌经过前增菌、选择性增菌后 ,采用在聚合酶链反应 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 ,并将 2种快速检测方法进行比较研究。结果　PCR法的敏感性优于直接ELISA法 ,2种方法的检测符合率达 99%以上。直接ELISA结合PCR法对饮食行业工作人员健康检查的 15 4 6份人粪便样品进行检测 ,同时以国家标准方法为参照 ,直接ELISA法的敏感性和特异性达 10 0 %和 97 14 % ,PCR法的敏感性和特异性均为 10 0 %。结论　优化的沙门菌检测程序是对大量样品采用直接ELISA筛检 ,除去大量阴性样品 ,阳性样品用PCR法作进一步鉴定 ;血清型的确定用国家标准方法。

关键词：沙门菌 PCR法酶联免疫吸附法 ELISA法联合检测聚合酶链反应敏感性人粪比较试验样品

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H7亚型禽流感病毒血凝素基因的真核表达载体的构建及鉴定

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中国家禽 2004年第z1期26卷 31-34页

作者：杨旭芹梁光军张小荣文其乙刘秀梵扬州大学兽医学院畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州225009

参考已发表的H7亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列设计引物,以pUCH7为模板,经PCR扩增出一条1.7kb的HA全基因片段,将该片段定向克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(一)中,转化大肠埃希氏菌DH5α,小量制备重组质粒pcDNA-HA,酶切鉴定正确... 详细信息

参考已发表的H7亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列设计引物,以pUCH7为模板,经PCR扩增出一条1.7kb的HA全基因片段,将该片段定向克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(一)中,转化大肠埃希氏菌DH5α,小量制备重组质粒pcDNA-HA,酶切鉴定正确后,转染COS-1细胞,经免疫荧光鉴定其体外表达情况。结果表明H7亚型AIV HA在COS-1细胞中获得了成功表达。用该重组质粒pcDNA-HA免疫BALB／C小鼠,制备免疫血清,经免疫印迹实验证实该H7亚型AIV HA在小鼠体内也得到了良好的表达。

关键词： H7亚型禽流感病毒血凝素基因真核表达质粒载体表达

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产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆表达和生物学活性的鉴定

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中国人兽共患病杂志 2004年第7期20卷 573-576页

作者：梁光军田银芳文其乙张小荣潘志明高玉高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 扬州大学实验农场苏北人民医院

目的　利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法　设计针对α毒素基因的一对引物 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后 ,回收的α毒素目的条带与 pGEX6 p - 1表达载体经限制性内... 详细信息

目的　利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法　设计针对α毒素基因的一对引物 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后 ,回收的α毒素目的条带与 pGEX6 p - 1表达载体经限制性内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,进行连接 ,转化大肠杆菌BL2 1。诱导表达后 ,做SDS -PAGE电泳 ,出现特异的表达产物条带。表达产物做溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种小鼠实验。结果　构建的重组质粒经内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,发现特异的目的基因条带。SDS -PAGE电泳后 ,发现重组菌株有特异的表达条带。实验证明表达产物具有溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种后致死小鼠特性。结论　重组菌株BL2 1(pGEX6p - 1-cpα)表达了具有活性的α毒素蛋白。目的　利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法　设计针对α毒素基因的一对引物 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后 ,回收的α毒素目的条带与 pGEX6 p - 1表达载体经限制性内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,进行连接 ,转化大肠杆菌BL2 1。诱导表达后 ,做SDS -PAGE电泳 ,出现特异的表达产物条带。表达产物做溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种小鼠实验。结果　构?

关键词：产气荚膜梭菌 α毒素基因克隆表达生物学活性鉴定聚合酶链式反应

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运送鹅源新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌及其免疫原性

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农业生物技术学报 2004年第4期12卷 412-415页

作者：潘志明焦新安张小荣张晓明黄金林万洪全刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 扬州225009 扬州225009 扬州225009 扬州225009 扬州225009 扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 扬州225009

根据GenBank中发表的新城疫病毒融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株JS5 F基因,约1 700 bp,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,得到候选DNA疫苗pVAX1-F。将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌(Sal... 详细信息

根据GenBank中发表的新城疫病毒融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株JS5 F基因,约1 700 bp,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,得到候选DNA疫苗pVAX1-F。将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)X4550,获得运送DNA疫苗的重组沙门氏菌X4550(pVAX1-F)。以2×108CFU/只的剂量两次免疫CD1小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDV F蛋白的血清抗体应答,X4550(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于X4550(pVAX1)组(P <0.05),表明该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能够成功释放所携带的质粒,并能够刺激机体产生免疫应答。

关键词：减毒沙门氏菌 DNA疫苗新城疫病毒免疫原性

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猪肺炎支原体特异性蛋白P36基因的克隆与表达

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中国预防兽医学报 2004年第3期26卷 188-191页

作者：胡茂志焦新安张小荣潘志明黄金林殷月兰张晓明邵国青刘文博刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014

根据Genbank中猪肺炎支原体P36基因序列设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体ZCF23株特异性蛋白P36基因序列,经测序确认后,克隆入原核表达载体pGEX6p＿1的EcoRI和XhoI位点之间,转化宿主菌BL21,将筛选出的阳性... 详细信息

根据Genbank中猪肺炎支原体P36基因序列设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体ZCF23株特异性蛋白P36基因序列,经测序确认后,克隆入原核表达载体pGEX6p＿1的EcoRI和XhoI位点之间,转化宿主菌BL21,将筛选出的阳性克隆用IPTG诱导,通过SDS＿PAGE电泳进行鉴定,结果表明,P36蛋白基因获得了表达,这为猪肺炎支原体免疫检测与诊断提供了重要条件。

关键词：猪肺炎支原体 P36基因克隆表达

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H9N2亚型A型流感

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中国禽业导刊 2004年第9期21卷 30-31页

作者：王海燕刘文博文其乙张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

A型流感病毒能引起各种鸟类、低等哺乳动物和人类的疾病.禽流感(AI)自1878年在意大利首次发现至今,由于候鸟的迁徙和国际间贸易的日益频繁,使得该病呈全球性分布,给养禽业造成巨大的经济损失.1997年'香港禽流感'表明,AI已对人... 详细信息

A型流感病毒能引起各种鸟类、低等哺乳动物和人类的疾病.禽流感(AI)自1878年在意大利首次发现至今,由于候鸟的迁徙和国际间贸易的日益频繁,使得该病呈全球性分布,给养禽业造成巨大的经济损失.1997年'香港禽流感'表明,AI已对人类的健康造成了潜在的威胁.流感病毒(IV)血清亚型繁多,自从1966年Homme等人首次报道从火鸡中分离出H9N2亚型A型IV以来,陆续从鸡、野鸡、鸭、鸽子和鹌鹑中分离到该亚型AⅣ.除禽和人以外,还从其它动物中分离到.我国最早于1980年从鸭饮过的水中分离到.1994年以来,从我国鸡群中普遍分离出该亚型病毒,该病已严重威胁了我国养禽业的发展.

关键词： H9N2亚型 A型流感病毒禽流感致病性毒株流行病学

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