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中国畜牧兽医学会2010学术年会暨第二届中国兽医临床大会

作者：王彦红朱陈娟刘慧谋张小荣刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州 225009

@@禽白血病是由禽白血病/肉瘤病毒群中的病毒引起的禽类的多种肿瘤性疾病的统称，该病毒群被分为A-J等10个亚群。1989年Payne首次从肉种鸡中分离出J亚群禽白血病病毒(ALV-J)，2000年杜岩等从商品代肉鸡分离出ALV-J，随后，2002年徐镔蕊... 详细信息

@@禽白血病是由禽白血病/肉瘤病毒群中的病毒引起的禽类的多种肿瘤性疾病的统称，该病毒群被分为A-J等10个亚群。1989年Payne首次从肉种鸡中分离出J亚群禽白血病病毒(ALV-J)，2000年杜岩等从商品代肉鸡分离出ALV-J，随后，2002年徐镔蕊等从商品代蛋鸡中分离出该病毒。ALV-J可通过垂直传播和水平传播感染鸡群，导致很高的死亡率、肿瘤发生、生产性能降低等，造成严重损失。同时ALV-J感染鸡群后，导致其它疾病的发生。

关键词：迪卡蛋鸡 J亚群禽白血病葡萄球菌诊断技术

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H5N1流感疫苗株在Vero细胞中的研究[英文]

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免疫学杂志 2010年第4期26卷 281-284,289页

作者：鹿文葆罗德炎杨鹏辉刘坤刑丽王希良刘秀梵军事医学科学院微生物流行病学研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学农业部畜禽传染病学重点实验室 225009

目的产生在Vero(非洲绿猴肾)细胞中能高适应生长的重配H5N1流感病毒疫苗株,并对其生物学特性进行初步测定。方法修饰A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)的NS基因为Vero细胞适应型,并合成NS基因片段,构建质粒pHW2000-NS;通过RT-PCR方法,扩增... 详细信息

目的产生在Vero(非洲绿猴肾)细胞中能高适应生长的重配H5N1流感病毒疫苗株,并对其生物学特性进行初步测定。方法修饰A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)的NS基因为Vero细胞适应型,并合成NS基因片段,构建质粒pHW2000-NS;通过RT-PCR方法,扩增疫苗株A/Anhui/01/2005(H5N1)的HA、NA基因片段,构建质粒pHW2000-HA、pHW2000-NA;以PR8的其它5个内部基因作为骨架,按照1+2+5模式8质粒共转染Vero细胞拯救流感病毒,并对拯救病毒的生物学特性进行检测。结果由Vero拯救出具有高适应生长特性的H5N1亚型人禽流感病毒疫苗株,并检测了重配疫苗株的生物学特性。结论成功从Vero细胞拯救了具有Vero细胞高适应性生长特性的H5N1亚型人禽流感病毒疫苗株,为应用Vero细胞大规模生产流感疫苗奠定了基础。

关键词： H5N1流感疫苗反向遗传学 Vero细胞

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我国新城疫病毒的分子流行病学及新疫苗研制

我国新城疫病毒的分子流行病学及新疫苗研制

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会

作者：刘秀梵胡顺林扬州大学农业部畜禽传染病学重点实验室扬大兽医学院

当前我国及周边地区流行的新城疫病毒主要为基因Ⅶ型,而目前所使用的的疫苗主要为基因Ⅱ型La Sota株,其与流行株的遗传距离较远。疫苗株与流行株之间的基因型差异被认为是免疫禽群中新城疫强毒发生感染的主要原因之一,为了提高疫苗的免... 详细信息

当前我国及周边地区流行的新城疫病毒主要为基因Ⅶ型,而目前所使用的的疫苗主要为基因Ⅱ型La Sota株,其与流行株的遗传距离较远。疫苗株与流行株之间的基因型差异被认为是免疫禽群中新城疫强毒发生感染的主要原因之一,为了提高疫苗的免疫效力,我们成功研制出了基因Ⅶd亚型新城疫病毒致弱株,该致弱株在控制当前新城疫的发生和流行方面具有较大的优势和潜力。

关键词：新城疫病毒流行株基因型疫苗

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鸡白痢沙门氏菌分离株生物膜的测定

鸡白痢沙门氏菌分离株生物膜的测定

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会

作者：卢艳张小荣董洪燕陈素娟彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

【前言】细菌生物膜的形成是细菌为适应环境维持自身生命所发生的形态学变化,处于生物膜状态的细菌可增强对外界环境、机体的免疫力和各种杀菌作用的抵抗力,造成持续感染和重复感染。有研究表明鸡白痢沙门氏菌可形成生物膜,但有关鸡白... 详细信息

【前言】细菌生物膜的形成是细菌为适应环境维持自身生命所发生的形态学变化,处于生物膜状态的细菌可增强对外界环境、机体的免疫力和各种杀菌作用的抵抗力,造成持续感染和重复感染。有研究表明鸡白痢沙门氏菌可形成生物膜,但有关鸡白痢沙门氏菌生物膜检测方法的报道甚少,鸡白痢

关键词：沙门氏菌分离株生物膜鸡白痢沙门氏菌

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鸡白痢沙门氏菌生物膜形成相关基因的鉴定

鸡白痢沙门氏菌生物膜形成相关基因的鉴定

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会

作者：卢艳陈素娟董洪燕张小荣彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

【前言】前期研究采用转座子随机插入法鉴定出8个肠炎沙门氏菌生物膜形成相关基因,为了鉴定这些基因在鸡白痢沙门氏菌生物膜形成中的作用,我们以生物膜形成能力强的鸡白痢沙门氏菌S6702为母本构建了相关基因的缺失突变株,并对其生物学... 详细信息

【前言】前期研究采用转座子随机插入法鉴定出8个肠炎沙门氏菌生物膜形成相关基因,为了鉴定这些基因在鸡白痢沙门氏菌生物膜形成中的作用,我们以生物膜形成能力强的鸡白痢沙门氏菌S6702为母本构建了相关基因的缺失突变株,并对其生物学特性进行了研究。

关键词：鸡白痢沙门氏菌突变株生物膜形成相关基因

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1株对小鼠呈高致病性H5N1亚型禽流感病毒的遴选

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免疫学杂志 2010年第2期26卷 132-135,143页

作者：董梅顾敏曹军平彭大新王希良刘秀梵军事医学科学院微生物流行病研究所免疫研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学畜牧兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室 225009

目的观察从死禽体内分离的禽流感H5N1病毒株对小鼠的致病情况,筛选一株可用于小鼠攻毒实验的H5N1毒株。方法将17株禽源H5N1病毒分别滴鼻感染6～8周龄Balb/c小鼠,观察其对小鼠的致病和致死情况。通过测定其中毒力较强一株的EID_(50)、TCI... 详细信息

目的观察从死禽体内分离的禽流感H5N1病毒株对小鼠的致病情况,筛选一株可用于小鼠攻毒实验的H5N1毒株。方法将17株禽源H5N1病毒分别滴鼻感染6～8周龄Balb/c小鼠,观察其对小鼠的致病和致死情况。通过测定其中毒力较强一株的EID_(50)、TCID_(50)、小鼠LD_(50)及濒死小鼠不同组织中病毒载量,判定其致病力;采用遗传进化分析绘制HA基因进化树,了解其进化特征。结果动物实验表明,17株高致病性禽源H5N1毒株中,仅有一株对小鼠为高致病性。该毒株TCID_(50)/100μl=7.2,EID_(50)/100μl=8.325,小鼠1 LD_(50)/100μl=6.318≈10~2EID_(50)。鼻粘膜感染4～6 d小鼠发病,表现为精神萎靡、食欲减退、竖毛、弓背等临床症状,体重明显减轻。小鼠死亡集中在发病后的2～5 d,耐过死亡者12 d完全恢复正常。从濒死感染小鼠脾、肺、鼻及脑组织中皆可检出流感病毒NS片段,病毒数载量以脑组织中最多,达3.56×10^(10)拷贝/5μl。结论筛选到一株对小鼠呈强致病性H5N1亚型禽流感毒株,可以用于禽流感疫苗交叉保护效果评价的小鼠攻击实验,也可以作为感染模型用于H5N1禽流感病毒致病机制的研究。

关键词：禽 H5N1病毒株致病性小鼠

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简化RACE方法测定基因Ⅲ、Ⅵb和Ⅶd型新城疫病毒leader和trailer序列及分析

简化RACE方法测定基因Ⅲ、Ⅵb和Ⅶd型新城疫病毒leader和trailer...

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：仇旭升丁铲陈鸿军刘秀梵中国农业科学院上海兽医研究所扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

【目的】利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplificationofcDNA ends,RACE)测定基因Ⅲ、Ⅵb和VⅦd型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因组两侧末端序列,并对NDV的leader和trailer进行分析。【方法】利用T4 RNA连接酶将特定寡聚核苷酸片段的连接于病毒基因组RNA和cDNA,再利用RT-PCR或PCR方法对病毒基因组的末端进行快速的扩增。【结果】建立一套操作简单、低成本、可重复性高的RACE方法,测定了三种基因型5株NDV 3'末端leader和5'末端trailer序列比对分析【结论】本实验测定的鹅源VII型毒株JS/7/05/Ch基因组的15,184nt由一个T变为了C,5'端trailer与3'端leader的连续互补序列由8 nt变为12 nt,而其它4株基因Ⅲ型和Ⅵ型NDV均未发现该突变。通过RNA的二级结构分析,NDV基因组和反向基因组RNA的3'末端形成一个发卡结构。JS/7/05/Ch等3株NDV U→C(T→C)的突变位于发卡环上,不影响二级结构的形成,发卡环的RNA序列突变为3'-UCUC-5',与基因组3'端发卡环的3'-UCUUA-5'相似,推测可能影响了基因组RNA的复制速度。

关键词： RACE 基因Ⅲ型基因Ⅵb型新城疫病毒 leader trailer

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表达鸡马立克氏病病毒糖蛋白B基因重组鸡痘病毒毒种的纯净性检验及冻干疫苗的保存期测定

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中国兽药杂志 2010年第9期44卷 1-3页

作者：卢军胡传伟金乔刘武杰彭大新刘秀梵上海市动物疫病预防控制中心上海201103 农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为了检测高效表达鸡马立克氏病病毒gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的纯净性,对纯化后的0代重组病毒毒种进行了细菌和支原体检验;并对中间试制的冻干疫苗在-20℃保存期进行了测定。结果表明,重组病毒毒种高度纯净,没有污染任何细菌或... 详细信息

为了检测高效表达鸡马立克氏病病毒gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的纯净性,对纯化后的0代重组病毒毒种进行了细菌和支原体检验;并对中间试制的冻干疫苗在-20℃保存期进行了测定。结果表明,重组病毒毒种高度纯净,没有污染任何细菌或支原体,符合新制品制造和检验规程申报的要求;中试冻干疫苗在-20℃保存了12个月,病毒含量始终大于109PFU/mL,疫苗保存期可达12个月。

关键词：鸡马立克氏病 gB基因重组鸡痘病毒纯净性检验保存期

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华东地区家鸭中N1亚型禽流感病毒NA基因的遗传进化分析

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病毒学报 2009年第2期25卷 131-136页

作者：仇保丰刘武杰唐应华彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了解华东地区家鸭内禽流感病毒的遗传进化情况,对2002-2006年分离自华东地区家鸭的3种主要N1亚型的禽流感病毒：2株H1N1、10株H3N1和14株H5N1,共26株病毒的NA基因进行了遗传进化分析。结果表明,华东地区家鸭中的N1亚型的禽流感病毒正... 详细信息

为了解华东地区家鸭内禽流感病毒的遗传进化情况,对2002-2006年分离自华东地区家鸭的3种主要N1亚型的禽流感病毒：2株H1N1、10株H3N1和14株H5N1,共26株病毒的NA基因进行了遗传进化分析。结果表明,华东地区家鸭中的N1亚型的禽流感病毒正处于不断进化状态中。14株H5N1禽流感病毒均在NA的茎部缺失20个氨基酸（49-68位）,而其他N1亚型的禽流感病毒的NA都未见发生此缺失。H3N1病毒可能与H1N1病毒发生了NA基因的重排,但是目前还没有直接证据表明华东地区家鸭中H5N1禽流感参与了基因重排。

关键词：家鸭禽流感病毒 NA基因遗传进化分析

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简化RACE方法测定基因III、VIb和VIId型新城疫病毒leader和trailer序列及分析

简化RACE方法测定基因III、VIb和VIId型新城疫病毒leader和traile...

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：仇旭升丁铲陈鸿军刘秀梵中国农业科学院上海兽医研究所上海 200241 中国农业科学院上海兽医研究所上海 200241 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州 225009

目的:利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplificalion of cDNA ends，RACE)测定基因Ⅲ、VIb和VIId型新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)基因组两侧末端序列，并对NDV的leader和trailer进行分析。方法:利用T4 RNA连接酶将特... 详细信息

目的:利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplificalion of cDNA ends，RACE)测定基因Ⅲ、VIb和VIId型新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)基因组两侧末端序列，并对NDV的leader和trailer进行分析。方法:利用T4 RNA连接酶将特定寡聚核苷酸片段的连接于病毒基因组RNA和cDNA，再利用RT-PCR或PCR方法对病毒基因组的末端进行快速的扩增。结果:建立一套操作简单、低成本、可重复性高的RACE方法，测定了三种基因型5株NDV 3’末端leader和5’末端trailer序列比对分析结论:本实验测定的鹅源Ⅶ型毒株JS/7/05/Ch基因组的15，184nt由一个T变为了C，5’端trailer与3’端leader的连续互补序列由8 nt变为12 nt，而其它4株基因Ⅲ型和Ⅵ型NDV均未发现该突变。通过RNA的二级结构分析，NDV基因组和反向基因组RNA的3’末端形成-个发卡结构。JS/7/05/Ch等3株NDV U→C(T→C)的突变位于发卡环上，不影响二级结构的形成，发卡环的RNA序列突变为3’-UCUC-5’，与基因组3’端发卡环的3’-UCUUA-5’相似，推测可能影响了基因组RNA的复制速度。

关键词：新城疫病毒基因测定序列分析快速扩增技术

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