检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2007年第2期47卷 221-227页

作者：王晓泉焦新安刘晓文陈祥宦海霞刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

从江苏省部分地区收集了117个沙门氏菌分离株,其中食物源和人源菌株分别有81株和36株。16种抗生素敏感性试验表明,有111个分离株对2种或2种以上的抗生素有耐药性,人源沙门氏菌分离株的抗生素耐药率比食物源的高,单一抗生素以链霉素耐药... 详细信息

从江苏省部分地区收集了117个沙门氏菌分离株,其中食物源和人源菌株分别有81株和36株。16种抗生素敏感性试验表明,有111个分离株对2种或2种以上的抗生素有耐药性,人源沙门氏菌分离株的抗生素耐药率比食物源的高,单一抗生素以链霉素耐药率(92.3%,108/117)最高。对5种或5种以上抗生素耐药的分离株有59株(50.4%),其中对特定六种抗生素:氨苄青霉素、氯霉素、链霉素、磺胺、四环素和卡那霉素耐药(ACSSuTK,R型)的菌株有12株。设计18对耐药基因和I类整合子保守区的引物,对36株有不同来源和耐药特征的多重耐药菌株进行耐药基因和I类整合子的检测,PCR扩增结果与抗生素敏感性表型一致。有30株细菌携带有I类整合子,大小为0.3、0.6、1.0、1.2和1.6kb,其中1.6kb(aadA5-dfr17)大小的整合子在25株细菌中分布(24/36)。接合试验表明,氨苄青霉素、氯霉素、链霉素、甲氧苄氨嘧啶和四环素的耐药特性是由接合性质粒携带。结果显示,耐药基因多数由I类整合子和质粒携带,可以通过接合试验发生转移,可移动的DNA成分可能在耐药特性的转移和分布中起到重要作用。

关键词：沙门氏菌多重耐药性整合子接合

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表达禽流感病毒特异性siRNA分子减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建

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病毒学报 2007年第2期23卷 125-129页

作者：刘文博张小荣曹永忠王海燕吴艳涛焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了寻找一种新的短干扰RNA（short interfering RNA，siRNA）片段的表达和递送系统，并进行评价，根据禽流感病毒核苷酸序列，设计了3条分别针对A型禽流感病毒核衣壳蛋白、聚合酶A和H5亚型禽流感病毒血凝素的特异性siRNA分子，人工合... 详细信息

为了寻找一种新的短干扰RNA（short interfering RNA，siRNA）片段的表达和递送系统，并进行评价，根据禽流感病毒核苷酸序列，设计了3条分别针对A型禽流感病毒核衣壳蛋白、聚合酶A和H5亚型禽流感病毒血凝素的特异性siRNA分子，人工合成相应DNA片段，退火后形成双链，与阴性对照片段分别连接到构建的pSIREN—ASD ZsGreen载体鼠源U6启动子下游，测序鉴定证实获得了阳性质粒，分别命名为PAZ—NP、PAZ-PA、PAZ—HA和PAZ-NC，1ng的质粒可以完全抑制50个PFU的禽流感病毒在MDCK细胞上的复制，细胞不产生任何病变，细胞上清的血凝效价为2^0，而对照组细胞在病毒感染36～48h后细胞变圆、死亡、脱落，其细胞上清的血凝效价可达2^4。将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550得到重组沙门氏菌X4550（PAZ—NP）、X4550（PAZ-PA）、X4550（PAZ—HA）和X4550（PAZ-NC）。对4日龄雏鸡口服1×10^9菌落形成单位（CFU）的重组菌后第1d、7d、15d用10。ELDso的H5亚型AIV进行攻毒，最后一次攻毒后观察15d，实验结束时采泄殖腔棉拭子对存活鸡进行病毒分离。结果表明，表达不同的siRNA分子对雏鸡有一定的保护力，保护率为27％～50％不等，存活鸡泄殖腔棉拭子未分离到病毒，说明重组减毒沙门氏菌携带质粒在体内产生的siRNA能够对机体产生一定保护力。

关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌 siRNA H5亚型禽流感病毒递送系统保护力

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江苏省猪高热病病例主要继发感染病毒的多重PCR检测

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中国兽医科学 2007年第12期37卷 1029-1034页

作者：叶俊平盛瑜朱丽娜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

应用建立的2个多重PCR方法，对2005～2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果，PRRSV阳性率为51．2％，PCV2阳性率为44．1％，CSFV阳性率为10．4％，PPV阳性率为3．9％，PRV阳性率为2．4％。2005年病料中PCV2阳性率... 详细信息

应用建立的2个多重PCR方法，对2005～2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果，PRRSV阳性率为51．2％，PCV2阳性率为44．1％，CSFV阳性率为10．4％，PPV阳性率为3．9％，PRV阳性率为2．4％。2005年病料中PCV2阳性率为21．2％，2006年为73．2％；2005年PRRSV阳性率为38．1％，2006年为67．7％。2006年猪高热病疫情比2005年严重，PCV2和PRRSV可能在其中发挥了协同致病作用。对10个PRRSV分离株ORF5基因和Nsp2基因进行的测序表明，2006年分离株Nsp2基因中有连续87个碱基的缺失。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型猪细小病毒猪瘟病毒猪伪狂犬病病毒猪高热病多重PCR ORF5基因 Nsp2基因

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1株H1亚型水禽流感病毒分离株的致病特性和表面膜蛋白基因的序列分析

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中国兽医学报 2007年第6期27卷 785-789,794页

作者：薛峰刘慧谋彭宜张评浒钱忠明刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用常规血清学试验和特异性RT-PCR方法,对我国华东地区家养水禽流感病毒进行了长达4年的跟踪监测,分离到多株H1亚型禽流感病毒,并对其中的1株A/Duck/Yangzhou/163/2003(简称Dk/YZ/163/03)的血凝素基因进行了序列测定,并与GenBank中收... 详细信息

采用常规血清学试验和特异性RT-PCR方法,对我国华东地区家养水禽流感病毒进行了长达4年的跟踪监测,分离到多株H1亚型禽流感病毒,并对其中的1株A/Duck/Yangzhou/163/2003(简称Dk/YZ/163/03)的血凝素基因进行了序列测定,并与GenBank中收录的其他序列进行了比较。结果发现,Dk/YZ/163/03的血凝素基因(HA)与禽流感日本分离株A/Japan/91(H1)的同源性最高;而神经氨酸酶基因(NA)与Mallard dk/A1b/35/1976(H1N1)同源性最高;其推导的氨基酸剪切位点序列为P-S-I-Q-S-R,是典型低致病性禽流感病毒的特征序列,这与该毒株对SPF鸡和BALB/c小鼠的低致病特性相吻合。

关键词：禽流感病毒 H1亚型 HA NA 致病性剪切位点

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禽流感病毒H5亚型主要保护性抗原在禽痘病毒中的高效表达

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中国兽医学报 2007年第2期27卷 200-202页

作者：陈素娟孙蕾石火英彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009

将H5亚型禽流感病毒血凝素HA基因克隆入插入载体p11S中获得重组转移质粒p11SH5A,通过酶切鉴定获得了预期的转移质粒p11SH5A,将质粒p11SH5A和野生禽痘病毒(wtFPV)共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝白斑筛选纯化得到重组病毒rFPV-11SH5A... 详细信息

将H5亚型禽流感病毒血凝素HA基因克隆入插入载体p11S中获得重组转移质粒p11SH5A,通过酶切鉴定获得了预期的转移质粒p11SH5A,将质粒p11SH5A和野生禽痘病毒(wtFPV)共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝白斑筛选纯化得到重组病毒rFPV-11SH5A。以间接免疫荧光法证实,HA基因得到了表达。将该重组病毒rFPV-11SH5A以105PFU/只免疫7日龄SPF鸡,于7、10、14、18、21d分别采血分离血清检测HI抗体,于免疫21d后用105ELD50的野生病毒进行肌肉注射观察疫苗保护率。结果表明,该疫苗能提供100%的保护。

关键词： H5亚型禽流感病毒血凝素HA基因重组鸡痘病毒免疫效力

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鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白单克隆抗体的制备及其初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第12期23卷 1197-1199页

作者：王彦红马怀良时红星吴培培彭大新刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州225009

目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb)。方法:以鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠... 详细信息

目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb)。方法:以鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,用间接ELISA方法检测筛选。结果:阳性细胞株经3代克隆纯化后,获得3株能稳定分泌抗FPVORF214蛋白mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2F10C9、3C3B10、2G8G7。3株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与FPVORF214蛋白反应,细胞上清ELISA效价均在1×102以上,mAb腹水效价达1×104以上。结论:该特异性mAb的研制成功为进一步研究ORF214的生物学特性奠定基础。

关键词：鸡痘病毒 ORF214 单克隆抗体(mAb)

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抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白特异性单克隆抗体的研制及鉴定

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中国兽医学报 2007年第5期27卷 664-666页

作者：郝贵杰提金凤陈清刘文博吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

以抗H5亚型禽流感病毒(AIV)JSD株鸡胚尿囊液免疫8周龄BALB/c小鼠,第4次免疫后取其脾淋巴细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)对杂交瘤进行筛选,经3次亚克隆后,共获得4株针对血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体,分别命名... 详细信息

以抗H5亚型禽流感病毒(AIV)JSD株鸡胚尿囊液免疫8周龄BALB/c小鼠,第4次免疫后取其脾淋巴细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)对杂交瘤进行筛选,经3次亚克隆后,共获得4株针对血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体,分别命名为:2D2、2C8、3D3和3D11。该4株单抗的小鼠腹水的HI效价在213～215,ELISA效价为1.2×105～5.1×105。亚类鉴定结果表明,2D2和3D11属于IgG1,2C8属于IgG3,3D3属于IgG2a亚类;特异性试验结果表明,上述4株单抗仅与H5 AIV毒株发生特异性反应,而不与其他亚型AIV以及NDV、IBV和EDSV-76等病毒反应;鸡胚中和试验结果显示,4株单抗均具有较好的中和活性。本研究成功获得4株针对H5 AIVHA蛋白的特异性单抗,为临床H5 AIV的血清学监测及鉴定提供了必需的试剂。

关键词：禽流感病毒单克隆抗体血凝抑制试验

来源：评论

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鸡IL-2、IL-18、IFN-γ cDNA和CpG DNA在减毒沙门菌运送H5亚型禽流感DNA疫苗中的佐剂作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第6期27卷 570-573页

作者：胡青海潘志明张成全焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室 225009

目的探讨鸡IL-2、IL-18、IFN-γcDNA和CpG DNA在减毒沙门菌运送H5亚型禽流感DNA疫苗中的佐剂作用。方法将携带禽流感病毒(AIV)DNA疫苗的重组沙门菌SL7207(pVAX1-HA- IL2)、SL7207(pVAX1-HA-IL18)、SL7207(pVAX1-HA-IFN-γ)、SL7207(pVAX1-HA-CpG)、SL7207(pVAX1-HA)和SL7207(pVAX1)经口服和滴鼻途径首免1日龄商品代伊莎褐蛋鸡,测定免疫鸡的体液和黏膜免疫应答水平,并进行攻毒保护试验。结果二免后3周,SL7207(pVAX1-HA-CpG)、SL7207(pVAX1-HA- IFN-γ)免疫组以及SL7207(pVAX1-HA)和SL7207(pVAX1-IFN-γ)联合免疫组鸡产生了较高水平的特异性黏膜免疫应答(P<0.05),但重组菌免疫鸡血清中抗AIV HI抗体水平与空载体组相比差异无统计学意义。SL7207(pVAX1-HA-CpG)、SL7207(pVAX1-HA-IFN-γ)的免疫保护指数显著高于阴性对照组。结论初步观察佐剂效应依次为:CpG>IFN-γ>IL-18,IL-2未表现出佐剂效应。

关键词：佐剂减毒沙门菌 H5亚型禽流感 DNA疫苗

来源：评论

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禽病原性大肠杆菌的致病机理

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中国家禽 2007年第18期29卷 54-57页

作者：陈祥高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

　　1885年,Escherich氏分离并描述了大肠杆菌(Escherichia coli,***),它构成了所有温血动物大肠中主要的需氧微生物菌群.……

关键词：致病机理 OMP 血清型血清变种禽大肠杆菌病菌毛抗原大肠杆菌败血症分离株禽病原性大肠杆菌致病性菌株

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H3亚型禽流感病毒血凝素特异性单克隆抗体的制备

引用

畜牧与兽医 2007年第8期39卷 20-22页

作者：陈清刘文博郝贵杰刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009

以H3亚型禽流感病毒(AIV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)筛选阳性杂交瘤细胞并克隆化。结果获得了4株针对H3亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体,分别命名为1D7、1F9、5A4、5F5。这些单克隆抗体小鼠... 详细信息

以H3亚型禽流感病毒(AIV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)筛选阳性杂交瘤细胞并克隆化。结果获得了4株针对H3亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体,分别命名为1D7、1F9、5A4、5F5。这些单克隆抗体小鼠腹水HI效价为212～214。用H1、H6、H10亚型禽流感病毒各2株,H4、H5、H9和新城疫病毒(NDV)各1株进行特异性试验。结果表明:所有这些单抗仅与H3亚型AIV发生特异性HI反应,而不与其他亚型AIV及NDV反应。用28株H3亚型禽流感病毒进行排谱试验,结果证明:4株单抗均具有广谱性,其中1F9、5A4、5F5与受试的28株H3亚型AIV均反应,而1D7只与其中的26株反应。以上单抗将为控制畜禽及人类的流感提供必需的诊断试剂。

关键词： H3亚型禽流感病毒单克隆抗体血凝抑制试验

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