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第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会

作者：李文杰高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

应用复合PCR方法,对18头PCV-2阳性猪病料的心、肝、脾、肺、肾、脑、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体进行检测,结果有7头PCV-2阳性猪的各个脏器都能检测出PCV-2;在这些脏器中,肺、腹股沟淋巴结、扁桃体的检出率都为100%,较其他受检... 详细信息

应用复合PCR方法,对18头PCV-2阳性猪病料的心、肝、脾、肺、肾、脑、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体进行检测,结果有7头PCV-2阳性猪的各个脏器都能检测出PCV-2;在这些脏器中,肺、腹股沟淋巴结、扁桃体的检出率都为100%,较其他受检脏器更适合作为PCV-2的检测样品。

关键词： PCV-2 复合PCR方法脏器检测

来源：评论

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一种细胞因子检测新方法:ELISPOT技术

一种细胞因子检测新方法:ELISPOT技术

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：张辉潘志明焦新安扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

抗原特异性细胞毒T细胞在控制病毒感染和某些肿瘤中具有重要作用,如何准确的定量、定性抗原特异的T细胞反应及评价其作用,是细胞免疫学中的一项重要课题。ELISPOT技术是近年来正为众多研究者所认可的一项通过检测细胞因子,评价T淋巴细... 详细信息

抗原特异性细胞毒T细胞在控制病毒感染和某些肿瘤中具有重要作用,如何准确的定量、定性抗原特异的T细胞反应及评价其作用,是细胞免疫学中的一项重要课题。ELISPOT技术是近年来正为众多研究者所认可的一项通过检测细胞因子,评价T淋巴细胞功能和特异性的新方法。与其它细胞免疫学方法相比较,该法特异性强、灵敏度高、能够直接检测分泌细胞因子细胞,而无需体外扩增。ELISPOT技术对病毒性疾病和肿瘤的发病机制、及体内细胞免疫功能的了解具有重要的意义,也为这些疾病的细胞免疫治疗提供了理论依据。目前,有研究显示该法不仅用于肿瘤疫苗及其治疗中,而且在细胞内感染微生物、自身免疫性疾病发病机制、治疗等方面均有巨大的发展潜力。

关键词： ELISPOT CTL ASC

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江苏地区猪圆环病毒Ⅱ型流行病学调查

江苏地区猪圆环病毒Ⅱ型流行病学调查

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第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会

应用复合PCR方法,对江苏地区的162份可疑病料进行了检测,结果72份病料为PCV2阳性,17份为PCV1阳性,其中7份同时感染PCV1、PCV2。从发病时间看,以9月至11月发病最多,阳性率高达54.67%。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26.03%和68.... 详细信息

应用复合PCR方法,对江苏地区的162份可疑病料进行了检测,结果72份病料为PCV2阳性,17份为PCV1阳性,其中7份同时感染PCV1、PCV2。从发病时间看,以9月至11月发病最多,阳性率高达54.67%。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26.03%和68.12%。通过流行病学调查,表明该病已在江苏地区呈流行趋势。

关键词：猪圆环病毒Ⅱ型流行病学复合PCR方法

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鸡痘病毒载体复制非必需片段优化及强启动子的筛选

鸡痘病毒载体复制非必需片段优化及强启动子的筛选

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作者：彭大新刘秀梵吴艳涛高崧朱爱华张如宽扬州大学农业部畜禽传染病学重点实验室

以痘苗病毒启动子P7.5调控的-半乳糖苷酶(LacZ)基因为检测基因,分别插入三个复制非必需片段构成重组质粒,脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株282E4感染原代鸡胚成纤维细胞(CEF)单层,蓝斑筛选纯化病毒;将重组病毒感染次代CEF,收获细胞后... 详细信息

标准号: 0501110133

以痘苗病毒启动子P7.5调控的-半乳糖苷酶(LacZ)基因为检测基因,分别插入三个复制非必需片段构成重组质粒,脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株282E4感染原代鸡胚成纤维细胞(CEF)单层,蓝斑筛选纯化病毒;将重组病毒感染次代CEF,收获细胞后制备提取物,检测其中的-半乳糖苷酶的活性,由此得到一个基因表达效率高的复制非必需片段pFPV7s。根据痘苗病毒天然启动子P7.5的结构,人工合成4条寡核苷酸,形成一个早期和一个晚期启动子,将合成的启动子进行不同组合,最终形成10个较有代表性的启动子组合;以P7.5为对照,在其下游分别插入大肠杆菌-半乳糖苷酶基因LacZ,并进一步插入pFPV7s构建成鸡痘病毒转移载体,以同样的方法检测-半乳糖苷酶的活性,得到了表达活性约为p7.5的 3.5倍的LLEE启动子组合。

关键词：鸡痘病毒复制重组质粒构建复制非必需片段启动子 -

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水肿毒素B亚单位基因的克隆与鉴定

水肿毒素B亚单位基因的克隆与鉴定

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作者：倪振亚焦新安高崧彭大新张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点实验室

根据已知大肠杆菌志贺氏菌样毒素II型变异体B亚单位(SLT-IIvB)基因序列,设计并合成3条2对引物,以大肠杆菌O138基因组为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增出204 bp的基因序列及包含一段信号肽的261bp基因序列。将这两段DNA分别克隆... 详细信息

标准号: 0501110149

根据已知大肠杆菌志贺氏菌样毒素II型变异体B亚单位(SLT-IIvB)基因序列,设计并合成3条2对引物,以大肠杆菌O138基因组为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增出204 bp的基因序列及包含一段信号肽的261bp基因序列。将这两段DNA分别克隆进表达性载体质粒PYA3334的EcoR I和BamH I位点之间,经地高辛标记探针进行Southern杂交和酶切分析鉴定,并对两条扩增片段进行序列测定。结果表明,扩增产物的大小与设计相符,扩增与克隆的片段为SLT-IIvB基因的特异性片段。

关键词：基因扩增引物 SLT-IIvB基因基因序列分析

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间接免疫荧光试验(IIF)检测PRRSV方法的应用

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上海畜牧兽医通讯 2005年第1期 18-20页

作者：彭长凌高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

用PRRSVATCCVR - 2 332株人工单独感染了 3头 3周龄仔猪 ,并用PRRSVATCCVR - 2 332株和猪圆环病毒 2型 (PCV2 )联合感染了 2头 3周龄仔猪 ,同时设立了 3头健康对照猪。攻毒后每日记录试验猪体温、采食、临床表现等 ,并用HerdChekIDEXXKi... 详细信息

用PRRSVATCCVR - 2 332株人工单独感染了 3头 3周龄仔猪 ,并用PRRSVATCCVR - 2 332株和猪圆环病毒 2型 (PCV2 )联合感染了 2头 3周龄仔猪 ,同时设立了 3头健康对照猪。攻毒后每日记录试验猪体温、采食、临床表现等 ,并用HerdChekIDEXXKit测其血清抗体。PRRSV +PCV2联合感染猪分别在感染后 1周、3周剖杀 ,PRRSV单独感染猪和健康对照猪分别在感染后 1周、2周和 3周剖杀。对肺组织进行灌洗处理以获得肺泡巨噬细胞 (PAM) ,用PAM进行抹片 ,同时用肺组织直接进行触片作IIF检测。IIF试验结果表明 ,用所获得的 3株单抗均检测到了人工感染猪肺组织中的PRRSV抗原。另外 ,用IIF检测临床疑似PRRS的 7头猪的PAM抹片 ,其中沭阳 2头猪呈现阳性反应。对这 2头猪的肺组织进行病毒分离 ,结果在盲传到第四代时在Marc- 14 5细胞上产生明显的细胞病变 ,进一步证实了所获得的 3株单抗检测临床样品的准确性和可靠性。综合以上试验结果 ,证实了所获得的 3株单抗均可通过IIF试验用于临床检测肺组织中的PRRSV抗原。

关键词：肺组织单抗感染后临床联合抗原对照 PRRSV PCV2 仔猪

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无抗性表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原基因的重组菌构建

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动物医学进展 2005年第7期26卷 45-48,68页

作者：杨健美张小荣高崧韦栋平刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

利用平衡致死系统成功地将构建表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原基因的重组菌BL21(pFSFaeG)中所含氨苄抗性基因敲除,并转化沙门氏菌宿主菌X4550。经过质粒酶切分析和表达产物的SDSPAGE证实,氨苄抗性基因已经成功敲除,并且目的蛋白仍与... 详细信息

利用平衡致死系统成功地将构建表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原基因的重组菌BL21(pFSFaeG)中所含氨苄抗性基因敲除,并转化沙门氏菌宿主菌X4550。经过质粒酶切分析和表达产物的SDSPAGE证实,氨苄抗性基因已经成功敲除,并且目的蛋白仍与谷胱甘肽转移酶相融合,得到有效表达,重组融合蛋白的分子质量约为80ku。经体外连续传代试验,重组菌X4550(pFSFaeG)均能在无抗生素压力下大量扩增并稳定传代,质粒稳定性和蛋白表达稳定性良好。无抗性重组菌的成功构建解决了基因工程疫苗抗性基因潜在危险问题,并有望通过沙门氏菌载体的递送作用,为研制口服疫苗奠定了基础。

关键词：平衡致死系统基因敲除蛋白表达

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禽细胞因子作为免疫佐剂的作用机理研究进展

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中国禽业导刊 2005年第15期22卷 36-37页

作者：薛峰邵卫星姚春峰刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

细胞因子是免疫系统的重要调节因子,病原感染或免疫接种诱导产生的细胞因子决定免疫反应的类型和程度。细胞因子作为一类新型分子免疫佐剂正成为研究热点,本文对几种禽细胞因子的生物学活性与功能作了综述。

关键词：细胞因子免疫佐剂机理研究小分子肽疫苗接种生物学活性免疫球蛋白免疫细胞免疫系统免疫反应

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检测新城疫病毒中和抗体的间接ELISA和竞争ELISA方法的初步建立

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中国兽医杂志 2005年第3期41卷 13-16页

作者：丁炜东曹丽萍张体银刘秀梵张如宽吴艳涛中国水产科学院淡水渔业研究中心扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

鸡新城疫(ND)是由鸡新城疫病毒引起的急性传染病,是对养禽业危害最大的禽病之一.融合蛋白(F)是NDV的主要保护性抗原,对新城疫的免疫保护起着重要的作用.基因工程苗是防治ND的一种新型疫苗,本室在前期研究中,以282E4株鸡痘病毒为载体表达... 详细信息

鸡新城疫(ND)是由鸡新城疫病毒引起的急性传染病,是对养禽业危害最大的禽病之一.融合蛋白(F)是NDV的主要保护性抗原,对新城疫的免疫保护起着重要的作用.基因工程苗是防治ND的一种新型疫苗,本室在前期研究中,以282E4株鸡痘病毒为载体表达了NDV F48E8株的F基因,在SPF鸡上显示了较好的保护效力,但F蛋白激发机体产生的中和抗体用常规的HI试验无法测出抗体效价.ELISA是一种敏感性和特异性都很高的检测方法,目前已应用于多种疾病的检测,商品化的试剂盒业已问世.为此,我们对应用间接ELISA和竞争ELISA方法检测F蛋白的血清抗体进行了初步探索,以期建立一种能够快速、准确检测中和抗体的简便方法.

关键词：间接ELISA 鸡新城疫病毒 NDV F基因 HI试验 SPF鸡禽病中和抗体 ELISA方法保护效力

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H5N1亚型禽流感病毒拯救体系的建立

H5N1亚型禽流感病毒拯救体系的建立

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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：龙进学吴艳涛张小荣王曲直刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

选择一株鸡胚高产的鸭源H5N1亚型禽流感病毒A/Duck/Shandong/093/2004株作为骨架病毒,在完成其全基因组序列测定基础上,设计合成11对引物,分11段扩增病毒的8个基因。通过与线性化的转录载体PHW2000连接,构建了A/SD/04的8个基因的拯救载... 详细信息

选择一株鸡胚高产的鸭源H5N1亚型禽流感病毒A/Duck/Shandong/093/2004株作为骨架病毒,在完成其全基因组序列测定基础上,设计合成11对引物,分11段扩增病毒的8个基因。通过与线性化的转录载体PHW2000连接,构建了A/SD/04的8个基因的拯救载体,经测序获得准确序列的拯救质粒:241、242、243、244、245、246、247和248。用获得的A/SD/04的8质粒与PR8(H1N1)的8个拯救载体进行组合,获得8个均含A/SD/04的HA基因的H5重组流感病毒。重组病毒的鸡胚尿囊液的血凝效价在28-210,EID50在10-8.5-10-9之间,MDT在34hrs-46hrs之间,均与野生A/SD/04(wt A/SD/04)相似。8个重组病毒对6周龄的SPF鸡的静脉接种指数与Wt A/SD/04有明显的差异,原因可能是内部基因组合的不同而影响病毒对鸡的毒力。成功构建的A/SD/04的8个质粒拯救系统,为H5N1的基因功能研究和新型疫苗开发奠定基础。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒八质粒拯救系统病毒拯救重组病毒

来源：评论

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