检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2006年第1期22卷 33-35,47页

作者：陈祥赵娟高崧苗晓青刘静黄莉莉焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的采用PCR方法检测我国江苏等9个省市部分地区分离的1 007株猪源大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI)。方法对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因。同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆... 详细信息

目的采用PCR方法检测我国江苏等9个省市部分地区分离的1 007株猪源大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI)。方法对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因。同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定。结果在分离的猪源大肠杆菌中,LEE毒力岛基因检测结果为:2.2%(22/1 007)的菌株ler和eaeA基因的扩增阳性,0.5%(5/100 7)的菌株eaeA阳性。HPI毒力岛基因检测结果为:10.6%(107/1 007)的菌株irp2和fruA基因扩增阳性,2.1%(21/1007)的菌株irp2阳性;其中有2株irp2和ler基因扩增阳性,有3株irp2、ler和eaeA基因扩增阳性,1株irp2f、yuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性;在128个HPI阳性分离株中,O93和O107血清型菌株分别占定型菌株的15.7%(13/83)和12.0%(10/83)。结论2.7%的猪源大肠杆菌携带LEE,12.7%的菌株携带耶尔森菌HPI,O93和O107为猪源HPI大肠杆菌常见血清型。

关键词：猪源大肠杆菌 O血清型强毒力岛肠细胞脱落位点毒力岛

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利用噬菌体展示肽库筛选和鉴定沙门氏菌O9抗原的模拟表位

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中国人兽共患病杂志 2003年第1期19卷 60-63页

作者：张扬焦新安刘文博潘志明高崧张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的　用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果　经过三轮的亲和筛... 详细信息

目的　用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果　经过三轮的亲和筛选 ,得到了两个能与O9单抗反应的强阳性单克隆扩增物gm6 2和 gm6 8,其序列分别为SHHVRGGGG和YQKWYLPKS。竞争ELISA实验表明 ,10 10转导单位噬菌体 gm6 8对肠炎沙门氏菌与 3- 4 7-O结合的抑制率达到 6 5 % ,而噬菌体 gm6 2的抑制率仅为 2 0 % ,且 gm6 8可以诱导产生针对沙门氏菌O9的抗体 ,而gm6 2则不能。结论　实验结果显示九肽YQKWYLPKS是具有免疫原性的O9抗原模拟表位。

关键词：沙门氏菌 O9抗原模拟表位噬菌体展示肽库

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H5N1亚型禽流感病毒基因重排后毒力的变化

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微生物学报 2008年第6期48卷 745-749页

作者：唐应华吴培培彭大新龙进学张评浒张文俊李彦芳汪文斌刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】为了探讨高致病性禽流感病毒对水禽致病性差异的分子致病机理。【方法】我们对从野鸭分离到的H5N1亚型禽流感病毒的生物学特性进行鉴定,其中A/mallard/Huadong/Y/2003(Y)是对麻鸭无致病性病毒,而A/mallard/Huadong/S/2005(S)是... 详细信息

【目的】为了探讨高致病性禽流感病毒对水禽致病性差异的分子致病机理。【方法】我们对从野鸭分离到的H5N1亚型禽流感病毒的生物学特性进行鉴定,其中A/mallard/Huadong/Y/2003(Y)是对麻鸭无致病性病毒,而A/mallard/Huadong/S/2005(S)是对麻鸭高致病性病毒。利用反向遗传技术构建一系列单个和多个基因组合替换基因重排病毒,并验证重排病毒在麻鸭上的致病力。【结果】研究表明,PB2,PB1,PA(3P),HA单基因以及3P基因组合替换的使S病毒对麻鸭的毒力完全致弱,但相应的基因替换后仅使Y病毒对麻鸭的毒力略有上升。两病毒的其它基因对毒力影响较小。【结论】H5N1亚型禽流感病毒对麻鸭的致病力受多基因调控,且这种调控作用在不同病毒骨架上的影响不一致,强毒受影响程度远比弱毒的大。

关键词： H5N1 致病力反向遗传麻鸭

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共表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒

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微生物学报 2004年第3期44卷 286-290页

作者：韦栋平刘玉良邵卫星卢建红刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用RT PCR扩增出新城疫病毒F4 8E8株融合蛋白 (F)基因 ,将其克隆入pGEM Teasyvector构建重组质粒pGEM TF并进行测序确证。分别从pGEM T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株 (A chicken china F 1 998)血凝素 (HA)基因 ,通过一系列... 详细信息

应用RT PCR扩增出新城疫病毒F4 8E8株融合蛋白 (F)基因 ,将其克隆入pGEM Teasyvector构建重组质粒pGEM TF并进行测序确证。分别从pGEM T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株 (A chicken china F 1 998)血凝素 (HA)基因 ,通过一系列分子生物学操作步骤插入到质粒pFPV7S中的鸡痘病毒基因组复制非必需片段构建重组质粒p7SHF ,其中F基因和HA基因分别由鸡痘病毒启动子PE L和合成启动子PS调控。最后将P1 1 LacZ报告基因表达盒插入质粒p7SHF获得转移载体pFPVHF ,用以转染已预先感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株的鸡胚成纤维细胞 (CEF)。通过在含有X Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化重组病毒。PCR和Southernblot检测证实了F基因和HA基因已插入鸡痘病毒的基因组 ;间接免疫荧光试验结果表明重组病毒能够同时正确表达HA和F蛋白。

关键词：新城疫病毒 H9亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒融合蛋白血凝素

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一株家养野猪源猪圆环病毒2型的分离与鉴定

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微生物学通报 2008年第11期35卷 1760-1763页

作者：王海燕高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用PCR方法从临诊疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)家养野猪病例的淋巴结和脾脏中扩增出预期长度的猪圆环病毒2型(PCV2)的DNA片段,在Dulac细胞中进行分离和培养,扩增全基因组序列后进行同源性分析。结果显示,扩增产物与家猪源参考... 详细信息

应用PCR方法从临诊疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)家养野猪病例的淋巴结和脾脏中扩增出预期长度的猪圆环病毒2型(PCV2)的DNA片段,在Dulac细胞中进行分离和培养,扩增全基因组序列后进行同源性分析。结果显示,扩增产物与家猪源参考毒株的序列同源性均在98%以上,该病毒与家猪源病毒差异不大。

关键词：家养野猪猪圆环病毒2型分离鉴定

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致人腹泻产气荚膜梭菌的分离鉴定与基因分型

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中国人兽共患病杂志 2002年第4期18卷 36-38页

作者：张小荣文其乙刘秀梵焦新安扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的　研究产气荚膜梭菌与我国人群中引起食物中毒的关系。方法　从江苏扬州三家医院采集腹泻病人临床粪便样品进行细菌分离培养与生化鉴定 ,然后根据ＧｅｎｅＢａｎｋ中已发表的产气荚膜梭菌毒素基因序列 ,设计出针对ｃｐａ、ｃｐｂ、... 详细信息

目的　研究产气荚膜梭菌与我国人群中引起食物中毒的关系。方法　从江苏扬州三家医院采集腹泻病人临床粪便样品进行细菌分离培养与生化鉴定 ,然后根据ＧｅｎｅＢａｎｋ中已发表的产气荚膜梭菌毒素基因序列 ,设计出针对ｃｐａ、ｃｐｂ、ｅｔｘ、ｉＡ、ｃｐｅ和ｃｐｂ2的 6对引物 ,应用多重ＰＣＲ方法对鉴定出的产气荚膜梭菌进行基因分型。结果　从 40份样品中分离到 8株 (占 2 0 %)产气荚膜梭菌 ,分型结果均为Ａ型 ,其中 4株还扩增出ｃｐｂ2基因。结论　产气荚膜梭菌是致人类腹泻的重要病原菌 ,

关键词：腹泻产气荚膜梭菌分离鉴定基因分型多重PCR

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SPF鸡人工感染禽源大肠杆菌、H9亚型禽流感病毒后的体液免疫应答和死亡率分析

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畜牧兽医学报 2006年第9期37卷 899-902页

作者：高璐胡仁莉陈祥盛瑜刘静高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

SPF鸡经不同顺序、不同时间间隔人工感染MPAIV和***173株(O4)后,对试验鸡的病死率和针对大肠杆菌不同抗原体液免疫应答水平等进行研究。结果表明:各混合感染组试验鸡病死率明显高于单独接种组,且以先接种MPAIV再接种***组死亡率最高;各... 详细信息

SPF鸡经不同顺序、不同时间间隔人工感染MPAIV和***173株(O4)后,对试验鸡的病死率和针对大肠杆菌不同抗原体液免疫应答水平等进行研究。结果表明:各混合感染组试验鸡病死率明显高于单独接种组,且以先接种MPAIV再接种***组死亡率最高;各混合感染组试验鸡针对***和LPS的抗体水平低于单独感染***组,其中又以先接种MPAIV再接种***组为最低,提示MPAIV和***间存在协同致病作用,这种协同机理可能与因MPAIV的感染导致一定程度的免疫抑制并进而促进了***在体内的定居与繁殖有关。

关键词： SPF鸡大肠杆菌低致病性禽流感病毒协同致病免疫抑制

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3株表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒的免疫效力比较

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畜牧兽医学报 2010年第1期41卷 60-64页

作者：王彦红陈素娟刘武杰仇旭升董丽彭大新刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

作者旨在探讨鸡痘病毒ORF073或ORF214基因缺失后,在母源抗体存在情况下对重组病毒免疫效力的影响。将构建好的在ORF073或ORF214基因插入H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)及单表达H5亚型AIV HA基因... 详细信息

作者旨在探讨鸡痘病毒ORF073或ORF214基因缺失后,在母源抗体存在情况下对重组病毒免疫效力的影响。将构建好的在ORF073或ORF214基因插入H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)及单表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-12LSH5A)分别免疫SPF鸡和商品鸡,检测重组疫苗诱导的免疫效力。结果:3种重组鸡痘病毒在SPF鸡产生较高的HI抗体效价及100%的免疫保护;在HI母源抗体效价为2.45的商品鸡体内基因缺失株重组病毒比rFPVLP-12LSH5A易于清除,抗体上升缓慢而且免疫28 d后HI抗体效价较低,免疫保护率低,分别为16.7%和23.3%;在母源HI抗体效价为0的商品鸡体内基因缺失株重组病毒免疫后产生的抗体效价高,免疫28 d后分别达到3.50和3.17。结果表明在商品鸡体内母源抗体影响下,缺失ORF073或ORF214基因的重组鸡痘病毒的免疫效力降低。

关键词：重组鸡痘病毒 H5亚型AIV 免疫效力

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应用噬菌体肽库技术定位沙门氏菌鞭毛蛋白上属特异性共同抗原表位

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畜牧兽医学报 2003年第2期34卷 183-187页

作者：刘文博焦新安高崧张扬潘志明王芳张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

用生物素标记的沙门氏菌属特异性单克隆抗体de7作为分子探针 ,应用亲和筛选法从噬菌体肽库中筛选该单抗所针对的表位克隆 ,最终进行定位。经三轮筛选后 ,用斑点印迹法检测 ,得到良好的富集效果。通过免疫筛选法从第三轮筛选物中挑取了 ... 详细信息

用生物素标记的沙门氏菌属特异性单克隆抗体de7作为分子探针 ,应用亲和筛选法从噬菌体肽库中筛选该单抗所针对的表位克隆 ,最终进行定位。经三轮筛选后 ,用斑点印迹法检测 ,得到良好的富集效果。通过免疫筛选法从第三轮筛选物中挑取了 2 4个阳性克隆 ,再以斑点印迹、竞争ELISA进一步鉴定阳性克隆 ,证实已获得了沙门氏菌鞭毛属特异性共同抗原的模拟表位。测得的序列为SRRSFTTTE ,将其与沙门氏菌鞭毛蛋白氨基酸序列相比较 ,同源性较小 ,但在不同血清型沙门氏菌鞭毛蛋白氨基酸序列的Ⅰ区高度保守序列中 ,发现 6 1 6 5位氨基酸的RSXXT序列与所得的线性表位有相同的排列 ,而大肠杆菌鞭毛蛋白氨基酸在此段的序列为RAXXT ,且这种序列排列的几率为 1/2 0 5,因此推断该单抗所针对的表位在该区段上。此外 ,以阳性克隆免疫Balb/c小鼠 ,并制备高免血清进行间接荧光检测和竞争ELISA鉴定 ,结果表明其具有优良的免疫原性和高度的特异性 ,这亦为模拟表位疫苗的研究提供了新思路。

关键词：沙门氏菌鞭毛蛋白属共同抗原位表位模拟表位噬菌体肽库表位定位

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鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆与P基因的表达鉴定

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微生物学通报 2004年第2期31卷 37-40页

作者：刘玉良吴艳涛黄勇邵卫星韦栋平刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM Teasy载体 ,再分别亚克隆到真核表达载体pCI neo上 ,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。利用P基因开放性阅读框 (ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点 ,将... 详细信息

将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM Teasy载体 ,再分别亚克隆到真核表达载体pCI neo上 ,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。利用P基因开放性阅读框 (ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点 ,将报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)基因克隆进P基因真核表达重组质粒 ,分别转染COS 1细胞和CEF细胞 ,在倒置荧光显微镜下可见到绿色荧光 ,表明GFP基因已得到表达 ,由此证明P基因也已得到表达。鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆成功。

关键词：鹅新城疫病毒 NP、P和L基因绿色荧光蛋白表达

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